Мегаобучалка Главная | О нас | Обратная связь


Окраска по методу Нейссера для выявления зерен волютина



2018-06-29 1698 Обсуждений (0)
Окраска по методу Нейссера для выявления зерен волютина 0.00 из 5.00 0 оценок




СПОСОБЫ ОКРАСКИ НА ВЫЯВЛЕНИЕ БАКТЕРИЙ

Витальный способ окраски

Для витального (прижизненного) крашения применяют 0,2-0,001 % водные растворы метиленового и толуоидинового синего, нейтральрот и конго красный, которые добавляют в придавленную или висячую капли культуры. Этим способом выявляют спирохеты, простейшие, определяют подвижность бактерий, иммунное набухание капсулы, но использование его требует строгого соблюдения правил, исключающих лабораторное заражение.

Поствитальные способы окраски

Способы окраски фиксированных препаратов (поствитальные) разделяют на простыеи сложные. При простых способах красящие растворы фуксина Пфейффера (экспозиция 1-2 мин), щелочного метиленового синего (3-5 мин) наносят на фиксированный препарат, так, чтобы он полностью покрыл мазок, краситель сливают, препарат промывают струйкой воды, встряхивают, высушивают и микроскопируют. Простые способы позволяют судить о величине, форме, локализации, взаимном расположении отдельных клеток, но с их помощью нельзя установить структуру микробов и часто их дифференцированное отношение к красителям.

 

Из сложныхспособов окрашивания бактерий в основном используют дифференцированный способ Грама, выявление кислотоустойчивости по Цилю — Нельсону, определение волютиновых зёрен по Леффлеру или Нейссеру, дифференцирующий способ Романовского — Гимзы, негативно-позитивный способ определения капсулы по Гинсу — Бурри, выявление спор по Пешкову или Цилю — Нельсону и др. Для окраски простейших применяют способ Романовского —Гимзы. Грибы исследуют неокрашенными или способами Грама, Циля — Нельсона, Леффлера, Романовского — Гимзы, а также раствором Люголя и др.

Окраска по методу Романовского-Гимза

Краска Романовского-Гимза состоит из смеси азура, эозина и метиленовой сини. Непосредственно перед употреблением к 10 мл дистиллированной воды нейтральной или слабо щелочной реакции (pH 7,0 – 7,2) прибавляют 10 капель коммерческого красителя Романовского-Гимза. Приготовленный раствор краски тотчас же наливают на фиксированный мазок или лучше предметное стекло с окрашиваемым препаратом погружают в стаканчик с краской. Через 1 ч краску сливают, препарат промывают водой и высушивают на воздухе.

Окрашивание по Романовскому — Гимзе — цитологический метод окрашивания микроорганизмов, клеточных структур и тканей различных видов (в том числе крови) для изучения методом световой микроскопии.

Предложена в 1904 году Густавом Гимзой. (Раствор Гимзы для окраски по Романовскому).

 

Приготовление красителя

Готовый жидкий краситель перед окрашиванием мазков разводят из расчета 1-2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Мазки окрашивают 20 — 25 минут при 37 °C во влажной камере (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). После окрашивания мазки промывают в проточной воде, сушат на воздухе и исследуют при масляной иммерсии.

 

Специальный стандартный раствор Гимза

Состав красителя:

Азур 1 — 3,772 г

Эозин — 2,165 г

Метиленовая синька — 1,563 г

Метанол (ЧДА) — 750,0 мл

Глицерин (ЧДА) — 256,0 мл

 

Краска Романовского-Райта

азур І, азур ІІ, метилен фиолетовый и метиленовый синий . Затем добавляется эозин для получения “нейтрального” красителя. Осадок затем растворяется в смеси метилового спирта и глицерина для получения хранимого раствора. Последний разводится водой для получения рабочего раствора при приготовлении образцов патологического материала.

_________________________________________________________________________________

Краситель Романовского сочетает в своем составе эозин — азуром ІІ.

Краситель Романовского является прототипом ряда других красителей, которые применяют для исследования гистологических препаратов крови и костного мозга, для обнаружения паразитов крови, таких как малярия, а также при широком круге других патологических состояний. Окрашивание красителем Романовского-Райта удобнее, чем окрашивание гематоксилином (гистологический краситель, получаемый из эфирного экстракта кампешевого дерева) и эозином, так как позволяет дифференцировать различные типы лейкоцитов.

По причине того, что водные растворы красителей не были устойчивыми, в 1901 году Лейшман и в 1902 году Райт предложили применение метилового спирта в качестве фиксатора перед окрашиванием. В 1904 году Гимза улучшил эту методику путем стандартизации растворов красителя и добавления глицерина для увеличения растворимости и стабильности.

_________________________________________________________________________________

Окраска по методу Нейссера для выявления зерен волютина

  1. Фиксированный на пламени горелки мазок окрашивают 1 – 2 мин. синькой Нейссера.
  2. Синьку сливают, на препарат наносят несколько капель раствора Люголя на 1 мин.
  3. Мазок промывают водой, подсушивают фильтровальной бумагой.
  4. Докрашивают в течение 2 мин. раствором хризоидина или 1 – 3 мин. раствором везувина.
  5. Промывают водой, подсушивают и микроскопируют.

Зерна волютина окрашиваются в синий цвет, тела микробных клеток – в светло-коричневый цвет.

 

( Волютин - один из типов включений. Непостоянно присутствует у коринебактерий, спирилл, дрожжей. Представляет собой запасной питательный материал в виде комплексов РНК с метаполифосфатами. Выявление В. применяют для идентификации коринебактерий дифтерии, у к-рых В. располагается в виде зерен по концам бактерий. Обнаруживают В. окраской по Нейссеру или Леффлеру )

 



2018-06-29 1698 Обсуждений (0)
Окраска по методу Нейссера для выявления зерен волютина 0.00 из 5.00 0 оценок









Обсуждение в статье: Окраска по методу Нейссера для выявления зерен волютина

Обсуждений еще не было, будьте первым... ↓↓↓

Отправить сообщение

Популярное:
Модели организации как закрытой, открытой, частично открытой системы: Закрытая система имеет жесткие фиксированные границы, ее действия относительно независимы...
Генезис конфликтологии как науки в древней Греции: Для уяснения предыстории конфликтологии существенное значение имеет обращение к античной...
Почему человек чувствует себя несчастным?: Для начала определим, что такое несчастье. Несчастьем мы будем считать психологическое состояние...



©2015-2020 megaobuchalka.ru Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. (1698)

Почему 1285321 студент выбрали МегаОбучалку...

Система поиска информации

Мобильная версия сайта

Удобная навигация

Нет шокирующей рекламы



(0.01 сек.)