АГГЛЮТИНАЦИОННЫЕ ТЕСТЫ

Цель занятия.

1. Ознакомиться с сущностью агглютинационных тестов, применением её в лабораторной практике, получением и подготовкой компонентов;

2. Освоить методику постановки реакции агглютинации (РА) классическим объемным (пробирочным) и капельным методами.

Материалы и оборудование.Аппарат Флоринского для разлива сыворотки крови, пробирки агглютинационные (бактериологические) с ровным сферическим дном, пипетки градуированные на 1 и5 мл, стерильные пастеровские пипетки и штативы, сыворотка крупного рогатого скота позитивная (бруцеллезная), сыворотка нормальная (здорового) крупного рогатого скота (часть пробирок с нормальной и позитивной сыворотками нумерована - шифр для исследования, другая часть для контроля остается под названием «позитивная» и «нормальная», антиген для РА (единый бруцеллезный), пробирки с физраствором NaCl, резиновые груши. Для демонстрации необходимы таблицы, пробирки с положительной и отрицательной РА, пробирки с кольцевой положительной и отрицательной реакцией с молоком (КР).

Методические указания.В основе всех серологических реакций лежит иммунологическое взаимодействие между антигенами и антителами, в результате чего образуется комплекс антиген - антитело.

Антигены - генетически чужеродные вещества, которые при введении в организм животного (и человека) вызывают специфическую перестройку лимфоретикулярной ткани, сопровождающуюся продукцией (выработкой) антител. Различают антигены корпускулярные, или клеточные (бактерии, эритроциты), и раствори мые (молекулярно- дисперсные). Антигены поливалентны - имеют несколько детерминант них рецепторов для связи с антителами и способны вступать в реакцию с ними как в организме животного (in vivo), так и вне организма - в пробирке (in vitro).

Антитела - высокомолекулярные белки глобулиновой фракции сыворотки крови (иммуноглобулины). По проявлению феномена взаимодействия между антигеном и антителами in vitro различают: осадочные (прямые) реакции, лизирующие и нейтрализующие. Антитела, участвующие в осадочных реакциях, получили название по своему взаимодействию с антигеном:

• агглютинины - вызывают склеивание корпускулярного антигена - агглютиногена и осаждение комплекса антиген - антитело (агглютината);

• преципитины - образуют преципитат с растворимым антигеном - преципитиногеном.

В реакциях лизиса участвуют антитела бактериолизины и гемолизины, обусловливающие распад корпускулярного антигена. Нейтрализующие антитела обезвреживают токсическое действие антигена (токсина).

Осадочные серологические реакции протекают в две фазы:

• первая фаза - специфическая, невидимая простым глазом, при ней происходит образование комплекса антиген - антитело,

• второй фазе - неспецифической (физико-химической) - проявляется конечный эффект - видимый результат, осаждение агглютината.

Иммунологические методы используются как для выявления количества или титра антител в сыворотке крови (серодиагностика), так и для обнаружения антигенов в биологических жидкостях (индикация).

Общие закономерности иммунологических методов (ИМ):

• исследование проводится in vitro;

• проявляются при иммунологическом соответствии (гомологичности) антигена и антитела;

• протекают в две фазы (невидимая и видимая).

Для количественной характеристики иммунологических методов исследования используют такие понятия, как чувствительность и специфичность.

Число положительных

реакций у истинных больных

Число обследованных больных

с подтвержденным диагнозом

Число отрицательных реакций в контрольной группе

Число обследованных в контрольной группе

В идеале чувствительность и специфичность иммунологических методов приближается к 100 %.

Все иммунологические методы можно разделить на три группы:

1) основанные на прямом взаимодействии антигена с антителом (феномены агглютинации, преципитации, гемагглютинации, иммобилизации и др.);

2) основанные на опосредованном взаимодействии антигена с антителом (реакции непрямой гемагглютинации, коагглютинации, латекс-агглютинации, угольной аггломерации, бентонитагглютинации, связывания комплемента и др.);

3) с использованием меченых антител или антигенов (флюоресцирующих антител, иммуноферментного, радиоиммунного анализов и других методов).