Приготовьте мазок с плотной питательной среды

Методические указания к практическому занятию

По дисциплине ОП.06 Основы микробиологии и иммунологии

для студентовспециальности 34.02.01 Сестринское дело

Тема: Приготовление микробиологических препаратов

План занятия

I. Входной контроль

II. Инструктаж к практической работе. Демонстрация манипуляций по теме.

III. Самостоятельная работа студентов. Оформление дневников по практике

IV. Отчет о проделанной работе. Выходной контроль

Ход занятия.

I. Ответьте на вопросы входного контроля:

1. Правила работы в микробиологической лаборатории.

2. Какие существуют особенности работы с инфицированным материалом?

3.Какая лабораторная посуда и оборудование используются для приготовления микробиологических препаратов?

4.Какие существуют основные формы бактерий?

5.Цели и способы фиксации мазка.

6.Техника приготовления мазков.

II.Инструктаж к практической работе

Используя методические указания, изучите правила приготовления микробиологических мазков из агаровой культуры, бульонной культуры, крови, гноя, мокроты и трупного материала.

III. Самостоятельная работа студентов:

Приготовьте мазок с плотной питательной среды.

А) Обезжирить предметное стекло. Для чего предметные стекла помещают на 2-3 дня в смесь Никифорова (равные объемы спирта и эфира) или в 96% спирт.

Б) На положенное на стол стекло, прокаленной на спиртовке петлей наносят каплю изотонического раствора хлорида натрия (0,9%).

В) Берут левой рукой пробирку с культурой.

Г) Правой рукой берут бактериологическую петлю и прожигают ее в пламени спиртовки.

Д) Вынимают мизинцем правой руки пробку из пробирки. Прожигают горло пробирки над пламенем спиртовки.

Е) вводят петлю в пробирку. Охлаждая ее о стенки пробирки, если она горячая.

Ж) Захватывая петлей небольшую часть культуры, выводят ее из пробирки, не касаясь стенок.

З) Закрывают пробирку пробкой над пламенем спиртовки и ставят ее в штатив.

И) Петлю с культурой опускают на стекло и растирают культуру рядом с каплей изотонического раствора, а затем постепенно эмульгируют в этом растворе.

К) Остатки культуры на петле сжигают в пламени спиртовки.

Л) Мазок высушивают, фиксируют, окрашивают.

2. Приготовьте мазок с жидкой питательной среды.

Приготовление мазка из жидкой культуры отличается от выше описанного способа приготовления только тем, что здесь можно использовать не только петлю, но и Пастеровскую пипетку, которую обязательно после использования опускают в дезинфицирующий раствор.

3. Приготовьте мазок из гноя или мокрот.

Материал забирают стерильной петлей или пипеткой и наносят на середину предметного стекла. Затем вторым предметным стеклом покрывают первое так, чтобы остались свободными треть первого и второго стекол. Стекла раздвигают в стороны и получают два отдельных мазка.

Рисунок 1 – Приготовление мазка из гноя и мокроты

4. Приготовьте мазок из крови.

Каплю крови наносят ближе к краю стекла. Затем краем второго отшлифованного стекла прикасаются к капле крови, располагая стекло под углом 45⁰. Прижимая отшлифованное стекло к предметному, продвигая его. Хорошо сделанный мазок имеет желтоватый цвет.

Рисунок 2 –Приготовление мазка из крови (стрелка показывает направление движения шлифовального стекла)

5. Приготовьте мазок из трупного материала.

Раскаленным скальпелем прижигают поверхность орган и из этого участка вырезают кусочек материала, затем поверхностью этого кусочка прикасаются к предметному стеклу в двух – трех местах, делая ряд мазков-отпечатков.

Высушивание – мазки высушивают на воздухе при комнатной температуре или в термостате.

Фиксация. Мазки фиксируют после полного высыхания с целью закрепить мазок на стекле и обезвредить (убить) микроорганизмы. Для этого применяют спиртовку. Держа стекло вверх мазком, его трижды проводят через пламя спиртовки (6 сек).

Мазки из крови и трупного материала лучше фиксировать жидкостью, т.к. клеточные элементы в мазках при действии высокой температуры разрушаются.

а) метиловый спирт – 5 минут

б) этиловый спирт – 10 мин

в) смесь Никифорова – 10-15 мин

г) ацетон – 5 мин

Окраска препарата может быть простой и сложной.

Бактериальная петля состоит из трех частей: ручки (петледержателя), головки и самой петли (проволочки).

Рисунок 3 – Бактериологическая петля