Какие правильно отбирать материал?

Цитологическое исследование сухого мазка фекалий

(Dry-Mount Fecal Cytology, DMFC)

Недорогое и малоинвазивное исследование, позволяющее диагностировать ряд заболеваний желудочно-кишечного тракта мелких домашних животных, в особенности показанное при диарее неясного генеза. DMFC проводится с целью оценки микроорганизменного и клеточного состава фекалий.

Главным преимуществом исследования является отсутствие в материале изменений in vitro.

Что конкретно выявляет DMFC ?

- аномалии количества и морфологии бактериальной флоры;

- наличие некоторых патогенных микроорганизмов с характерными морфологическими признаками* (Clostridium, Campylobacter, Trichomonas);

- кандидоз;

- наличие воспалительного процесса, включая специфические типы;

- признаки гиперплазии/неоплазии** эпителия прямой кишки;

- клетки некоторых новообразований** (мультицентрическая лимфома, мастоцитома, гастроинтестинальная стромальная опухоль)

*Для верификации диагноза может потребоваться микробиологическое исследование.

**Для верификации диагноза может потребоваться гистологическое исследование.

Что нужно учитывать, отправляя материал на DMFC :

- некоторые патогенные микроорганизмы могут быть морфологически неотличимы от случайных непатогенных, полученные результаты следует интерпретировать в контексте клинической картины и результатов других анализов;

- возможна интерференция результата с другими основными заболеваниями, физиологическими процессами или недавней антибиотикотерапией.

Какие правильно отбирать материал?

Существует несколько вариантов забора материала у животного:

- ректальный мазок (ватным тампоном, смоченным физ. р-ром или пальцем (использовать неопудренные перчатки, не применять вазелин и проч.)), недостаток – в мазке может оказаться мало материала, манипуляцию лучше всего производить сразу после дефекации;

- ректальный мазок с использованием цитощетки, недостаток – травматичность, в мазок могут попасть пласты эпителиальных клеток;

- лаваж прямой кишки с физ. р-ром, мазок делать из суспензии каловых масс (по консистенции – жидкая грязь), ПРЕДПОЧТИТЕЛЕН именно этот способ;

- мазок свежего кала допустим, но не рекомендован из-за быстро наступающих изменений in vitro, а также из-за того, что такой мазок практически не будет отражать состояние слизистой оболочки;

- если содержание слизи в кале высоко, то можно и нужно делать мазок слизи, можно на отдельном стекле.

Мазок/мазки (не более 3-х) высушивается на воздухе и передается в лабораторию, с указанием того, каким способом был сделан мазок.

Основные требования:

Мазок должен быть максимально ТОНКИМ, стекло после высушивания должно оставаться относительно прозрачным. Чем толще слой материала, тем меньше вероятность, что цитолог сможет там что-либо разглядеть.

Для приготовления мазков использовать строго ЧИСТЫЕ стекла и подручные материалы.

Материал должен быть СВЕЖИМ, цитологическое исследование несвежего кала не имеет диагностической ценности.

 

Алгоритм:

1. Оценка общего фона: бактерии и дрожжи на х 100;

2. Определить количество спорообразующих бактерий на х100;

3. Оценить наличие других потенциальных возбудителей на х100 и х40:

а. Водоросли (например, Prototheca)

б. Нестандартные бактерии (например, в форме крыла чайки, спиралевидные и т.д.)

в. Грибы (например, Histoplasma, Aspergillus, Blastomyces, Кандида, Cryptococcus)

г. Oomycetal (например, Pythium)

д. Простейшие (например, Cryptosporidium, лямблии, Entamoeba, трихомонады, Ballintidium)

е. Редкие находки (например, яйца нематод и трематод, личинки)

4. Сканирование мазок на наличие клеток

а. Воспалительные клетки (определить тип и количество)

б. Эпителиальные клетки (количество, морфология (норма, гиперпластические или опухолевые)

в. Атипичные или опухолевые клетки

Нормальная картина:

Чрезвычайно полиморфные палочки различных видов;

Не более 5 спорообразующих палочек в поле зр. (на х100);

Кокки отсутствуют или единичны;

Нормальная бактериальная флора. Очень полиморфная смешанная флора, состоит преимущественно из палочек, на аморфном бледно-базофильном фоне, клеток нет или очень мало.

Немного дрожжей – круглые или овальные, шероховатые, лежат внеклеточно, 5-10 мкм в диаметре, базофильные, с тонкой бесцветной капсулой, часто бывают при диарее, однако нельзя утверждать, что они ее вызывают, возможно, это связано с тем, что водянистый стул просто «вымывает» их;

Нормальные дрожжи. Круглой или яйцевидной формы, от 5 до 10 мкм в диаметре, шероховатые, базофильные, окружены тонкой, бесцветной капсулой.

Нормальные дрожжи. Взрослая кошка, с диареей. Лежат одиночно или в паре, четкие, плотные.

Ненормальная бактериальная флора (многочисленные диплококки), бледно-базофильный фон, который содержит один случайный внеклеточный дрожж (слева) и два Cyniclomyces guttulatus.

Cyniclomyces guttulatus (ранее Saccharomycopsis guttulata) является частью нормальной флоры некоторых грызунов и зайцеобразных (кролики, морские свинки, шиншиллы). В небольшом количестве могут быть обнаружены у собак, это считается результатом копрофагии, однако нельзя утверждать наверняка, что они непатогенны для собак, возможно, это фактор, способствующий диарее;

Переваримый (бесцветный или янтарный) и непереваримый (сине-зеленый, с параллельными стенками) растительный материал;

Базофильный аморфный материал, т.е. слизь (особенно много слизи, если брать лаваж или цитощеткой);

Хорошо дифференцированные эпителиальные клетки (плоский или призматический эпителий)  в переменном количестве, зависит от способа отбора проб и сопутствующего заболевания. При атравматическом отборе небольшое число хорошо дифференцированных эпителиальных клеток может присутствовать по отдельности или в небольших листах. При травматическом отборе (цитощетка, лаваж) количество клеточных листов и их размер будет больше. Если брали атравматично, большие листы – НЕ норма.

Дрожжи. Cyniclomyces guttulatus. Собака с хронической диареей.

Cyniclomyces guttulatus. Аморфный серо-коричневый переваренный материал, клетки плоского эпителия.

Растительный материал сине-зеленого цвета, клеточные стенки параллельны друг другу. Частая находка.

Эпителий прямой кишки. Большой многоклеточный лист плотно расположенных низких призматических эпителиальных клеток, окруженный роговыми чешуйками и небольшим количеством ядерного материала из лизированных клеток.

Собака с диареей. Один малый лимфоцит (слева), три хорошо дифференцированные призматические эпителиальные клетки на бледно-базофильном фоне, который содержит плеоморфную бактериальную микрофлору (преимущественно палочки).

Эпителий прямой кишки собаки с хронической диареей, травматичный отбор (цитощетка). Очень большой многоклеточный лист плотно расположенных призматических эпителиальных клеток. Есть немного базофильно окрашенных Cyniclomyces guttulatus (слева).

Ненормальная картина.

Ненормальная флора.

Избыточный рост микрофлоры, как правило, вторичен и неспецифичен, будучи связан с другими основными заболеваниями, недавними операциями на кишечнике, аномалией физиологических процессов или недавний прием АБ. Однако он может существенно усугубить основную патологию.

Первичный рост микрофлоры бывает редко, вызывает заболевание ЖКТ. По цито нельзя отличить вторичный от первичного. Цито выявляет:

- мономорфную или олигоморфную популяцию палочек;

- увеличение количества кокков;

- увеличение количества дрожжей (например, Candida, Cyniclomyces)

Ненормальная микрофлора. Многочисленные диплококки и их микроколонии (вверху в центре), на бледно-базофильном фоне, который содержит небольшое количество янтарного материала и один несохранный нейтрофил в состоянии кариолизиса.

Кандидоз. Собака с хронической патологией желудочно-кишечного тракта после лапаротомии. Псевдогифы кандиды на бледно-базофильном фоне, лишенном обычной бактериальной флоры, содержит умеренное количество рефрактильного янтарного материала неправильной формы и сильно-базофильную слизь.

Ненормальная бактериальная флора: разрастание популяции больших пухлых палочек и увеличение количества диплококков, на бледно-базофильном фоне.

Кандидоз. Тот же случай, как выше. Псевдогифы и бластоспора кандиды (темный круглый шарик в правом нижнем углу). Еще раз обращаем внимание на отсутствие микрофлоры.

Ненормальность проявляется в снижении плеоморфизма, увеличении числа диплококков, наличии многочисленных «бутонов» Cyniclomyces guttulatus, все на бледно-базофильном фоне.

Лейкоциты в кале.

Присутствие лейкоцитов в кале в любом количестве – НЕ норма, предполагаем дистальный колит или проктит (возможные причины - сальмонеллез, клостридиоз, энтериколибациллез, другие инвазивные или энтеротоксигенные бактерии). Рекомендовать посевы/ПЦР.

Нейтрофильное воспаление. Собака с диареей. Большое количество нейтрофилов среди микробной флоры.

Также нейтрофилы в кале появляются при:

- инвазии власоглавами (характерна диарея с кровью и слизью в кале);

- первичном воспалительном заболевании кишечника, сопровождающимся лейкоцитарной инфильтрацией (лимфоплазмоцитарное, эозинофильное воспаление);

- неоплазия (вернее, сопутствующие ей воспаление и некроз).

Эозинофильное воспаление (эозинофильный гастроэнтероколит, эозинофильный колит) – увеличено количество тучных клеток - бывает у собак и кошек любой породы и возраста, но особенно часто у молодых взрослых животных. В плане пород - боксер, доберман, немецкая овчарка.

Диагноз ставить только после исключения других причин эозинофильной реакции (эозинофильное воспаление отмечается как компонент смешанного воспалительного ответа на определенные инфекции (например, грибок, оомицеты, водоросли, нематоды) или инородное тело). Эозинофилы также появляются при определенных новообразованиях (например, лимфома).