Свойства МБТ. Особенности лабораторной диагностики. Изменчивость и лекарственная устойчивость

Свойства МБТ

1) Размножение происходит достаточно медленно, деление клетки происходит за 20 – 24 часа. На жидких питательных средах при tº 37 С º видимый рост проявляется на 5-7 сутки, твёрдых питательных средах - на 14-15 сутки.

2) Обладают устойчивостью:

· к воздействию факторов окружающей среды, не боятся холода (выживают при температуре -269˚ С.),

· к высо­ким концентрациям кислот, щелочей, спиртов (кислотоустойчивость).

3) Отли­чаются большой жизнеспособностью, т.е. свои патогенные свойства могут со­хранять в:

- высохшей мокроте в темноте, без доступа солнечного света, в те­чение 10 – 12 месяцев,

- закрытом помещении, на страницах книг, одежде, мебели, стенах до 3- 4-х месяцев,

- уличной пыли до 2-х недель,

- сырой земле от 4-х до 12 месяцев.

- воде до 5 месяцев,

- сливочном масле - до 8месяцев, сыре – до 7 месяцев.

На МКБ губительно дейст­вуют прямые солнечные лучи, под воздействием которых, они по­гибают через несколько часов.

Быстро гибнут:

· при кипячении (через 15 мин.),

· от воздействия УФО, хлорной извести, хлорамина, йода, формалина. Для обеззараживания используют препараты, содержащие хлор в высоких концентрациях.

В сухожаровом шкафу – при tº 100 С º , погибают через 45 мин.

4).Проявляют изменчивость и приспособляе­мость к неблагоприятным воздействиям.

Изменчивость МКБ проявляется в следующих формах:

- Морфологическая изменчивость

- Изменчивость к красящим веществам

- Биологическая изменчивость – изменение вирулентности в сторону повышения или снижения дл полной утраты вирулентности.

Морфологическая изменчивость проявляется в виде полиморфизма, т. е. способности к образованию разных форм. Могут полностью или частично утрачивать клеточную мембрану (так называемые L формы) и становятся недоступными для действия лекарственных препаратов или естественных механизмов защиты человека.

Это позволяет микобактериям годами и десятилетиями незаметно существовать в условиях живого организма, но при этом постоянно сохраняется опасность, что они вновь трансформируются в обычные микобактерии и вызовут повторное заболевание туберкулезом.

Атипичные формы МБТ могут вызывать заболевания человека и животных, неотличимые от клинических, рентгенологических и морфологических проявлений туберкулёза. Такие заболевания называются микобактериозами.

иагностика туберкулеза основывается на данных клинических, гистологических, микробиологических исследований, оценке результатов туберкулиновых проб и тест-терапии. Из этих методов самым надежным является обнаружение микобактерий туберкулеза (МБТ), остальные же информативны только в комплексе. Современная микробиологическая диагностика туберкулеза состоит из нескольких основных групп анализов, направленных на:
• выявление (обнаружение) возбудителя;
• определение лекарственной устойчивости;
• типирование микобактерий туберкулеза.

Бактериоскопические методы. Обнаружение возбудителя начинается с наиболее простых и быстрых бактериоскопических методов: световой микроскопии с окраской по Цилю–Нильсену и люминесцентной микроскопии с окраской флюорохромами. Преимущество бактериоскопии – в быстроте получения результата, однако возможности ее ограничены из-за низкой чувствительности. Этот метод является наиболее экономичным и рекомендован Всемирной организацией здравоохранения в качестве основного для выявления заразных больных.
Культуральные исследования. «Золотым стандартом» выявления МБТ признаны культуральные исследования. В России для посева патологического материала используют яичные среды: Левенштейна–Йенсена, Финна-II, Мордовского и др. Для повышения процента выделения микобактерий посевы патологического материала проводят на несколько сред, в том числе и на жидкие, что позволяет удовлетворить все культуральные потребности возбудителя. Посевы инкубируют
до 2,5 месяцев, при отсутствии роста к этому времени посев считается отрицательным.
Метод биологической пробы. Наиболее чувствительным способом обнаружения МБТ считается метод биологической пробы – заражение диагностическим материалом высокочувствительных к туберкулезу морских свинок.
Молекулярно-генетическая диагностика. Развитие молекулярной биологии позволило значительно повысить эффективность обнаружения микобактерий. Базовым методом молекулярно-генетических исследований являетсяполимеразная цепная реакция (ПЦР), направленная на выявление ДНК микобактерий в диагностическом материале. ПЦР дает экспоненциальную амплификацию специфического участка ДНК возбудителя: 20 циклов ПЦР приводят к увеличению содержания исходной ДНК в 1 миллион раз, что позволяет визуализировать результаты методом электрофореза в агарозном геле. Роль молекулярной диагностики в клинической практике повышается, поскольку увеличивается число больных со скудным бактериовыделением. Однако при установлении диагноза результаты ПЦР являются дополнительными и должны сопоставляться с данными клинического обследования, рентгенографии, микроскопии мазка, посева и даже ответа на специфическое лечение.

Лекарственная устойчивость МБТ:

· первичная (у нелеченых больных);

· вторичная (при неадекватности терапии).

Выделяют монорезистентность (к одному препарату),

· полирезистентность (к 2 и более),

· мультирезистентность (лек.уст-ть к HR) - к изониазиду, рифампицину.

Именно мультирезистетность или множественная лекарственная устойчивость (МЛУ) возбудителя туберкулеза имеет эпидемиологическое и клиническое значение в современных условиях.

Клиническое значение выявления больных туберкулезом с МЛУ заключается в том, что данная категория больных характеризуется:

· большой распространенностью процесса,

· прогрессирующим течением заболевания,

· иммунодефицитом,

· отсутствием эффекта от проводимой стандартной химиотерапии.

Важным признаком изменчивости МБТ . является устойчивость к одному или нескольким противотуберкулезным препаратам. Виды лекарственной устойчивости:

- первичная - устойчивость МБТ к противотуберкулезным препаратам(ПТП) у больных туберкулезом, которые ранее не получали специфической терапии.

- начальная - устойчивость МБТ к ПТП у больных туб., которые ранее могли их получать. Включает

первичную и не выявленную приобретенную.

- приобретенная (вторичная) -устойчивость у больных , которым ранее проводилась специфическая терапия.

- монорезистснтность - устойчивость к одному ПТП.

- полирезистснтносгь - устойчивость к двум и более ПТП, но не к сочетанию изониазида и рифампицина.

- множественная - -//- + сочетание изониазида и рифампицина

- перекрестная (полная и неполная)

Основные механизмы развития лекарственной устойчивости

I .Мутация

2.Селекция

3.Неадекватное лечение

Поэтому для химиотерапии применяют не менее 4-х препаратов; если препарат = 40 мкг/мл и МБТ устойчива—что нужно исключать.

Методы определения лекарственной устойчивости

1 .Классические: -м-д пропорций

-м-д коэффициента устойчивости -м-д абсолютных концентраций

2.Ускоренные:

-радиометрический м-д системы ВАС ГЕС

3.Перспективные: -молекулярно-генетические.