Определение сроков выживания микроорганизмов (тест-культур) на поверхности полимерных материалов

Для исследований образцы принимаются при наличии сопровождающей технической документации, содержащей данные о сроке изготовления испытуемых материалов.

Санитарно-микробиологические исследования полимерных материалов предваряет обязательная подготовка образцов к исследованию, заключающаяся в их очищении от постороннего загрязнения путем мытья поверхности моющими средствами под проточной водой с последующим ополаскиванием дистиллированной водой и высушиванием.

При определении сроков выживания отдельных патогенных и санитарно-показательных микроорганизмов (тест-культур) испытуемые образцы могут подвергаться какому-либо способу стерилизации (например, в автоклаве или обжиганию обработанной спиртом поверхности) в режиме, не изменяющем внешнего вида материала и его структуры, также антимикробных свойств, если таковые были приданы полимерному материалу при изготовлении.

Определение сроков выживания патогенных и санитарно-показательных микроорганизмов (тест-культур) проводится в три этапа:

- нанесение культуры микроорганизмов на поверхность испытуемого материала и контрольного образца (в качестве контроля может использоваться, например, стекло, являющееся инертным для микроорганизмов);

- отбор проб через определенные промежутки времени и посев на питательные среды (специфичные для данной тест-культуры) для качественного или количественного учета микроорганизмов, выращивание;

- учет результатов, статистическая обработка и интерпретация полученных данных.

Выбор микроорганизмов, в отношении которых проводится изучение влияния полимерного материала, определяется целевым предназначением последнего. Чаще всего в качестве тест-культур используются культуры S.aureus, E.coli, P.aeruginosa.

Количественное определение микроорганизмов на единице площади исследуемого образца материала осуществляется на основании предварительного расчета исходной концентрации микроорганизмов в единице объема заражающей взвеси.

Нанесение взвеси тест-культуры микроорганизмов на поверхность полимерного материала производится капельным или аэрозольным методом.

При использовании капельного метода на одинаковой для контрольного и опытного образцов площади распределение капель при одинаковом объеме наносимой взвеси должно быть максимально равномерным.

Аэрозольный метод обязательно предполагает применение специальных герметичных камер с распылителем и требует не только отработки исходной концентрации микроорганизмов в единице объема заражающей суспензии, но и времени ее распыления, длительности перемешивания воздуха в камере, времени оседания крупных частиц аэрозоля бактериальной взвеси.

После нанесения тест-культуры и до отбора проб контрольные и опытные образцы материалов должны находиться в условиях, препятствующих оседанию бактерий из воздуха (например, в камере при использовании аэрозольного метода или в чашках Петри при капельном методе), в одинаковых условиях температуры, освещенности и влажности.

Отбор проб может осуществляться общепринятыми в микробиологической практике методами - методом смывов или отпечатков. При количественном учете микроорганизмов важным является полнота забора клеток с поверхности образца, с этой целью смывы и отпечатки можно производить с одного и того же участка 3 - 4 раза (одинаковое число раз как с опытных, так и контрольных образцов). При подсчете выросшие на плотных средах колонии, снятые с одного участка, суммируют. Многократный отбор проб с одного участка особенно важен при изучении материалов с заданными антибактериальными свойствами.

Кроме того, при использовании образцов полимерных материалов небольшого размера оптимальным для наиболее полного снятия микроорганизмов с их поверхности является отмывание мерным количеством стерильного физиологического раствора при непосредственном погружении образцов в колбы или широкие пробирки со стеклянными бусами, с последующим посевом определенных кратных объемов смывной жидкости (позволяющих произвести количественный учет) на плотные питательные среды.

Для достижения статистической достоверности результатов необходимо использовать репрезентативное количество образцов (повторностей) как в опыте, так и контроле.

При количественном определении содержания микроорганизмов подсчитываются все выросшие на плотных питательных средах после термостатирования колонии. Для подтверждения роста именно тест-культур, а также для изучения влияния полимерных материалов на биологические свойства микроорганизмов 2 - 3 колонии окрашивают по Граму и проводят изучение биологических свойств общепринятыми методами.

Сравнение количества колоний, выросших при посеве смывов с полимерных материалов, с количеством колоний в контроле позволяет определить степень влияния исследуемых образцов на жизнеспособность тех или иных используемых для заражения микроорганизмов. Учитывая динамику отмирания микроорганизмов на образцах за разные периоды времени, можно получить дополнительные данные о характере этого влияния.