Лейкоцитарная формула здорового человека

Принцип: Микроскопия сухих фиксированных и окрашенных мазков крови с дифференцированием различных форм лейкоцитов.

Реактивы: 1.Иммерсионное масло

2.70% спирт

Специальное оборудование:

1.Микроскоп

2.11- Клавишный счетчик для подсчета лейкоцитарной формулы или счетные машинки СЛ-1

Ход исследования

Подсчет лейкоцитарной формулы проводят с помощью иммерсионной системы микроскопа. В связи с тем, что мазке различные виды лейкоцитов располагаются неравномерно (моноциты и нейтрофилы — преимущественно вдоль верхнего и нижнего продольного края препарата, лимфоциты — ближе к его центру), подсчет лейкоцитарной формулы осуществляют, пользуясь следующими методическими указаниями. Под малым увеличением микроскопа находят край мазка крови вблизи образовавшей щеточки. У продольного края мазка наносят каплю иммерсионного масла, после чего фокусируют плоскость препарата. Наблюдая в окуляр, отступают на 2—3 поля зрения по направлению к середине мазка. Затем продолжают продвижение препарата в том же направлении на 3—5 полей зрения, в каждом из них подсчитывая имеющиеся лейкоциты. Вслед за этим продвигают мазок 3—5 полей зрения вдоль продольного края, меняя правление продвижения мазка под прямым углом, возвращаются к краю мазка, продвигая при этом мазок еще 3—5 полей зрения и так далее. Зигзагообразную линию, по которой продвигают мазок крови, называют линией Меандра:

Подсчет продолжают до тех пор, пока не будет сосчитано 50 % клеток. Затем подсчет продолжают на противоположной стороне мазка, т. е 50 лейкоцитов вверху и 50 лейкоцитов внизу. Так же, как описано выше, при про­тяжении мазка подсчитывают все лейкоциты, обнаруживаемые в поле зрения. Подсчет заканчивают, когда сумма лейкоцитов будет равна 100. Регистрацию лейкоцитов при подсчете производят с помощью счетчика II клавишного СЛ-1, при этом получают общую сумму и количество каждого вида лейкоцитов в процентах. При отсутствии счетчика регистрацию производят с помощью записи на листе бумаги. По вертикали записывают начальные буквы названий лейкоцитов: метамиелоциты (мтмц.), палочкоядерные (п.), сегментоядерные (с.), эозинофильные (э.), базофильные гранулоциты (б.), лимфоциты (лимф.), моноциты (мон.), плазматические клетки (мл.). По мере подсчета лейкоцитарной формулы каждый найденный лейкоцит регистрируют палочкой или точкой, которую ставят в горизонтальном ряду, соответствующем тому или иному виду лейкоцитов. Для облегчения последующего подсчета каждого вида лейкоцитов палочки или точки группируются десятками:

Процентное содержание различных видов лейкоцитов не отражает истинного количества их в 1 л крови, поэтому вычисляют абсолютное содержание лейкоцитов в 1 л крови.. Для этого необходимо знать количество лейкоцитов в I л крови, процентное содержание отдельных их видов, подсчитанных в окрашенном препарате. Абсолютное содержание отдельных видов лейкоцитов в 1 л крови высчитывают, пользуясь следующей пропорцией: а — 100 %, х-б, где а — количество лейкоцитов, подсчитанных в камереГоряева; б — процентное содержание лейкоцитов подсчитанных в мазке крови. Допустим, что количество лейкоцитов, подсчитанных в камере Горяева, составляет 8х 10⁹/л, а количество моноцитов, посчитанных в мазке крови, — 4%. Абсолютное количество моноцитов будет равно:

8х 10⁹/л-100 %

8х 10⁹/л х 4 =0,32 х10⁹/л экземпляров

Х - 4%, х= 100

Морфологические структурные изменения лейкоцитов

при патологии

Структурные изменения в лейкоцитах (токсикогенная зернистость, вакуолизация, пикноз; хроматинолиз, кариорексис, цитолиз) выявляют в окрашенных препаратах крови; некоторые из них могут быть выявлены только в цитоплазме или только в ядре клеток; нередки сочетания различный структурных изменений в лейкоцитах.

Включения Князькова — Деле — крупные голубого цвета комочки, имеющие различную форму и находящиеся в цитоплазму нейтрофильных гранулоцитов.

Тельца Амато — образования округлой формы или в виде запятой, бледно-голубого цвета, содержащие красные или красно-фиолетовые гранулы.

Истощение зернистости проявляется либо уменьшением, либо ее полным исчезновением, что наиболее часто наблюдают в цитоплазме нейтрофильных гранулоцитов, исходящих из воспалительного очага костногоо мозга при его токсическом поражении, леченном хроническом миелоидном лейкозе.

Несоответствие степени созреванияядра и цитоплазмы — может быть выявлено «молодое» ядро в созревшей цитоплазме и, наоборот, зрелое ядро и базофильная цитоплазма в нейтрофильных гранулоцитах, что наблюдают, например, при хроническом миелоидном лейкозе.

Вакуолизация цитоплазмы и ядра в виде небольшого размера бесцветных пятен, количество которых варьирует от единичных до множественных и часто округленных (в нейтрофильных гранулоцитах) гранул.

Пикноз ядра выявляется в виде уплотненного, интенсивно окрашенного базихроматина; ядро или участок ядра уменьшается в размере, становится бесструктурным.

Гиперсегментация ядра — количество сегментов в ядре клетки варьирует от 6 до 10 и более. Помимо мегалобластных анемий, гиперсегментацию выявляют после воздействия химических веществ, проникающего ионизирующего излучения.

Фрагментоз— от участков основного ядра отделяются фрагменты, связанные с ним тонкой нитью базихроматина. Количество фрагментов варьирует от единичных до множественных.

Гипохроматоз— в связи с изменением физико-химической структуры хроматин не окрашивается, остается светлым; контуры ядерной оболочки не выявляются.

Хроматинолиз— в связи с раз­рушением хроматина весь массив ядра или его участок не окрашивается, остается светлым; контуры ядерной оболочки четкие.

Кариорексис—распад ядра на отдель­ные частицы, не связанные между собой; частицы имеют округлую форму, разную величину, большей частью плот­ные, интенсивно окрашенные (пикнотичные).

Кариолиз — разрушение ядра. Обычно на месте ядра или разрушен­ного его участка остается бесструктурное образование.

Анизоцитоз — появление небольших, крупных и гигант­ских клеточных элементов, что наиболее характерно для нейтрофильных гранулоцитов. Лейколиз— разрушение лейкоцита. Термин часто используют для описания раз­рушенных лимфоцитов при хроническом лимфоидном лейкозе.

Цитолиз — разрушение клетки с образо­ванием бесструктурной, бесформенной массы.

Перечисленные выше структурные изменения в лейкоцитах наблюдают при воспалительных ( особенно септических) состояниях , некоторых инфекционных и паразитарных заболеваниях, лейкозах , анемиях и т.д.

Раздел III