Трактовка результатов

Оборудование:

1. Два комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток I (0), II(А), III(В) групп двух различных серий и одна ампула сывороток IV (АВ);

2. Сухие чистые пипетки

3. Изотонический раствор хлорида натрия 0,9 %.

4. Сухая тарелка.

5. Скарификаторы

6. Стерильные марлевые шарики

7. Спирт

8. Стеклянные палочки

 

Условия:

1. Определение проводится в помещении с хорошим освещением, при температуре от 15 до 25º

2. Ампулой стандартной сыворотки без этикетки пользоваться запрещается

 

Ход работы:

 

1. На белую тарелку поместить по 1 крупной капле сыворотки I, II, III, IV группы в соответствующий сектор в двух сериях.

2. Обработать спиртом и проколоть палец стерильным скарификатором. Первую каплю снимают марлевым шариком. Последующие капли при помощи стеклянных палочек помещают рядом с каждой каплей сыворотки. При этом капля вносимой крови должна быть в 5-10 раз меньше капли сыворотки.

3. При помощи разных стеклянных палочек перемешать каплю крови и сыворотки

4. Слегка покачивая тарелку наблюдать за появлением реакции агглютинации 3 мин.

5. Затем в каждую каплю добавить по 1 капле изотонического раствора хлорида натрия 0,9 %.

6. Наблюдать за реакцией еще 2 мин. (всё наблюдение длится 5 мин.). После всего делаем вывод о групповой принадлежности.

 

Результаты:

1. Все 3 сыворотки в обеих сериях не дают реакции агглютинации. Исследуемая кровь - I (0)

2. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой II(А) группы обеих серий и положительная с сыворотками I (0) и III (В) групп. Исследуемая кровь – II (А)

3. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой группы III (В) обеих серий и положительная с сыворотками I (0) и II (А) групп. Исследуемая кровь – III (В)

4. Сыворотки I (0), II (А), III (В) дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит IV (АВ) группе.

5. Прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой IV (АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к IV (АВ) группе.

 

Техника определения групп крови

С помощью цоликлонов Анти-А, Анти-В, Анти – АВ

Оборудование:

1. Эритротест^тм - цоликлоны Анти-А, Анти-В, Анти – АВ

2. Сухие чистые пипетки

3. Изотонический раствор хлорида натрия 0,9 %.

4. Сухая тарелка.

5. Скарификаторы

6. Стерильные марлевые шарики

7. Спирт

8. Стеклянные палочки

Ход работы:

 

1. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны Анти – А, Анти – В и Анти АВ по одной большой капле (0,1мл.) под соответствующими надписями.

2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03мл.)

3. Смешайте кровь с реагентом.

4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при лёгком покачивании пластины или планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин. ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами

5. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Определение резус–фактора – Rh₀ (D) реакцией конглютинации с применением 10 % раствора желатина.

1. В 2 пробирки вводят по одной капле (0,05 мл.) исследуемых эритроцитов и по 2 капли 10 % раствора желатина, подогретого до разжижения в тёплой воде (46 – 48⁰ С).

2. В одну из этих пробирок к смеси эритроцитов и желатина добавляют 2 капли сыворотки анти-резус. В другую пробирку эту сыворотку не добавляют; она служит контролем для исключения возможности проявления аутоагглютинации испытуемых эритроцитов.

3. Кроме того, для контроля параллельно исследуют стандартные резус-положительные эритроциты той же группы или группы 0(I) и резус-отрицательные эритроциты, одногруппные с испытуемой кровью.

4. Содержимое пробирок перемешивают путём встряхивания и помещают пробирки в водяную баню при 46-48⁰ С на 10 мин. или в суховоздушный термостат при той же температуре на 30 мин.

5. После инкубации в пробирки добавляют по 5-8 мл. изотонического раствора хлорида натрия, перемешивают содержимое путём перевёртывания пробирок 1-2 раза и оценивают результат.

 

Трактовка результатов.

1. Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу с двукратным увеличением. Результат трактуют в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации эритроцитов.

2. При положительном результате агглютинация легко различимы в виде красных зёрен или хлопьев на прозрачном, почти обесцвеченном фоне жидкости.

3. При отрицательном результате в пробирке видна равномерно окрашенная в розовый цвет, слегка опалесцирующая жидкость.

4. Образцы эритроцитов, вызвавшие агглютинацию с сывороткой антиRh ₀ (D), являются резус положительными (Rh+),образцы эритроцитов, не давшие агглютинации с сывороткой анти-Rh₀(D), - резус-отрицательными (Rh -).

 

Результат учитывают как истинный при наличии агглютинации со стандартными резус-положительными эритроцитами, в отсутствие агглютинации с резус-отрицательными эритроцитами, а также в отсутствие агглютинации (аутоагглютинации) в контрольной пробирке, в которую были помешены только эритроциты и желатин, но не добавлена сыворотка анти-резус.

 

Определение резус-фактора Rh₀(D) при помощи стандартного универсального реагента с 33% раствором полиглюкина.

1. В пробирку вводят одну каплю (0,05 мл.) исследуемой крови или эритроцитов (можно не отмывать от консерванта), добавляют 2 капли стандартного универсального реагента анти-резус и перемешивают эритроциты с реагентом путём встряхивания пробирки.

2. Пробирку наклоняют почти до горизонтального положения так, чтобы содержимое растеклось по её стенкам, а затем медленно поворачивают в таком положении вокруг горизонтальной оси, осуществляя контакт эритроцитов с реагентом анти-резус в течение 3 мин. Это способствует агглютинации эритроцитов.

3. Как правило, агглютинация наступает в течение 1-й минуты, но для более четкого проявления её и образования устойчивого комплекса, а также ввиду возможности замедленной реакции при слабо выраженной агглютинабельности эритроцитов контакт эритроцитов с реагентом следует проводить не менее 3 мин.

4. По истечении 3 мин. для исключения неспецифической аггрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл. изотонического раствора хлорида натрия и перемешивают содержимое (не взбалтывая!), 2-3 раза переворачивая пробирку.