РЕАКЦИИ НЕОБРАТИМОГО ОСАЖДЕНИЯ БЕЛКОВ

Реакции обратимого осаждения белков

Реакции осаждения белков бывают обратимыми и необратимыми.

При обратимом осаждении макромолекулы белка в основном не подвергаются глубокой денатурации, а осадки могут быть снова растворены в первоначальном растворителе. Обратимое осаждение вызывается действием нейтральных солей аммония, щелочных и щелочно-земельных металлов (высаливание), спирта, ацетона, эфира и некоторых других органических растворителей.

Реактивы: раствор яичного белка с добавлением хлорида натрия (белок одного куриного яйца отделяют от желтка и растворяют в 230 см³ дистиллированной воды, к которой прибавляют 100 см³ насыщенного раствора хлорида натрия, раствор фильтруют через марлю, сложенную в 3-4 слоя, и хранят в холодильнике); насыщенный раствор сульфата аммония; сульфат аммония, растертый в порошок; 10 %-ый раствор гидроксида натрия; 1%-ый раствор сульфата меди.

Оборудование: пробирки; воронка для фильтрования; бумажные фильтры.

Ход работы:

Задание 1. Осаждение белковсульфатом аммония.

1. Впробирку отмерьте 2-3 см³ раствора яичного белка, добавьте равный объем насыщенного раствора сульфата аммония и смесь перемешайте.

2.Выпадает осадок глобулинов, альбумины остаются в растворе. Осадок отфильтруйте на бумажном фильтре.

3.К фильтрату добавьте порошок сульфата аммония до получения насыщенного раствора (последняя порция не растворяется).

4.Выпадает осадок альбуминов, который также отфильтруйте.

5.Фильтр с осадком альбулинов промойте 5 см воды, собирая фильтрат в чистую пробирку.

6.Проделайте с фильтратом биуретовую реакцию. Произошло ли растворение альбулинов?

Задание 2. Осаждение белков спиртом.

Органические растворители вызывают осаждение белков вследствие разрушения гидратной оболочки макромолекул.

1.В пробирку налейте 1 см раствора яичного белка с добавлением хлорида натрия.

2.По каплям прилейте 4-6 см³ спирта и сильно взболтайте. Через 5-8 мин. выпадает осадок белков.

Лабораторная работа №3

РЕАКЦИИ НЕОБРАТИМОГО ОСАЖДЕНИЯ БЕЛКОВ

При необратимом осаждении происходит глубокая денатурация белка. Денатурированный белок не способен к восстановлению своих первоначальных физико-химических и биологических свойств. Необратимое осаждение вызывается высокой температурой, действием концентрированных минеральных и некоторых органических кислот, ионов тяжелых металлов, алкалоидных реагентов, детергентов, красителей.

Реактивы: водный раствор яичного белка (раствор готовят, как указано в лабораторной работе № 6, часть 1); концентрированные серная, соляная и азотная кислоты; 5 %-ый раствор ацетата свинца; 2,5 %-ый раствор нитрата серебра; 5 %-ый раствор сульфата меди.

Задание 1.Осаждениебелковминеральнымикислотами.

Реакция находит применение для быстрого определения белка в биологических жидкостях, например, моче.

Ход работы:

Данную работу необходимо выполнять в вытяжном шкафу, соблюдая особую ОСТОРОЖНОСТЬ!

1.В три пробирки налейте по 15-20 капель концентрированных кислот: в первую - серной; во вторую - азотной и в третью - соляной.

2.Пробирки наклоните под углом 45^о и ОСТОРОЖНО (из пипетки) наслоите по стенке раствор белка. Пробирку держите отверстием от себя. На границе белка и кислоты появляется белое кольцо.

3.Пробирки осторожно встряхните. Осадки растворяются в серной и соляной кислотах, но не растворяются в азотной кислоте.

Задание 2. Осаждение белков солями тяжелых металлов.

Белки осаждаются солями меди, свинца, ртути, цинка, серебра и других тяжелых металлов. Свойство белков связывать ионы тяжелых металлов используется в медицине при оказании первой помощи пострадавшим от отравления солями меди, свинца, ртути.

Ход работы:

1.В три пронумерованные пробирки налейте по 5-10 капель раствора белка.

2.В первую пробирку по каплям прибавьте раствор ацетата свинца. Образуется осадок. Добавьте еще несколько капель, осадок должен раствориться в избытке раствора соли.

3.Во вторую пробирку по каплям приливайте раствор нитрата серебра. Образовавшийся осадок в избытке соли не растворяется.

4.В третью пробирку прибавьте раствор сульфата меди до появления осадка. Убедитесь, что осадок растворяется в избытке соли.

Оформление результатов:

Оформите результаты проведенных исследований в виде таблицы.

 

 

Осаждающий реагент	Описаниеосадка	Растворимость осадка в избытке реагента

 

 

Лабораторная работа №4

ТЕПЛОВАЯ ДЕНАТУРАЦИЯ БЕЛКА

При нагревании белки денатурируют. На процесс денатурации оказывают сильное влияние рН раствора и добавление электролитов.

Реактивы: водный раствор яичного белка (раствор готовят, как указано в лабораторной работе № 6, часть 1); 1%-ый раствор уксусной кислоты; 10 %-ый раствор уксусной кислоты; 10 %-ый раствор гидроксида натрия; насыщенный раствор хлорида натрия.

Оборудование: пробирки, водяная баня или спиртовка.

Ход работы:

1.В пять пронумерованных пробирок налейте по 10 капель раствора яичного белка.

2.Белок в первой пробирке нагрейте до кипения. Раствор мутнеет (разрушаются гидратные оболочки вокруг макромолекул), но осадок не образуется. Мицеллы, образованные макромолекулами, сохраняют одноименный заряд, что препятствует их осаждению.

3.К раствору белка во второй пробирке добавьте одну каплю 1 %-ого раствора уксусной кислоты и нагрейте до кипения. Осадок белка выпадает быстро. Заряд мицелл нейтрализован и белок близок к изоэлектрической точке.

4.К раствору белка в третьей пробирке прибавьте 1-2 капли 10 %-ого раствора уксусной кислоты и нагрейте до кипения. Осадок не образуется, так как мицеллы белка приобрели, присоединяя ионы водорода, положительный заряд, что препятствует их осаждению.

5.В четвертую пробирку добавьте 1-2 капли 10 %-ого раствора гидроксида натрия и нагрейте до кипения. Осадок не выпадает. Мицеллы за счет отщепления протонов от карбоксильных групп боковых цепей белка заряжены отрицательно.

6.В пятую пробирку прибавьте 1-2 капель насыщенного раствора хлорида натрия и нагрейте до кипения. Белок выпадает в осадок.

Оформление результатов:

Оформите результаты исследования, заполнив таблицу и кратко записав механизм денатурирующего действия исследуемого фактора в виде вывода.

 

№ пробирки	Добавляемый электролит	Наблюдаемый эффект денатурации	Вывод