Мегаобучалка Главная | О нас | Обратная связь

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам





Метод дисков

Бумажные диски, пропитанные определенными антибиотиками, поме­щают на газон исследуемой бактериальной культуры в чашке Петри, По­севы инкубируют в течение 16-24 часов, после чего учитывают результаты опыта по образованию зон задержки роста бактерий.

По диаметру зон задержки роста ориентировочно судят о степени чувствительности бактерий к антибиотикам. Зона задержки роста до 15 мм указывает на слабую, до 25 мм - на среднюю и свыше 25 мм - на вы­сокую чувствительность. Более точные результаты получают при исполь­зовании метода серийных разведений.

Метод серийных разведений

Этот метод позволяет определить минимальную задерживающую концентрацию антибиотика для данного микроорганизма (МЗК) как на жидких, так и на плотных питательных средах.

МПБ разливают по 2 мл в серию пробирок. Готовят основной раствор антибиотика, для чего берут навеску антибиотика и растворяют в дис­тиллированной воде из расчета 1 мг антибиотика на мл растворителя.

Левомицетин предварительно растворяют в 96° этиловом спирте из расчета 0,25 мл спирта на 1 мг антибиотика; после полного растворе­ния добавляют такое количество дистиллированной воды, чтобы раствор содержал в 1 мл 1 мг антибиотика.

Тетрациклин и окситетрациклин растворяют в сантинормальном раст­воре соляной кислоты из расчета 1 мл на 1 мг антибиотика.

Эритромицин сначала растворяют в чистом метиловом спирте из расчета 1 мл на 10 мг эритромицина. После растворения добавляют такое количество дистиллированной воды, чтобы получить раствор, содержа­щий в 1 мл 1 мг антибиотика.

Исходный раствор антибиотика в количестве 2 мл вносят в первую пробирку с МПБ, перемешивают и получают определенную его концентра­цию.

Из первой пробирки 2 мл разведенного антибиотика переносят во вторую пробирку и после перемешивания переносят 2 мл в третью пробирку и т.д. до предпоследней, откуда 2 мл выливают. Последняя пробирка является контролем, в ней нет антибиотика и она свидетельству­ет о пригодности среды для роста культуры.



После разведения антибиотика во все пробирки вносят по 0,1 мл испытуемой бульонной культуры. Для этого используют 3-4-часовые или 18-часовые культуры, разведенные МПБ в 50 раз.

Пробирки помещают в термостат на 12-18 часов, но предваритель­ные результаты можно учитывать через 6-8 часов.

По истечении необходимого срока инкубации определяют максималь­ное разведение антибиотика, которое еще подавляет рост культуры. Концентрация антибиотика в последней пробирке с видимой задержкой роста и представляет собой минимальную задерживающую концентрацию антибиотика (МЗК).

Штамм считается чувствительным к антибиотикам, если МЗК препа­рата для данного штамма соответствует концентрации этого препарата, создаваемой в организме.

 

 

ЗАНЯТИЕ 3

Дата__________________

 

Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ КОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ

(окончание).

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ ОСОБО ОПАСНЫХ ИНФЕКЩЙ (бруцеллез).

План занятия

А. Микробиологический диагноз кок­ковых инфекций (окончание).

I. Регистрация результатов определения чувствительности стафи­лококков к антибиотикам. .

Б. Микробиологический диагноз особо опасных инфекций (бруцеллез).

1.Приготовление, окраска и микроскопия препаратов-мазков из убитых культур бруцелл.

2.Бактериологическая диагностика бруцеллеза. Выделение гемокультуры (разбор).

3.Серологическая диагностика бруцеллеза. Реакция Райта.

4.Ускоренный метод серологической диагностики бруцеллеза -реакция Хеддлъсона и др.

5.Опсоно-фагоцитарная реакция.

6.Аллергическая диагностика бруцеллеза.Постановка пробы Бюрне.

7.Демонстрация препаратов, применяемых для диагностики, профилактики и лечения бруцеллеза (диагностикум, бруцеллин, профилактическая и лечебная вакцины).

 

Методические указания

А. Микробиологический диагноз кок­ковых инфекций (окончание):

§ 1. Измерить и записать в таблицу диаметр зоны задержки роста стафилококка каждым антибиотиком. Сформулировать и записать вывод о степени чувствительности выделенной культуры к различным антибиоти­кам.

Б. Микробиологический диагноз осо­бо опасных инфекций (бруцеллез).

§ 1. Приготовить, окрасить по Граму и промикроскопировать пре­парат из убитой культуры бруцелл. Обратить внимание на размеры микроорганизмов.

§ 3. Поставить реакцию Райта с сывороткой больного бруцеллезом по классической схеме пробирочной реакции агглютинации (см. Часть I, занятие 10-е). Диагностический титр реакции Райта - 1:200.

§ 4. На стекле размечают карандашом 4 квадрата размером 3x3 см каждый. Микропипеткой наносят в квадраты капли сыворотки объемом 0,04, 0,02 и 0,01 мл,в последний квадрат одну каплю (0,03 мл) физиологического раствора (контроль) . В каждую каплю другой микропипет­кой добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума. Перемешивают капли стеклянной палочкой пли петлей, начиная с контрольной капли и идя от меньших количеств сыворотки к большим. Слегка подогревая и покачивая стекло, наблюдают за появлением агглютинации, которая должна наступать в течение 5 минут.

Оценке реакции: агглютинация только в первой капле - реакция сомнительная; агглютинация в первой и второй каплях - реакция положительная; агглютинация во всех трех каплях - реакция резко положи­тельная.

Примечание:Реакция Хеддльсона имеет только ориентировочное значение. В случае ее положительного результата необходимо ставить реакцию Райта и аллергическую пробу Бюрне.

Зарисовать реакцию Хеддльсона с указанием доз сыворотки в каждой капле.

§ 6. Реакция Бюрне. Техника постановки реакции:

а) стерильным тампоном, смоченным спиртом, тщательно дезинфицируют кожу на границе верхней и средней трети передней поверхности предпдечъя;

б) в шприц с делениями по 0,1 мл и о тонкой иглой набирают бруцеллин (обратить внимание на внешний вид, данные этикетки и срок годности препарата!) ;

в) держа шприц по возможности параллельно поверхности кожи, вводят иглу внутрикожно. Для этого необходимо держать иглу срезом вверх и толчкообразными движениями насаживать на нее кожу. Когда срез иглы скроется в коже, иглу поворачивают срезом вниз и, осторожно нажимая на поршень, вводят содержимое шприца в кожу (0,1 мл бруцеллина). На месте инъекции должен образоваться небольшой белый волдырь, указывающий на правильное введение препарата;

г) реакцию учитывают дважды: через 24 и 48 часов. В случае положительной реакции (наличие отека и гиперемии) миллиметровой линейкой измеряют размер отека (длина и ширина).

 

Регистрация чувствительности к антибиотикам выделенной культуры стафилококка.

Антибиотик Пенициллин Стрептомицин Левомицетин Тетрациклин
Диаметр зоны задержки роста (в миллиметрах)        

Вывод:___

 

Рис.1 Бруцеллы Окраска по Граму.

 

Реакция Хеддльсона

Номер капли
Доза сыворотки        
Результат        

Заключение____________________________

 

Контрольные вопросы

Какие виды бруцелл вызывают бруцеллез у человека?

Каковы основные хозяева бруцелл соответствующих видов?

Каковы морфология и культуральные свойства различных видов бруцелл?

Какие свойства бруцелл используются для классификации их на вида и биотипы?

Какой из видов бруцелл наиболее патогенен для человека?

Каковы пути заражения бруцеллезом?

Какие микробиологические методы применяются для диагностики бруцеллеза?

Какой берется от больного материал для выделения возбудителя бруцеллеза? Как осуществляется выделение возбудителя из разного ма­териала?

Какими методами осуществляется серологическая диагностика бру­целлеза? Какова техника постановки серологических реакций?

Каково диагностическое значение реакции Хеддльсона?

Как производится оценка реакции Райта? Какова ее диагностиче­ская ценность?

Как производится опсоно-фагоцитарная реакция?

Как ставится аллергическая проба Бюрне? Через сколько времени и как производится ее оценка?

С какого дня заболевания рекомендуется ставить реакцию Райта и пробу Бюрне?

Что такое бруцеллин и как его получают?

Как производится специфическая профилактика бруцеллеза? Как производится отбор лиц, подлежащих специфической вакцинации?

Какие категории работников подвергаются специфической профи­лактике в первую очередь?

В чем заключается принцип вакцинотерапии бруцеллеза?

Какова методика постановки реакции Кумбса? (см. Часть I, заня­тие 12).

 

Методы микробиологической диагностики бруцеллеза.

А. Бактериологический

Рис.2 СХЕМА

Б. Биологический

Рис.3 СХЕМА

В. Серологический

Для диагностики бруцеллеза используются следующие серологические реакции:

 





Читайте также:


Рекомендуемые страницы:


Читайте также:
Почему двоичная система счисления так распространена?: Каждая цифра должна быть как-то представлена на физическом носителе...
Организация как механизм и форма жизни коллектива: Организация не сможет достичь поставленных целей без соответствующей внутренней...

©2015-2020 megaobuchalka.ru Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. (474)

Почему 1285321 студент выбрали МегаОбучалку...

Система поиска информации

Мобильная версия сайта

Удобная навигация

Нет шокирующей рекламы



(0.01 сек.)