Распределение пациенток и демографические характеристики

В целом в исследование были включены и рандомизированы для протоколов 131 пациентка: 66 в группу рек-чФСГ, дозированного по массе (мкг), и 65 в группу рек-чФСГ, дозированного по результатам биопроб (МЕ). Получены следующие результаты: у всех участниц достигнуты критерии назначения ХГЧ, и проведены пункции фолликулов. Перенос хотя бы одного эмбриона осуществлен соответственно у 63 и 61 женщины в группах мкг и МЕ. Демографические характеристики обеих групп не различались. Средний возраст составил 30.8 ± 4.0 и 31.4 ± 3.5 года, ИМТ - 23.1 ± 3.2 и 22.5 ± 3.1; доля некурящих – 72.7 и 72.3%; первичное бесплодие было у 60.6 и 56.9%; длительность бесплодия - 3.7 ± 2.9 и 3.7 ± 2.5 лет; средняя продолжительность менструального цикла – 28.7 ± 1.5 и 29.0 ± 1.7 дня; доля участниц, не применявших ранее вспомогательные репродуктивные технологии - 74.2 и 73.8%; базальный ФСГ сыворотки - 7.4 ± 1.4 и 7.4 ± 1.7 МЕ/л, базальный ЛГ сыворотки – 3.8 ± 1.3 и 3.8 ± 1.2 МЕ/л; количество фолликулов диаметром 4-8 мм в обоих яичниках – 7.3 ± 4.0 и 8.5 ± 5.2 соответственно в группах мкг и МЕ. Кроме того, партнеры участниц обеих групп не различались по показателям исходной спермограммы. Длительность назначения агониста ГнРГ (от начала до дня введения ХГЧ) была сопоставимой: 28.3 ± 6.5 и 28.9 ± 6.5 дня соответственно в группах мкг и МЕ.

Общие результаты протоколов стимуляции рек-чФСГ представлены в табл.1. Стимуляция обоими препаратами была эффективной, сопровождалась получением большого количества эмбрионов и частотой наступления беременности около 30% на один цикл.

Таблица 1

Результаты протоколов стимуляции (среднее значение ± стандартное отклонение)

Вариабельность ответа яичников на стимуляцию разными сериями рек-чФСГ сравнивали по всем показателям эффективности. На рис.2 отображено среднее количество полученных яйцеклеток после стимуляции четырьмя сериями препарата, дозированного по массе, и соответствующими четырьмя сериями, дозированными по результатам биопроб. На рис.3 представлено такое же сопоставление по частоте наступления беременности. Оба показателя свидетельствуют о том, что серии рек-чФСГ, дозированного по массе, обеспечивают более стабильный клинический результат. Это постоянство было количественно оценено и проверено при сравнении различий между максимальным и минимальным значением показателей эффективности в каждой группе (табл.2). По большинству показателей эффективности серии препарата, заполненного и дозированного по массе, отличают более устойчивый клинический ответ по сравнению с препаратом, заполненным и дозированным по результатам биопроб. Это проиллюстрировано меньшей разницей между средними значениями клинических параметров, полученных в каждой из четырех подгрупп пациенток. Как в целом, так и по показателю клинических беременностей препарат, дозированный по массе, обладал преимуществами над заполненным по результатам биопроб (Р=0.039 и 0.001 соответственно).

Рис.2. Среднее количество яйцеклеток, полученных после стимуляции каждой серией рек-чФСГ: (а) четыре серии рек-чФСГ, дозированные по массе (мкг), (b) четыре серии рек-чФСГ, дозированные по результатам биопроб (МЕ)

Рис.3. Частота наступления беременностей после стимуляции каждой серией рек-чФСГ: (а) четыре серии рек-чФСГ, дозированные по массе (мкг), (b) четыре серии рек-чФСГ, дозированные по результатам биопроб (МЕ)

При изучении безопасности отмечены ожидаемые побочные явления, характерные для стимуляции яичников и вспомогательных репродуктивных технологий: чаще отмечалась головная боль, боли и дискомфорт в животе. Шесть случаев синдрома гиперстимуляции яичников (СГСЯ) отмечены в группе биопроб, четыре – в группе дозирования по массе (три легких и один тяжелый) (Р=0.531) (табл.2).

Таблица 2

Различия между максимальными и минимальными средними значениями, полученными после применения четырех различных серий рек-чФСГ в каждой группе исследования

Обсуждение

Высокая степень очищенности препаратов человеческого ФСГ, выпускаемых с помощью технологии рекомбинантной ДНК, обеспечила возможность применения современных методов для определения целостности ФСГ, характеристики его гликолизирования и количественной оценки содержания этого гормона в отдельных производственных сериях препарата. Накопленный опыт производства рек-ФСГ свидетельствует о чрезвычайно высоком постоянстве молекулярной целостности и профиля гликозилирования (Driebergen и соавт., 2002; Gervais и соавт., 2003). Это обстоятельство послужило основанием для замены стандартного способа биологических проб, который в свое время был разработан для преодоления проблемы вариабельности препаратов ФСГ мочевого происхождения, на метод SE-HPLC. Такое решение проблемы оказалось не только возможным, но и способствовало дальнейшему увеличению постоянства между различными промышленными сериями препарата рек-ФСГ.

В настоящем клиническом исследовании изучали потенциальные клинические преимущества нового метода калибровки реч-чФСГ путем сравнения показателей клинического ответа на стимуляцию четырьмя сериями препарата, заполненного по массе (мкг) и четырьмя сериями, дозированными по результатам биопроб (в МЕ).

Результаты исследования свидетельствуют в пользу преобразования, что подтверждается клиническими исходами в двух изучаемых группах.

Для врачей наибольший интерес представляют данные, характеризующие стабильность клинического ответа на стимуляцию разными сериями препаратов. Как известно, индивидуальный ответ пациенток на стимуляцию является изменчивым. На эту вариабельность влияет ряд параметров, включая возраст женщины, овариальный резерв, предварительную подготовку аналогами ГнРГ и оральными контрацептивами, наличие поликистозных яичников. Ответ яичников непосредственно или косвенно сказывается на показателе наступления клинических беременностей, так как последний параметр напрямую зависит от количества полученных и перенесенных эмбрионов – одного из ведущих прогностических факторов успеха (Templeton и Morris, 1998). Очевидно, что привнесение дополнительных факторов непредсказуемости крайне нежелательно. Настоящее исследование однородной группы пациенток подтверждает, что предпринятое усовершенствование технологии производства гонадотропинов способствует большему постоянству клинического ответа при проведении вспомогательных репродуктивных технологий. Об этом свидетельствует минимальный разброс частоты клинических беременностей в подгруппах пациенток, получавших новый препарат разных серий. Существенно снизилась вариабельность и других клинических показателей, несмотря на стимуляцию гонадотропином разных промышленных партий. Этот факт свидетельствует о том, что в однородной группе пациенток качество препарата рек-чФСГ может оказывать ведущее значение для достижения устойчивого клинического ответа. В проведенном исследовании не изучали препараты мочевого происхождения. Однако опубликованные ранее данные указывают, что при использовании различных промышленных партий гонадотропинов мочевого происхождения следует ожидать еще большей вариабельности клинического ответа. Так, по результатам ретроспективного сравнения девяти серий ЧМГ Stone и соавт. обнаружили, что диапазон среднего количество крупных фолликулов в день пункции колебался от 6.4 ± 0.8 до 10.4 ± 1.4, а частота наступления беременности – от 0 до 21% (Stone и соавт., 1989).

Заключение

Отличающаяся высокой стабильностью технология рекомбинантной ДНК обеспечила возможность промышленного выпуска ФСГ, дозированного по массе белка. Этот новый метод калибровки способствует дальнейшему усовершенствованию препаратов гонадотропинов и достижению устойчивого клинического ответа на стимуляцию.

Литература

1. Braileanu G.T., Albanese C., Card C., Chedrese P.J. 1998 FSH bioactivity in commercial preparations of gonadotropins. Theriogenology49, 1031
2. Chappel S.C. 1995 Heterogeneity of follicle stimulating hormone control and physiological function. Human Reproduction Update 1, 479-587
3. Cook A.S., Webster B.W., Teranova P.F. et al. 1988 Variation in the biologic and biochemical characteristics of human menopausal gonadotropin. Fertility and Sterility 49, 704-712
4. Creus S., Chaia Z., Pellizzari E.H. et al. 2001 Human FSH isoforms: carbohydrate complexity as determinant of in-vitro bioactivity. Molecular and Cellular Endocrinology 28, 41-49
5. Daya S., Ledger W., Auray J.P. et al. 2001 Cost-effectiveness modeling of recombinant FSH versus urinary FSH in assisted reproduction techniques in the UK. Human Reproduction 16, 2479-2480
6. Driebergen R., Basset R., Baer G. et al. 2002 Improvements in qualification of r-hFSH activity: SE-HPLC vs the in vitro rat bioassay. Human Reproduction 17, P-480
7. Galway A.B., Hsueh A.J., Keene J.L. et al. 1990 In vitro and in vivo bioactivity of recombinant human follicle-stimulating hormone and partially deglycosylated variants secreted by transfected eukaryotic cell lines. Endocrinology127, 93-100
8. Gervais A., Hammel Y.-A., Pelloux S. et al. 2003 Glysosylation of recombinant gonadotrophins: characterization and batch-to-batch consistency. Glycobiology, in press
9. Harlin J., Khan S.A., Diczfalusy E. 1986 Molecular composition of lutein, 745izing hormone and follicle-stimulating hormone in commercial gonadotropin preparations. Fertility and Sterility46, 1055-1061
10. Jeffcoate S.L. 1994 The role of bioassays in the assessment of recombinant proteins. Developments in Biological Standartization 83, 159-164
11. Mulders J.W., Derksen M., Swolfs A. et al. 1997 Prediction of the in vivo biological activity of human recombinant follicle stimulating hormone using quantitative isoelectric focusing. Biologicals 25, 269-281
12. Recombinant FSH Product Development Group 1998 Recombinant follicle stimulating hormone: development of first biotechnology product for the treatment of infertility. Human Reproduction Update 4, 862-881
13. Rector N.A., Markusen T.E., Stone B.A. et al. 1993 Numbers and quality of oocytes after induction of multiple folliculogenesis in women and in mice with different loss of human gonadotropins. Fertility and Sterility 60, 1082-1087
14. Rodgers M., McLoughlin J.D., Lambert A. et al. 1995 Variability in the immunoreactive and bioactive follicle stimulating hormone content of urinary menopausal gonadotrophin preparations. Human Reproduction 10, 1982-1986
15. Rose M.P., Gaines R.E., Balen A.H. 2000 Definition and measurement of follicle stimulating hormone. Endocrine Reviews 21, 5-22
16. Siebold B. 1996 Physicochemical characterization of recombinant human follicle stimulating hormone. Human Reproduction 11, 109-115
17. Steelman S.M., Pohley F.M. 1953 Assay of the follicle stimulating hormone based on augmentation with human chorionic gonadotropin. Endocrinology53, 604-616
18. Stone B.A., Quinn K., Quinn P. et al. 1989 Responses of patients to different loss of human menopausal gonadotropins during controlled ovarian hyperstimulation. Fertility and Sterility52, 745-752
19. Templeton A., Morris J.K. 1998 Reducing the risk of multiple births by transfer of two embryos after in vitro fertilization. New England Journal of Medicine 339, 573-577
20. Vitt U.A., Kloosterboer H.J., Rose U.M. et al. 1998 Isoforms of recombinant follicle-stimulating hormone: comparison of effects on murine follicular development in vitro. Biology of Reproduction 59, 854-861