Диагностика заболевания. Дифференциальный диагноз

Важным условием профилактики и борьбы с лейкозами крупного рогатого скота является своевременна достоверная диагностика и изоляция больных и подозрительных в заболевании животных.

Диагностика лейкозов осуществляется клиническими, гематологическим, серологическими, патологоанатомическим и гистологическим методами. Наибольшую значимость для своевременной локализации и предотвращения распространения лейкозов имеет ранняя диагностика при первичном установлении заболевания. В этих случаях надежность диагностики обеспечивается применением комплекса специальных приемов, комиссионных убоев, патологоанатомической экспертизы, гистологических исследований органов и тканей и эпизоотологического анализа [12].

Прижизненный диагноз ставят на основании клинических данных и результатов лабораторного исследования цельной крови и сыворот­ки крови.

В настоящее время выявление инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота животных осуществляют с помощью следующих методов:

1.Комплекса серологических реакций;

2.Обнаружение вируса или его антигенов.

До 1986 года в СССР единственным тестом прижизненной диаг­ностики лейкоза крупного рогатого скота был гематологический метод, сущность которого заключается в обнаружении в периферической крови повышенного количества лейкоцитов, в основном лимфоидного ряда, и слабо дифференцированных клеток (родоначальных пролимфоцитов, лимфобластов), а также полиморфных, атипичных клеток кровет­ворных органов [13].

На этой основе для диагностики лимфоидного лейкоза был разработан "лейкозный ключ", в основе которого положены: число и % Лимфоцитов для двух возрастных категорий крупного рогатого скота - до 3-х лет и старше 3-х лет. В последующем, на основе совершенство­ваний этого метода в различных странах предложено II «лейкозных ключей»: гановерский, стокгольмский, копенгагенский, кильский, чехословацкий, нижнесаксонский, геттингентский, румынский, комбиниро­ванный (гетце-бендиксен), вустерхаузенский и эйнаттенский [11].

Все "лейкозные ключи" основаны на количественных показателях лимфоидных форм лейкоцитов в единице объема крови, которые можно считать критерием заболевания животных лейкозом. Отличительной стороной применяемых в мире " ключей" является лишь степень жесткости диагностических критериев.

В гематологии принято различать лейкемическую, сублейкемическую и алейкемическую формы лейкоза. Случаи с особо высоким количеством лейкоцитов (100000 и более) называют гиперлейкемическими, а с количеством лейкоцитов ниже нормы - лейкопеническими. [11].

Однако использование гематологического метода позволяло обнаруживать только животных с изменениями крови и морфологическими проявлениями лейкоза. Из-за вариабельности крови у молодых животных их гематологически исследовать на лейкоз начинают с 2-х летнего возраста, в то время как он у животных проявляется в любом возрасте.

В связи с этим при использовании гематологического метода диагностики в системе противолейкозных мероприятий в неблагополучном по лейкозу стаде длительное время (исследование крови на лейкоз проводят 2 раз в год при 2-3х месячной продолжительности инкубационного периода), передерживаются животные, находящиеся в стадии скрытого вирусоносительства [11].

Кроме этого гематологический метод отличается трудоемкостью. В течение рабочего дня производительность труда специалиста, связанного с полным гематологическим исследованием (подсчет общего количества лейкоцитов а единице объема крови и выведение лейкоци­тарной формулы) на лейкоз, ограничивается 22-25 животными [12].

В настоящее время основным методом прижизненной диагностики лейкоза является серологический: реакция иммуннодиффузии в агаровом геле РИД. Гематологический и клинический методы используются для установления стадии полного развития заболевания у серопозитивных животных.

РИД в качестве диагностического теста при лейкозе используют на крупном рогатом скоте, начиная с 4-6 месячного возраста. Она отличается простотой в применении, высокой чувствительности и экономичностью. С ее помощью в сыворотке крови зараженных вирусом лейкоза крупного рогатого скота животных обнаруживают специфические антитела, индуцированные вирусом лейкоза крупного рогатого скота, в виде линий преципитации. Выявление этих антител свидетельствует о персистенции вируса лейкоза крупного рогатого скота в организме крупного рогатого скота. Серопозитивнее состояние животного не коррегирует с гематологическим и опухолевым проявлениями лейкоза [13].

РИД выявляет зараженных животных на всех стадиях инфекционного процесса, за исключением инкубационного периода.

Нахмансон В. М. и др. (1991) пришли к заключению, что РИД обеспечивает оздоровление хозяйства от лейкоза крупного рогатого скота независимо от стадии проявления инфекционного процесса, уровня эпизоотической напряженности по лейкозу крупного рогатого скота, технологии ведения и продуктивной результативности молочного скотоводства, обеспеченности животноводческими объектами и др.

Однако РИД также имеет свои недостатки (например, выпадение серологического ответа). Установлено, что среди инфицированных животных дойного стада постоянно имеются особи, сыворотка крови которых отрицательно реагирует в РИД. Они служат скрытым источником инфекции в оздоравливаемом стаде [13].

Выпадение, серологической реакции затрудняет своевременное выявление и изолирование источника инфекции и тем самым удлиняет сроки оздоровления неблагополучных по лейкозу стад. Многие отечественные и зарубежные исследователи объясняют выпадение серологической реакции передачей антител молозивом потомству. За 2-3 недели до и после отела у коров в сыворотке крови противовирусные антитела в РИД не обнаруживают. В этот период высокий титр антинел регистрируют в молозиве и молоке инфицированных коров.

Мурватуллаев С. А. (1994) пришел к заключению, что выпадение серологических реакций при лейкозе крупного рогатого скота часто встречается. Могут отсутствовать линии преципитации как к гликопротеидному, так и к полипептидному антигенам вируса лейкоза, причем первому из них линия преципитации часто восстанавливается, а спустя некоторое время может вновь исчезать. Линия к полипептидному -24 антигену вируса лейкоза не восстанавливается. Связи между выпадени­ем реакции и беременностью, отелом, сроком стельности не уста­новлено. Существует закономерность между уменьшением (увеличением) числа лейкоцитов и выпадением (восстановлением) серологического ответа больного лейкозом животного [13].

Частое выпадение серологической реакции у больного животного свидетельствует о необходимости сокращения сроков диагностического исследования в неблагополучных стадах с 90- до 30-45 дней для своевременного выявления и изолирования источника инфекции.

Согласно действующей инструкции, исследование сыворотки крови в РИД запрещено повторное ее переисследование при положительном ее результате.

Кроме РИД, были предложены и другие серологические реакции (реакция связывание комплемента, реакция иммуннофлюоресценции, реакция радиоиммуннопреципитации, реакция нейтрализации), но широкого применения они не нашли [12].

ИФА – высокочувствительный диагностический тест. С его помощью выявляют антитела не только в сыворотке крови, но и в других биологических жидкостях (молоко). Это очень важно, так как этот метод позволяет оценить эпизоотическое состояние стада по пробе молока. Благодаря высокой чувствительности, быстрой постановке реакции этот современный метод можно использовать для выявления вирусоносительства на последних стадиях оздоровления неблагополучных стад [8].

В последние годы всё более широкое применение находят молекулярно-биологические исследования с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Этот метод обладает высокой специфичностью и позволяет выявить инфицированных животных на более ранних стадиях заражения. ПЦР-диагностику нельзя пока рассматривать в качестве массового метода исследования при лейкозе, она может использоваться наряду с серологическими методами преимущественно в племенных хозяйствах на завершающей стадии оздоровления [14].

Посмертная диагностика лейкоза крупного рогатого скота состоит из гистологического исследования и патологоанатомического вскрытия. Патологоанатомическая диагностика основана на обнаружении в кроветворных органах изменений, являющихся следствием избыточного разрастания ткани. Патологоанатомические изменения лейкозного характера регистрируют при вынужденном убое животных с клиническими признаками лейкоза. При гематологической стадии лейкоза патологоанатомические изменения у крупного рогатого скота устанавливают не у всех животных.

Наиболее частой формой лейкоза крупного рогатого скота являются лимфоидные лейкозы и лимфосаркомы (гематосаркомы). Ряд исследователей описали миелоидные формы лейкоза и лимфогрануломатоз.

В соответствии с действующей инструкцией по профилактике и оздоровлению крупного рогатого скота от лейкоза диагноз на лейкоз считается установленным при наличии одного из таких показателей [7]:

1. Положительного результата серологического исследования по РИД;

2. Характерных патологоанатомических признаков заболевания;

3. Положительного результата гистологического исследования патологического материала.

Основным методом прижизненной диагностики лейкоза является серологический- реакция иммуннодиффузии в агаровом геле. Гематологический и клинический методы исследования используются для установления стадии полного развития заболевания у серопозитивных животных. Патологоанатомические исследования устанавливают степень поражения органов, а гистологическим - морфологические формы лейкоза.

При выявлении у крупного рогатого скота изменений белой крови необходимо провести дифференциально-диагностические исследования, исходя из того, что подобные нарушения возможны при некоторых инфекционных и незаразных болезнях. Следует отметить, что дифференциальную диагностику легче осуществлять в тех хозяйствах, где ветеринарные специалисты вооружены многолетними знаниями эпизоотической ситуации и анамнестическими данными о характере преобладающих незаразных болезней крупного рогатого скота.

К числу хронических заразных болезней крупного рогатого скота, при которых наблюдаются изменения крови, требующие дифференциации с целью исключения лейкоза, относится туберкулез, паратуберкулезный энтерит, бруцеллез, актиномикоз, бабезиоз, фасциолез и др.

Дифференциация туберкулеза достигается прежде всего аллергическими, бактериологическими, серологическими (РИД) и патологоморфологическими исследованиями. При туберкулезе наблюдаются лейкоцитозы или лейкопении, сопровождающиеся нейтрофилией. При благоприятном течении туберкулеза отмечают умеренный непродолжительный лимфоцитоз [7].

При бруцеллезе, сопровождающемся гнойно-некротическими процессами, регистрируют нейтрофилию со сдвигом лейкоцитарной формулы влево. Чаще всего у крупного рогатого скота протекает с нормальными показателями белой крови. При дифференциальном диагнозе учитывают данные эпизоотологии и результаты серологических исследований на лейкоз и бруцеллез [7].

При паратуберкулезе могут наблюдаться лейкопении и лимфопении [7].

Актиномикоз исключают клиническим исследованием. Лимфоузлы (подчелюстные, в области глотки, гортани и реже вентральной части шеи) при актиномикозе характеризуются плотностью пораженной ткани, флюктуацией, абсцедированием с образованием фистулезных ходов на разрезе [7].

Из незаразных заболеваний от лейкоза крупного рогатого скота следует дифференцировать маститы, пневмании, ретикулоперикардиты, эндометриты, болезни печени и прочие [7].

Хронические заболевания без гнойно-воспалителъных проявлений сопровождаются в большинстве случаев нормальными показателями периферической крови, иногда наблюдаются повышенные количества лейкоцитов и изменения в лейкоцитарной формуле с наличием эозинофилии, нейтрофилии или моноцитоза. В редких случаях при одновременном сочетании двух или более хронических заболеваний нелейкозной природы у животных может отмечаться умеренный лимфоцитоз при нормальном или повышенном количестве лейкоцитов [7].

Также лейкозы следует дифференцировать между собой: гемацитобластоз, миелолейкоз, лимфолейкоз, гематосаркомы, злокачественный гистиоцитоз, лимфосаркоматоз, ретикулосаркоматоз, лимфогранулематоз. Эти формы можно различать при исследовании мазков крови: лейкоцитарная формула и степень зрелости клеток переферической крови [7].