Метод закручивания (метод Шульмана)

Качественные методы гельминтоовоскопии

Просмотр препаратов (исследование) производят при малом увеличении микроскопа: объектив Х8 – Х10, окуляр Х7-Х10. Только в сомнительных случаях используют объектив - Х40. При просмотре яиц с прозрачной оболочкой необходимо затемнить поле зрения микроскопа.

1. Метод нативного мазка

1. Крупинку фекалий растереть на предметном стекле в капле 50% раствора глицерина (можно в воде или в физиологическом растворе) до равномерной взвеси.

2. Покрыть покровным стеклом.

3. Исследовать.

На одном предметном стекле готовят две капли взвеси фекалий на расстоянии 3-4 см друг от друга, используя разные палочки для фекалий.

Этот метод мало эффективен, особенно при слабой инвазии. Метод используют как дополнительный к другим методам.

 

2. Метод толстого мазка (метод Като и Миура)

1. Квадратные пластинки целлофана (22х30 мм)выдержать в феноле, затем в смеси дистиллированной воды (100 мл) + глицерин (100 мл) + 3% малахит зеленый (1 мл)24 часа. ГЛИЦЕРИН ОБЕЗВОЖИВАЕТ ПЛАСТИНКУ ЦЕЛЛОФАНА, ФЕНОЛ ОБЕЗЖИРИВАЕТ, МАЛАХИТ ОКРАШИВАЕТ ПЛАСТИНКУ В ЗЕЛЕНЫЙ ЦВЕТ. Использование такой пластинки улучшает наблюдение яиц в нативном препарате. Препарат обезвоживается и обезжиривается, за счёт этого просветляется, яйца окрашиваются малахитовым зелёным и лучше видны среди фекальной массы.

2. Крупинку фекалий намазать на стеклянную пластинку (25х35 мм)- препарат мутный, яйца трудно различать, т.к. они окрашены пигментом фекалий в желто-коричневый цвет.

3. Накрыть влажной целлофановой пластинкой(препарат обезвоживается, обезжиривается и просветляется, яйца окрашиваются в зеленоватый цвет. Препарат легче изучать).

4. С помощью предметного стекла или биохимической пробочки притереть целлофан.

5. Препарат выдержать в течение часа при комнатной температуре.

6. Затем выдержать 30 минут в сушильном шкафу при 40⁰С.

7. Исследовать.

С помощью этого метода можно исследовать большой объём фекалий в препарате. Наиболее точный метод. Позволяет определить яйца, цисты паразитов при незначительной инвазии.

3.Метод Телемана – осаждения. Основан на разности плотности яиц и раствора. Используется раствор меньшей плотности (лёгкие органические растворы — эфиры,спирты,ацетон), чем яйца гельминтов (яйца тяжелее).

1. Фекалии (1,5 г) смешать в стакане с 50% раствором соляной кислоты (5 мл) или с 10% раствором едкого натра – NaOH.

2. Эту смесь перелить в пробирку с эфиром(5 мл).

3. Закрыть пробкой, встряхнуть до равномерной взвеси.

4. Эту смесь пропустить через металлически фильтр.

В результате в пробирке образуется три слоя взвеси.

5. Два верхних слоя слить.

6. К осадку добавить воду, встряхнуть.

7. Центрифугировать.

8. Исследовать 2 капли осадка при увеличении микроскопа 7Х10.

С помощью этого метода можно исследовать яйца всех гельминтов.

Метод Фюллеборна — всплывания (флотации)

Этот метод основан на свойстве яиц гельминтов - всплывать в насыщенных солевых растворах (350 г поваренной соли + 1литр кипяченой воды = фильтровать через марлю). Используется раствор имеющий плотность большую, чем яйца гельминтов(яйца легче). Более плотные истинные солевые растворы.

1. Одну часть фекалий смешать с 20-ю частями насыщенного раствора хлорида натрия (NaCl).

Удельный вес раствора составляет 1,18. Раствор добавлять постепенно.

2. Удалить крупные частицы фекалий.

3. Смесь оставить отстаиваться 40-60 минут.

Яйца гельминтов, имеющих меньший удельный вес, чем раствор всплывут на поверхность.

4. С поверхности проволочной петлей (диаметр – 1 см) снять несколько капель и перенести на предметное стекло.

5. Покрыть покровным стеклом и исследовать.

С помощью этого метода нельзя обнаружить яйца Trematoda и неоплодотворенные яйца Ascaris. Яйца этих гельминтов и яйца Trichuris trichiura можно обнаружить в осадке. Поэтому надо изучать не только надосадочную плёнку,но и осадок.

 

Метод Калантарян (видоизменённый метод флотации - всплывания)

Этот метод основан на свойстве яиц гельминтов всплывать в насыщенных растворах (NaNO₃ + вода ). Удельный вес раствора – 1,4, выше чем имеет раствор поваренной соли.

1. Одну часть фекалий смешать с 20-ю частями раствора.

2. Прокипятить.

Через 10-15 минут яйца всплывут на поверхность.

3.С поверхности смеси снять проволочной петлей (диаметр – 1 см) несколько капель и перенести на предметное стекло.

4. Покрыть покровным стеклом и исследовать.

Исследование осадка при этом методе не требуется (яйца Trematoda всплывают).

Можно использовать калиевую соль, аммиачную селитру, смесь солей.

 

Метод Красильникова

1. Фекалии (2,5г) размешать в 1% - 1,5% растворе детергента (20-30 мл).

Детергент (моющее или чистящее средство) – «Лотос», «Экстра» и т.д.

2. Отстаивать в течение суток или центрифугировать 1 мин. При 1000 оборотах/ мин.

В результате образуется 3 слоя взвеси. Яйца концентрируются над нижним слоем.

3. Приготовить 2-3 препарата после центрифугирования или взять пипеткой с поверхности нижнего слоя.

4. Исследовать.

 

Метод закручивания (метод Шульмана).

1. Фекалии (2-3 г) поместить в стеклянный стакан.

2. Добавить воды (10-15 г) или 0,85% раствор хлорида натрия.

3. Тщательно размешать стеклянной палочкой.

4. Вращать палочкой по центру.

5. Быстро вынуть и поставить на предметное стекло.

В стекающей капле концентрируются яйца или личинки гельминтов (благодаря центростремительной силе вращения).

 

При исследованиях также обнаруживаются «транзитные»яйца гельминтов (фасциолы,ланцетовидного сосальщиков) и об этом нужно помнить.