Протозооскопия нативного препарата

Диагностика и специфическая терапия инвазии ротовых простейших у больных пародонтитом

Методические рекомендации

Харьковский институт усовершенствования врачей Харьков – 1996

В методических рекомендациях представлены сведения о ап-робированых методах лабораторной диагностики инвазии ротовых простейших у больных пародонтитом, подробно изложена сравни -тельная оценка этих методов. Даны рекомендации о методах специфической протистоцидной терапии при заболеваниях пародонта.

Методические рекомендации предназначены для врачей-стоматологов, врачей-интернов, слушателей факультетов усовершенствования врачей, паразитологов, лаборантов. Могут быть полезны инфекционистам, оториноларингологам, микробиологам.

Методические рекомендации составили: профессор В.Ф.Куцевляк; профессор В.А.Никитин; профессор Ю.Л.Волянский; профессор С.В.Бирюкова; к.м.н. Н.Ф.Дзюбан; ассистент Ю.В.Лахтин.

Кафедры терапевтической стоматологии, клинической микробиологии и иммунологии Харьковского института усовершенствования врачей.

Рецензент: профессор Г.Ф.Катурова

15ВМ 966-566-013-6

В полости рта, в частности пародонталышх карманах, у больных пародонтитом встречается два вида протистов: Entamoeba gangivalis- десневая амеба и Trichomonas tenax - ротовая трихомонада. Они обитают и в кариозных полостях зубов, криптах миндалин. Многочисленные исследования, посвященные этой проблеме, не позволяют окончательно решить вопрос о роли их в патологическом процессе.

Присутствие ротовых протистов у лиц с интактным паро -донтом дают основание авторам отнести их не к паразитам, а к комменсалам. Однако клинические и лабораторные наблюдения показывают, что при разных патологических состояниях изменяется морфологическая структура десневых амеб, а при инвазии ротовыми трихомонадами течение заболевания более длительное, затяжное. Особенно тяжело протекает пародонтит, при этом наблюдается обильное гнойное отделяемое из пародонтальных карманов. Кроме того, в данных случаях пародонтит плохо поддается лечению обычными лекарственными средствами, а назначение специфической протистоцидной терапии быстро приводит к купированию воспалительного процесса.

В пародонтологической практике к назначению протистоцидных средств прибегают довольно часто, нередко вслепую, без лабораторного подтверждения инвазии простейшими. Поэтому своевременная лабораторная диагностика протоинвазии ротовой полости и обоснованное проведение протистоцидной терапии у больных пародонтитом приобретают актуальное значение.

К методам протозоологической диагностики инвазии ротовых протистов относятся следующие: протозооскопия нативного препарата, протозооскопия окрашенного мазка и культуральное.

исследование.

Протозооскопия нативного препарата

Принцип метода: взятый экссудат из пародон-тального кармана смывают в капле физиологического раствора на предметном стекле и просматривают под микроскопом.

Реактивы и оборудование:

- стерильная корневая игла с турундой;

- предметное и покровное стекла;

- физиологический раствор или раствор Рингера-Локка;

- микроскоп.

Забор материала производят из пародонтальных карманов. Стерильную корневую иглу с турундой вводят в пародонтальный карман и поворачивают вокруг своей оси, затем переносят в каплю физиологического раствора, помещенную на предметном стекле, смывают в ней содержимое с иглы, покрывают покровным стеклом и микроскопируют при об. 40, ок. 7.

Физиологический раствор должен быть теплым, поскольку двигательная активность трихомонад в холодном растворе снижается или прекращается вообще, что может привести к отрицательному результату. Для этого применяют специальные нагревательные столики. Мы в этих целях используем в качестве источника света небольшую бытовую лампу, для чего вынимаем зеркало-отражатель в микроскопе и вставляем лампу под конденсор. Инфракрасное излучение лампы нагревает предметное стекло с физиологическим раствором.

Entamoeba gangivalis в нативном препарате выявляются в 100% случаях. Они округлой формы, очень медленно передвигаются за счет выпячивания псевдоподий. Псевдоподии появляются с одного полюса либо сразу с нескольких в разном направлении. Они прозрачные, выступают в виде языков с закругленным концом. Появление псевдоподии является главным отличительным признаком амеб от лейкоцитов, которые при воспалительном процессе в пародонте порой занимают все поле зрения. При невнимательном, беглом просмотре поля зрения за амебы можно принять разрушенные лейкоциты, которые теряют четкую круглую форму и ядро выходит за пределы оболочки. Если псевдоподии прозрачные, то центр амеб мутный, можно увидеть фагоцитированные ядра лейкоцитов. Размеры их вариабельны-: с лейкоцит и даже меньше, крупнее лейкоцита, иногда достигают гигантских размеров.

Trichomonas tenax в нативном препарате нами выявляются в 35,4% из всех положительных находок. Они имеют несколько вытянутую форму, похожи на плод груши. Отличительной чертой их от других клеточных элементов содержимого пародонтальных карманов является выраженная двигательная активность. Движение трихомонад энергичное, "порхающее", сопровождается выбрасыванием жгутиков на одном из полюсов. Во время движения тело простейших сокращается и они то вытягиваются по оси, то округляются. Двигательная активность их настолько энергична, что они могут быстро покидать поле зрения. В тех случаях, когда нативный препарат приготавливают в большом количестве физиологического раствора, капля получается толстой и три-хомонады быстро "уходят" в глубину капли, что может привести к отрицательным результатам. Количество особей в препарате незначительное, от 1 до 2-3, поэтому нативный препарат следует просматривать тщательно.

При выраженном воспалительном процессе в пародонте с плазма всегда базофильно окрашена, цвет колеблется от нежно-голубого до насыщенно-синего. Она разделена на интенсивно окрашенную с вакуолями и включениями эндоплазму и более просветленную гомогенную эктоплазму в виде узкой полоски по периферии, где никаких включений и вакуолей не обнаруживается. За счет эектоплазмы образуются выросты или псевдоподии. В эндоплазме есть вакуоли, фагоцитированные лейкоциты и бактерии, очень редко эритроциты. Размеры амеб разные. Около 40% экземпляров крупные, превышают лейкоциты.

В мазке, окрашенном метиленовым синим, четко просматривается оболочка амеб, ядро темно-синего цвета, цитоплазма светло-синяя, вакуоли бесцветные.

Характер экссудата влияет на количество амеб. При гнойном экссудате их число возрастает более чем в 2 раза по сравнению с серозным,

Результаты, полученные нами, показали, что 63,9% особей фагоцитируют лейкоциты. В среднем на одну амебу при серозном экссудате приходится по 1,8 фагоцитированному лейкоциту, при гнойном экссудате интенсивность поглощения лейкоцитов возрастает до 2,42. Ядра фагоцитированных лейкоцитов окрашиваются в интенсивный фиолетовый цвет. Эритрофагия и бактериофагия встречаются значительно реже.

У 72,58% особей мы обнаруживали псевдоподии. С увеличением размеров амеб увеличивается частота обнаружения псевдоподий. Аналогичная ситуация наблюдалась и с вакуолями в цитоплазме. Характер экссудата существенно влияет на качественные изменения в структуре простейших: при гнойном экссудате псевдоподии более выражены, иногда их много, вакуоли крупнее.

Выявляемость амеб в мазке и отпечатке одинакова и составляет 98,13%. В отпечатке протисты скапливаются сразу по несколько экземпляров в поле зрения. Так как отпечаток занимает небольшую площадь на предметном стекле, то этот способ приготовления препарата имеет преимущества перед мазком, особенно в тех случаях, когда количество простейших невелико. Однако фон препарата, состоящий из большого скопления лейкоцитов, эпителиальных клеток и обильной микрофлоры, не позволяет детально изучать их морфологию. Этот недостаток отсутствует в мазке, но при этом приходится просматривать большую площадь мазка.

Trichomonas tenax в окрашенном препарате имеют свою специфическую структуру. В 62,82% они округлой формы, несколько реже грушевидной, веретенообразной или в виде усеченной пирамиды. На одном из полюсов имеется ядро, расположенное эксцентрично. Ядро имеет вид косточки сливы, удлиненное у 56,4% экземпляров, округлое у 37-42% простейших. Очень редко оно точечное, каплевидное.

По Романовскому-Гимза ядро окрашивается оксифильно, бледно. Цитоплазма окрашена базофильно, слабо, имеет сетчатую структуру, иногда гомогенная. У единичных особей в цитоплазме встречаются фагоцитированные бактерии. Поглощения лейкоцитов трихомонадами мы не наблюдали.

Несмотря на высказывания некоторых авторов об окрашивании жгутиков и аксостиля краской Романовского, мы не встретили ни одного экземпляра трихомонад, у которых эти органы прокрашивались.

При окраске метиленовым синим ядро трихомонад интенсивно окрашено в синий цвет, протоплазма нежная, сетчатая, светло-синяя, вакуоли бесцветные.

Как и десневые амебы трихомонады имеют вариабельные размеры. Около 40% экземпляров приближаются к размерам лейкоцитов в препарате, остальные либо значительно меньше лейкоцитов, либо несколько превышают их.

Из всех выявленных случаев трихомонадной инвазии в отпечатке протистов обнаруживали в 50,77%, в мазке - 89,23%, Так как количество простейших этого вида в препарате составляет от 1-3 до 15-20, то при их небольшом числе обильный фон в отпечатке не позволяет четко дифференцировать протистов. В мазке же все клеточные элементы разрознены, обособлены друг от друга, поле зрения хорошо просматривается, поэтому даже единичные экземпляры легко идентифицируются. Но для этого необходимо просматривать весь препарат, их поиск представляет определенные трудности.