Черных Е.Р., зав. лаб., д.м.н., профессор
2.Останин А.А., в.н.с., д.м.н., проф. 3. Хонина Н.А., с.н.с., д.м.н. 4. Леплина О.Ю., с.н.с., к.м.н. 5. Шевела Е.Я., с.н.с., к.м.н. 6. Сахно Л.В., с.н.с., к.б.н. 7. Тихонова М.А., с.н.с., к.б.н. 8. Баторов Е.В., м.н.с., к.м.н. 9. Тыринова Т.В., м.н.с., к.м.н. 10. Сергеевичева В.В., н.с., к.м.н. 13. Смирнова В.Ф., Лаб-иссл. 14. Мяснянкина Т.А., лаб-иссл. 15. Кащенко Т.М., лаб-иссл. 16. Борисенкова Н.И., лаб-иссл. 17. Сычева Н.В., н.с. (0,5 ставки) 18. Орловская И.А., д.м.н., профессор, зав. лаб. 19. Цырендоржиев Д.Д., в.н.с., д.м.н., профессор 20. Топоркова Л.Б., с.н.с, к.б.н. 21. Е.А. Вязоваяб м.н.с., к.б.н. 22. Басова А.А., к.б.н., 23. Феофанова Н.А., к.б.н.
Объект исследования: здоровые доноры, пациенты с гемобластозами, хроническими вирусными инфекциями, пострадавшие от черепномозговой травмы, больные аутоиммунными заболеваниями и заболеваниями центральной нервной системы (ЦНС), мыши (CBAxC57Bl/6-F1, Balb/c, Agouty yellow). Модели: экспериментальный коллаген-индуцированный артрит, ДНХБ-индуцированный контактный дерматит, СCl4-индуцированный гепатит.
Методы исследования: Для решения поставленных задач будут использованы методы культивирования клеток, проточной цитофлюоримтерии, радиометрический метод оценки пролиферативной активности, метод протеомного анализа и ИФА для оценки продукции цитокинов. Мезенхимальных стромальных клеток (МСК) буду генерироваться из МНК костного мозга, М1 и М2-подобные макрофаги из прилипающей фракции МНК периферической крови. Иммуносупрессорная и иммуностмулирующая активность МСК будет оцениваться по подавлению или стимуляции пролиферативного ответа активированных Т-лимфоцитов с использованием Н3-тимидина. Фагоцитарная активность МСК будет изучаться по способности МСК поглощать апоптотические клетки. Функциональная активность М2-подобных макрофагов будет исследована по способности этих клеток стимулировать пролиферативный ответ Т-клеток в СКЛ и продукции цитокинов. Клинические испытания М2-подобных макрофагов будут проведены у пациентов с нейропатологией (ДЦП и церебральным инсультом). Гемопоэтические и эндотелиальные предшественники будут оцениваться методом цитофлюориметрии по количеству CD45+CD34+ клеток и CD3-CD34+CD144+ клеток с использованием соответствующих моноклональных антител (BD PharMingen, США). Исследования у животных будут включатьподсчет количества клеток периферической крови (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты) с помощью гематологического анализатора PCE-90 (ERMA Inc., Япония), оценку количества коммитированных гемопоэтических предшественников в метилцеллюлозной среде, определение количества селезеночных колониеобразующих единиц (в т.ч. метод «тимидинового самоубийства), оценку интенсивности мобилизации гемопоэтических предшественников из костного мозга в периферическую кровь (количество КОЕс в крови), оценку окислительно-метаболической функции лейкоцитов крови и мононуклеарных клеток с помощью хемилюминесценцентного (ХЛ) метода, оценку миграции лейкоцитов из кожного эксплантата по методу Larsen, оценку активности металлопротеиназ-2, 9 (ММП-2,9) (зимографический анализ), методы определения компонентов внеклеточного матрикса в сыворотке крови, гистологические методы исследования и др.
Аппаратура и оборудование: Предполагается использование проточного цитофлюориметра FACS Calibur, клеточного сортера FACS Aria, проточного анализатора Bio-Plex Protein Assay System, СО2-инкубатора, морозильной камеры, программного замораживателя, многоканального спектрофотометра, а также традиционного лабораторного оборудования (ламинарные боксы, термостаты, холодильники, центрифуги, микроскопы, дозаторы и пр.)
Научная новизна: Будут получены новые данные о регуляции функциональной активности МСК в норме и при патологии. Впервые будет детально изучена зависимость функциональной активности МСК (супрессорной/стимуляторной, гемопоэзстимулирующей и др.) от уровня пролиферативной активности МСК. Будут охарактеризованы механизмы влияния МСК на восстановление лимфо/иммунопоэза у больных гемобластозами при проведении трансплантаций гемопоэтических стволовых клеток. Будут получены новые данные о свойствах и эффективности М2-подобных макрофагов при заболеваниях ЦНС у человека. Исследование циркулирующих гемопоэтических и эндотелиальных предшественников при травматическом повреждении головного мозга позволит впервые охарактеризовать эффективность мобилизации костно-мозговых предшественников у пациентов с различными исходами ЧМТ и оценить роль мобилизации стволовых клеток как потенциального прогностического маркера эндогенного репаративного ответа при травме головного мозга. В свою очередь, анализ субпопуляционного состава и функциональной активности клеток продукта сепарации, а также реконституции регуляторных Т-клеток в посттрансплантационном периоде позволит получить новые данные о роли различных иммунокомпетентных и стволовых клеток в восстановлении иммунной системы и исходах трансплантации гемопоэтических стволовых клеток у больных гемобластозами. В результате выполнения экспериментальных исследований на животных будут получены новые данные о состоянии костномозгового гемопоэза, функциональной активности стволовой кроветворной клетки в динамике формирования коллаген-индуцированного артрита, контактного дерматита, острого и хронического гепатита.
Ожидаемые результаты: Исследование влияния различных факторов на регуляторную активность МСК позволит более детально охарактеризовать феномен функциональной дихотомии МСК в норме и при патологии. При этом анализ взаимосвязи пролиферативной активности МСК с их регуляторными функциями и миграционной активностью послужит основой для более глубокого понимания возможных механизмов нарушения функциональной активности МСК при патологии и разработке подходе к коррекции их функций. Анализ влияния МСК на гомеостатическую пролиферацию лимфоцитов и восстановление наивных Т-клеток (в посттрансплантационном периоде у больных гемобластозами) позволит оценить эффект МСК in vivo на иммунную реконституцию в условиях глубокой цитопении и раскрыть механизмы стимулирующего действия МСК на восстановление наивных Т-клеток при проведении трансплантации гемопоэтических стволовых клеток больным гемоблатозами. Исследование особенностей фенотипа М1 и М2 макрофагов послужит основой для идентификации М2-ассоциированных маркеров у человека. При этом клиническая апробация М2 макрофагов при заболеваниях ЦНС позволит оценить безопасность и переносимость данного типа клеток и сделать предварительные заключения об их эффективности в стимуляции репаративных процессов. Выявление новых молекулярных и клеточных маркеров, характеризующихся диагностической и прогностической значимостью, с одной стороны позволит разработать новые методы прогноза исходов различных иммунопатологических состояний и эффективности их лечения, а с другой - идентифицировать новые потенциальные мишени для терапевтических воздействий. Проведенные на экспериментальных животных исследования состояния костномозгового гемопоэза, функциональной активности стволовой кроветворной клетки в динамике формирования коллаген-индуцированного артрита, контактного дерматита, острого и хронического гепатита позволят разработать новые технологии лечения ревматоидного артрита, контактного дерматита с помощью TNF-связывающих белков ВНО и ДНК-вакцины на основе гена ВНО, острого гепатита и гепатофиброза - с использованием метода трансплантации мезенхимальных клеток. В результате исследования будет обоснована новая биомедицинская технология трансдермальной доставки TNF и его блокаторов для терапевтических целей.
Взаимодействие с другими НИУ, вузами, клиниками: ФГУ НИИТО Минздравсоцразвития, ИЦиГ СО РАН Смета: 80 млн. руб.
Научно-медицинская литература
Аннотация Целью исследования является разработка методологии, а также способов прогноза и оценки эффективности применения стволовых и иммунокомпетентных клеток для иммуномодуляции и стимуляции репаративных процессов при различных иммунопатологических состояниях. В работе планируется разработать и апробировать технологии стимуляции репаративных процессов с использованием мезенхиальных стромальных клеток и макрофагов при лечении гемобластозов и ряда негематологических заболеваний; изучить прогностическую значимость прогениторных/иммунокомпетентных клеток как предикторов эндогенного регенеративного ответа и эффективности клеточных технологий; а также исследовать патогенетическую роль предшественников и разработать подходы к направленной регуляции функций стволовых/прогениторных клеток в моделях иммунопатологических состояний на животных. Полученные результаты позволят обосновать применение новых клеточных технологий и повысить эффективность лечения иммунопатологических заболеваний.
Популярное: Почему двоичная система счисления так распространена?: Каждая цифра должна быть как-то представлена на физическом носителе... Почему люди поддаются рекламе?: Только не надо искать ответы в качестве или количестве рекламы... Модели организации как закрытой, открытой, частично открытой системы: Закрытая система имеет жесткие фиксированные границы, ее действия относительно независимы... Как вы ведете себя при стрессе?: Вы можете самостоятельно управлять стрессом! Каждый из нас имеет право и возможность уменьшить его воздействие на нас... ©2015-2024 megaobuchalka.ru Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. (459)
|
Почему 1285321 студент выбрали МегаОбучалку... Система поиска информации Мобильная версия сайта Удобная навигация Нет шокирующей рекламы |