Морфология микроорганизмов

Лабораторная работа 3.

«Изучение основных морфологических признаков бактерий»

 

Бактерии составляют наиболее обширную и разнообразную группу микроорганизмов. Большинство бактерий – это одноклеточные организмы с прокариотическим типом строения клетки. Размножение бактерий осуществляется путем поперечного деления клетки на две равные части. Клетки после деления могут разъединяться, однако, у некоторых видов остаются вместе, образуя различные сочетания.

В пищевых производствах встречаются бактерии шаровидной (рис.5) и палочковидной (рис.6) форм.

Шаровидные бактерии (кокки) по расположению клеток подразделяют на микрококки – клетки, расположенные одиночно; диплококки – клетки, соединенные по две; тетракокки – клетки, соединенные по четыре в виде тетраэдра; стрептококки – кокки, расположенные в цепочки различной длины; сарцины – скопления кубической формы, напоминающие пакеты; стафилококки – скопления клеток, напоминающие грозди винограда.

 

 

Рис.5. Шаровидные бактерии: а – микрококки; б - диплококки;

в – тетракокки; г – стрептококки; д – стафилококки;

е – сарцины

 

Диаметр шаровидных форм колеблется от 1,0 до 2,5 мкм. Шаровидные бактерии по Граму красятся положительно.

Палочковидные бактерии имеют цилиндрическую форму. Длина клеток колеблется от 2 до 5 мкм, иногда 10…12 мкм. Ширина колеблется от 0,5 до 1 мкм.

 

а б в г

Рис.6. Палочковидные бактерии: а – палочки без спор; б – спорообразующие бактерии

рода Bacillus; в , г – спорообразующие бактерии рода Clostridium.

 

Палочки могут быть соединены попарно или в цепочки. Палочковидные бактерии бывают неспорообразующие (рис.6а) и спорообразующие (рис.6 б, в, г). Среди палочковидных бактерий есть подвижные и неподвижные формы. Неспорообразующие палочковидные бактерии грамотрицательные (за исключением палочковидных молочнокислых бактерий), спорообразующие бактерии по Граму красятся положительно. Эндоспоры бактерий формируются при неблагоприятных для бактерии условиях, являются покоящимися формами и выполняют защитную функцию. Обычно спорообразование происходит при исчерпании питательных веществ в среде, а также при несоответствии температуры, рН, влажности и т.п. оптимальным условиям для развития бактерии. Цитоплазма и ядерное вещество в спорогеной зоне концентрируются и уплотняются. Проспора (уплотненное тельце) покрывается многослойной оболочкой и образуется спора. Эндоспоры отличаются низким содержанием воды. Ферменты споры находятся в неактивном состоянии. Споры в клетке могут располагаться центрально и латерально, не изменяя форму клетки. Такое расположение спор характерно для бактерий рода Bacillus (рис.6 б). Для бактерий рода Clostridium характерно изменение формы клетки (рис.6 в, г) при образовании эндоспоры, в результате клетка приобретает форму веретена или теннисной ракетки.

Когда спора сформируется, клеточная стенка и остальные части клетки разрушаются, а спора высвобождается.

Споры хорошо переносят высушивание , длительное кипячение и другие неблагоприятные воздействия, которые губительны для вегетативных клеток.

В клетке бактерий образуется только одна эндоспора, которая при благоприятных условиях вновь прорастает в одну вегетативную клетку, поэтому спорообразование у бактерий не является способом размножения.

Многие бактерии образуют капсулу снаружи клеточной стенки, представляющую скопление слизистого вещества (полисахариды, полипептиды). В зависимости от размера различают микрокапсулу и макрокапсулу. При микроскопировании капсулированных бактерий капсулы имеют вид бесцветного ореола (рис.7), окружающего клетки, так как вещество капсул слабо фиксирует краситель и легко отмывается в процессе обработки препарата.

 

 

Рис.7. Капсулообразующие Рис.8. Актиномицеты: а - мицелий; б – спороносцы.

бактерии

 

 

Чаще всего для выявления капсул применяют способ «негативной» окраски (негативного контрастирования) с помощью жидкой туши. Для этого небольшое количество клеток с плотной среды помещают в каплю разбавленного фуксина, смешивают с каплей туши, накрывают покровным стеклом и просматривают с объективом 40х.

 

При этом на общем темном фоне препарата хорошо видны бесцветные капсулы, окружающие клетки бактерий, окрашенные в розовый цвет (рис.9).

 

 

К бактериям относится еще одна, встречающаяся в пищевых производствах особая группа микроорганизмов – актиномицеты (рис.8),которыетакже не имеют истинного ядра. Их клетки в основном имеют вид тонких длинных пря­мых ветвящихся нитей (рис.8а) и по внешнему виду похожи на клетки мицелиальных грибов. Актиномицеты обитают в воде, почве, попадают на растительные остатки и зерно, придавая им специфический землистый запах. Размножаются актиномицеты с помощью экзоспор, которые формируются на концах воздушного мицелия – спороносцах, последние имеют самую разнообразную форму (рис.8б). Актиномицеты являются грамположительными бактериями.

 

Цель занятия. 1.Закрепить технику приготовления и микроскопирования препарата- мазка.

2. Ознакомиться с некоторыми морфологическими особенностями бактерий, используя простые и сложные способы окрашивания и различные красители.

 

Задание

1. Приготовить препарат фиксированных окрашенных фуксином клеток шаровидных, палочковидных неспорообразующих и спорообразующих бактерий. Технику приготовления препарата, окрашенного простым способом, смотреть на стр. 13.

2. Промикроскопировать приготовленные препараты с объективом 100х и зарисовать, отметив взаимное расположение кокков, палочковидных бактерий, наличие и расположение спор у спорообразующих бактерий. Споры в окрашенных клетках не прокрашиваются, так как оболочка их мало проницаема для краски, и выглядят они в виде светлого пятка в клетке.

3. Приготовить препарат бактерии, предложенной преподавателем, и исследовать её отношение к окраске по Граму.

4. Промикроскопировать и зарисовать с объективом 100х, отметив её отношение к окраске по Граму.

5. Приготовить и промикроскопировать с объективом 40х и зарисовать препарат капсулообразующих бактерий (по усмотрению преподавателя) (способ окраски см. стр.18).

Оборудование и материалы.Микроскопы, флаконы с кедровым маслом, предметные стекла, красители – раствор фуксина, генциан-виолет, раствор Люголя, 96%-ный этиловый спирт, раствор туши, фильтровальная бумага – по числу студентов.

 

 

Контрольные вопросы

1. Какие формы клеток бактерий встречаются в пищевых производствах?

2. Какие группы шаровидных бактерий Вы знаете? Как они называются?

3. Какие бактерии образуют споры?

4. Как располагаются споры в клетках спорообразующих бактерий?

5. Какое значение имеют бактериальные эндоспоры? Какими свойствами они обладают?

6. Что такое капсулы, когда образуются?

7. Что такое актиномицеты? Где они встречаются ?

 

 

Лабораторная работа 4.

 

Тема 2. Морфология микроорганизмов. Продолжение.

«Изучение основных морфологических и культуральных признаков мицелиальных грибов».

Грибы – это обширная группа эукариотных микроорганизмов, составляющих царство Mycota. Все грибы делят на две группы: макромицеты и микромицеты (мицелиальные грибы и дрожжи). У первых образуются крупные плодовые тела (например, у шляпочных грибов), у вторых они отсутствуют, и весь жизненный цикл у них предоставлен микроскопическими формами.

Морфологические признаки. Вегетативное тело простейших примитивных грибов состоит из одной клетки без клеточной стенки. Преобладающее большинство мицелиальных грибов имеет мицелиальное строение. Одноклеточные грибы, утратившие способность к мицелиальному росту, называются дрожжами и относятся к различным систематическим группам.

Их вегетативное тело представлено мицелием (грибницей), который состоит из системы ветвящихся нитей, называемых гифами. Толщина гиф мицелия варьирует от 2 до 30 мкм и более. Нити часто хорошо видны невооруженным глазом. Мицелий пронизывает субстрат и вcей поверхностью поглощает из него питательные вещества (субстратный мицелий), а также располагается на его поверхности и может подниматься над субстратом (поверхностный и воздушный мицелий). На воздушном мицелии обычно образуются органы размножения. Мицелий низших грибов лишен перегородок (септы) – неклеточный мицелий. У высших грибов мицелий разделен перегородками (клеточный), однако септы у грибов имеют центральные поры, через которые осуществляется транспорт веществ.

Грибы, в отличие от бактерий, характеризуются разнообразием способов размножения – вегетивным, бесполым и половым. Органы бесполого и полового размножения грибов чрезвычайно разнообразны по строению и являются основой классификации этих организмов.

Одни грибы вегетативно размножаются без образования специализированных органов. Чаще всего это размножение отдельными участками (фрагментами) мицелия. Каждый участок мицелия, попадая на питательную среду, способен дать начало новому организму, подобному исходному. У других грибов гифы распадаются на отдельные клетки овальной или цилиндрической формы (оидии)(рис.10А). У некоторых грибов такие клетки до своего разделения покрываются толстой оболочкой – хламидоспорам (рис.10 Б).

 

 

Рис.10. Вегетативное и бесполое размножение грибов: Вегетативное размножение – А, Б;

Бесполое размножение: А – с помощью конидий, В – с помощью спорангиоспор

 

Бесполым называется размножение с образованием специализированных органов, появлению которых не предшествует предварительное слияние клеток и их ядер. Чаще всего бесполое размножение у грибов осуществляется посредством спор, образующихся на специализированных органах. Споры грибов образуются в результате митотического деления ядра (такого способа деления, при котором образуются новые клетки идентичные материнским). Споры очень разнообразны по форме: круглые, овальные, цилиндрические, игловидные, звездчатые и т.д. Цвет и размер спор у грибов отличаются разнообразием. Споры могут быть одноклеточными и многоклеточными.

У низших грибов бесполые споры (спорангиоспоры) образуются внутри специализированных вместилищ – спорангиев (рис.10 В). У высших грибов споры (конидии) образуются на специализированных органах, формирующихся на специализированных гифах (рис.10 Г).

Половое размножение у грибов осуществляется путем последовательного слияния специализированных клеток, затем их ядер. В результате образуется особая половая клетка – зигота. Затем следует редукционное деление ядра – мейоз, в результате которого образовавшиеся новые клетки – споры - несут генетическую информацию материнской и отцовской клеток. Споры полового размножения выполняют двойную функцию: сохранение вида и размножения. Споры полового размножения у мицелиальных грибов пищевых производств образуются только при неблагоприятных условиях. На сырье, полупродуктах и готовой продукции пищевых производств мицелиальные грибы размножаются с помощью спор бесполового размножения.

Культуральные признаки. На плотных средах в чашках Петри просматривают характер роста грибов и отмечают размер колоний , их форму, плотность, строение наружного края и центра, характер поверхности, цвет колоний, мицелия и органов размножения, окраску субстрата и обратной стороны колоний, выделение капель жидкости. На плотных средах мицелиальные грибы образуют округлые или широко распространенные по поверхности, не врастающие в субстрат, пушистые, нитевидные, паутинообразные, ватоподобные или мучнистоподобные колонии. Вегетативный мицелий большинства видов не окрашен. Пигментирован только плодоносящий мицелий. Поэтому молодые колонии – белые или сероватые. По мере развития органов плодоношения колонии приобретают окраску – желтую, розовую, бежевую, красную, зеленую, черную и т.п.

Согласно современной классификации распределены на шесть классов грибов: хитридиомицеты, оомицеты, зигомицеты, аскомицеты, базидиомицеты и дейтеромицеты.

Наиболее широко распространены в природе мицелиальные грибы, относящиеся к трем классам: зигомицеты, аскомицеты (сумчатые) и дейтеромицеты (несовершенные).

Зигомицеты имеют неклеточный многоядерный хорошо развитый мицелий, образующий характерный войлокообразный налет на питательной среде. Размножаются зигомицеты как половым, так и бесполым путем с помощью спорангиоспор, формирующихся внутри спорангия.

Их зигомицетов в природе особенно распространены так называемые мукоровые грибы. Наиболее часто среди них встречаются виды родов Mucor и Rhizopus (рис.11).

 

 

Рис.11. Грибы родов Mucor (рис.11а) иRhizopus (рис.11б)

 

Многие грибы рода Mucor вызывают порчу пищевых продуктов, образуя пушистые налеты. Отдельные виды используют для получения микробного молокосвертывающего фермента – ренина, используемого в сыроделии. Гриб Mucor racemosus способен вызывать слабое спиртовое брожение, в связи с чем его используют, наряду с дрожжами, в некоторых странах Востока при производстве алкогольных напитков и при изготовлении специфических продуктов питания, сброженных из бобов сои.

Грибы рода Rhizopus вызывают так называемую «мягкую гниль» ягод, плодов и овощей. Мукоровые грибы органические кислоты и ферменты.

Среди мукоровых грибов существуют возбудители заболеваний человека и животных. Некоторые из этих грибов являются паразитами насекомых, их используют для уничтожения вредителей сельскохозяйственных культур.

К аскомицетовым грибам относятся мицелиальные грибы с разветвленным клеточным мицелием и дрожжи. Половое размножение осуществляется аскоспорами, образующимися в асках (сумках). Сумки у мицелиальных аскомицетов находятся в плодовых телах, представляющих плотное переплетение гиф. Бесполое размножение мицелиальных грибов осуществляется конидиями, образующимися на конидиеносцах двух форм (рис.12).

а б

 

Рис.12. Аспергилловые (а) и пеницилловые (б) грибы:

1 – опорная клетка; 2 – конидиеносцы; 3 – фиалиды; 4 – конидии.

 

Из мицелиальных аскомицетов чаще всего встречаются виды родов Aspergillus и Penicillium (аспергилловые и пеницилловые грибы). У представителей рода Aspergillus (так называемая «леечная плесень») на конидиеносцах образуются вздутия в форме головки (рис.12 а). На ней вырастают фиалиды, на которых развиваются цепочки конидий. Конидиеносцы пенициллов двукратно кистевидно ветвятся. На фиалидах отшнуровываются конидии, образуя цепочки (12 б). Мицелий у видов Aspergillus и Penicillium не окрашен, а конидии имеют различную окраску: чаще всего у Penicillium серовато-зеленую или сине-зеленую, а у Aspergillus- коричневую, черную, желтую, зеленую.

Сумчатые грибы широко распространены в природе. Многие из них являются возбудителями порчи плодов и овощей, многих пищевых продуктов. Некоторые из них вызывают повреждение промышленных изделий и материалов (текстиля, резины, целлофана, пластмасс и др.). Отдельные представители аспергилловых и пеницилловых грибов используют в пищевой и микробиологической промышленности. Некоторые аспергиллы патогенны для человека и животных, вызывают у них поражение дыхательных путей, кожи, слизистой оболочки рта. Примерно 75% мицелиальных грибов, в том числе и аскомицетовых, развиваясь на сырье и готовых пищевых продуктах, выделяют токсичные для человека и животных продукты метаболизма, большая часть из которых являются канцерогенными. Существуют и фитопатогенные аскомицеты – возбудители спорыньи злаковых, склеротинии овощей, монилиоза фруктов. К аскомицетам относятся также трюфели, и сморчки, плодовые тела которых употребляют в пищу, а также строчки, считающиеся условно съедобными, так как некоторые их виды ядовиты.

Несовершенные грибы (дейтеромицеты) – большая группа грибов, включающая как одноклеточные (дрожжи), так и многоклеточные мицелиальные формы. Общим для всех грибов этого класса является отсутствие половой стадии при размножении. Конидии мицелиальных дейтеромицетов образуются на изолированных или расположенных группами конидиеносцах в специальных структурах, называемых пикнидами.

Среди дейтеромицетов довольно широко распространены представители родов Fusarium, Botrytis, Alternaria, Helminthosporium и Geotrichum.

У видов Fusarium (рис.13) гифы разнообразно разветвленные, с перегородками. На питательном субстрате образует белые или окрашенные в розовый, желтый, красно-фиолетовый или коричневый цвет колонии, поверхностные или погруженные в среду. Пигмент нередко диффундирует в сусбтрат, окрашивая его в разные оттенки – от розового до коричневого. Образует два типа конидий. Макроконидии имеют характерную веретено-серповидную форму, с одной или несколькими поперечными перегородками. Микроконидии – мелкие, овальные, бесцветные, одноклеточные, реже с одной или с двумя перегородками. Конидиеносцы нитевидные, простые или разветвленные, рассеянные по всему мицелию. Известно более 800 видов фузариев. Они щироко распространены в природе. Среди них много паразитических форм, вызывающих заболевания злаков, корне- и клубнеплодов. Некоторые виды образуют канцерогенные вещества. F. moniliforme используют для производства гиббереллина – стимулятора роста растений.

 

Рис.13. Fusarium: а-конидии; Рис.14. Botrytis

б - мицелий

 

Грибы рода Botrytisразвиваются в виде стелющегося серо-оливкового многоклеточного мицелия, пронизывающего субстрат. Конидиеносцы септированные, бесцветные, дымчатые или бурые, древовидно разветвленные, реже – простые, на концах слегка вздутые. На конидиеносцах образуются короткие, густо сидящие зубчиковидные фиалиды с гроздями или головками конидий. Конидии яйцевидные, эллиптические, иногда шаровидные или удлиненные, бесцветные, серые или оливковые. Botrytis cinerea ( от греч.botrytis – гроздь, cinerea – серая, как зола) вызывает гниль сахарной свеклы, винограда, плодов, ягод и других культурных растений, продуцируют целлюлозолитические, пектолитические и другие ферменты.

Род Alternaria (рис.15) характеризуется своеобразным многоклеточными с поперечными и продольными перегородками, темноокрашенными груше-

Видными или заостренно-вытянутыми конидиями, одиночными или соединенными в цепочки, сидящими на слабо развитых конидиеносцах. Колонии вначале светлые, пушистые, затем зеленовато-серые или оливково-черные, бархатистые, ворсистые. Выделяемый пигмент диффундирует в среду, окрашивая ее в черный цвет. Разные виды Alternaria широкораспространены в почве, вызывают у сельскохозяйственных растений альтернариоз (черную гниль).

 

 

Рис.15 Alternaria Рис.16 Helminthosporium Рис.17 Geotrichum

Род Helminthosporium (рис.16) образует темноокрашенные конидии, прямые или слегка изогнутые, цилиндрические, веретенообразные или булавовидные с несколькими поперечными перегородками. Болезни злаков, вызываемые грибами этого рода, называют гельминтоспориозами. По форме и проявлению они весьма разнообразны. Гельминтоспориоз может проявляться в виде корневой гнили, различного типа пятнистости листьев, черных узлов на стеблях, сажистых налетов на колосьях (черный зародыш семян). Некоторые виды этого рода грибов относятся к сапрофитам и развиваются на корнях, листьях, сухих ветвях, стеблях древесных и травянистых растений.

Род Geotrichum (рис..17)образует сильно разветвленный, клеточный, белый, мучнистоподобный мицелий. Гифы легко распадаются на прямоугольные или овальные оидии, служащие для размножения и напоминающие дрожжи. Geotrichum candidum развивается в виде бархатистого белого налета (пятен) на поверхности хранящихся кисломолочных продуктов, сливочного масла, сыров, квашеных овощей, прессованных дрожжей, на плохо высушенном хмеле, на стенках оборудования, сырых помещений.

 

План проведения занятия

1. Ознакомиться с морфологией грибов (см. на стр.20…26 и главу 1 учебника.

2. Ознакомиться с приготовление препарата грибов типа «раздавленная капля».

3. Описать культуральные признаки изучаемых грибов.

4. Приготовить препараты грибов Rhizopus, Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Alternaria, Helminthosporium, Geotrichum. Промикро-скопировать с объективами 10х и 40х и зарисовать. На рисунках дать обозначение органов размножения и деталей их строения.

 

 

5. Просмотреть грибы на чашках Петри под бинокулярным микроскопом с увеличением 4х и 10х.

 

 

Методические указания

1. Большинство мицелиальных грибов, развиваясь на пищевых продуктах, размножаются бесполым путем (спорами, конидиями, оидиями). Поэтому на лабораторных занятиях рассматриваются только способы бесполого размножения на примерах грибов – распространенных возбудителей порчи продуктов. Культуры этих

грибов выращивают в чашках Петри¹ на среде сусло-агар. Культуры в чашках не следует без надобности держать открытыми, так как споры грибов легко осыпаются и рассеиваются, что может привести к нежелательной контаминации ими лаборатории и самих чистых культур.

Вначале просматривают и описывают культуральные признаки грибов визуально. После визуального просмотра приступают в микроскопическому изучению морфологических признаков - мицелия и органов размножения с увеличениями 40х, 100 и 400х. При небольшом увеличении 40х и 100х выясняют наличие воздушного мицелия, его характер, расположение спорангие- и конидиеносцев, спор и конидий. Наблюдения ведут у края колонии, на границе пигментированной и неокрашенной части колонии и в центре.

Приготовление препаратов грибов для микроскопирования производят двумя обожженными и затем охлажденными препаровальными иглами. На обезжиренное чистое предметное стекло наносят каплю смеси равных объемов глицерина и этилового спирта (1:1). Отбирают небольшой кусочек мицелия вместе с плодоносящими гифами и прилегающей к нему тонким слоем питательной среды. В эту каплю вносят отобранный кусочек мицелия гриба. Осторожно, не нарушая структуры мицелия, расправляют гифы мицелия и плодоносящие органы иглами, после чего накрывают покровным стеклом и слегка прижимают.

2. Для приготовления препарата гриба Rhizopus нужно двумя предварительно обожженными и охлажденными препаровальными иглами (рис.2) взять его черновато-серый пушистый воздушный мицелий и накрывать покровным стеклом осторожно, без резкого броска, чтобы не раздавить спорангии – вместилища спорангиоспор. После этого иглы обжечь в пламени горелки.

При микроскопировании выявить одноклеточное строение мицелия

----------------------------------------------------------------------------------------------------

¹ Чашки Петри – стеклянные, круглые, плоские чашки с крышкой диаметром 6…11 см и

высотой 1,5…2 см.

 

и органы размножения – спорангиеносцы. Рассмотреть их по всей длине, передвигая соответствующим образом препарат. Спорангиеносцы Rhizopus крупные, неветвящиеся, отрастают как

правило от грибницы пучками. Спорангии, сидящие на их верхушках (спорангиеносцах), крупные, шарообразные, с массой спор, которые видны через тонкую прозрачную оболочку спорангиев. Спорангиоспоры одноклеточные, округлые или эллипсоидальные, бесцветные или сероватые (рис.11б).

В препарате всегда есть много свободно лежащих спор, высыпавшихся из некоторых лопнувших спорангиев.

3. Для приготовления препарата гриба Aspergillus взять воздушный окрашенный мицелий. При микроскопировании найти многоклеточные гифы мицелия и органы размножения – конидиеносцы. Конидиеносец по внешнему виду простой, одноклеточный, ветвящийся. На его конце имеется булавовидное вздутие, на котором расположены в один ярус бутылочковидные фиалиды, а на них в виде цепочек – конидии. Верхушка канидиеносца с массой неосыпавшихся спор кажется плотной, плохо просвечивается, ее можно рассмотреть лишь при осыпании спор (рис. 12а).

4. Для приготовлении препарата гриба Penicillium рекомендуется брать более молодую, зеленую часть грибницы – на границе с белым краем ее, заметно внедряясь в нее препаровальными иглами.

При микроскопировании найти многоклеточные гифы и органы размножения – конидиеносцы. Они представляют собой многоклеточные гифы, кистевидно разветвленные на концах. На концах ветвей расположены фиалиды (по 2…4), а на фиалидах – цепочки одноклеточных конидий, имеющих голубовато-зеленую окраску с различными оттенками (рис.12б).

5. Для приготовления препарата гриба Fusarium следует взять небольшой кусочек грибницы ярко розового или коричневого оттенков.

При микроскопировании найти многоклеточный мицелий и конидии серповидноизогнутые и банановидные одноклеточные или многоклеточные в зависимости от вида данного рода (рис.13).

6. Для приготовления препарата гриба Alternaria взять грибницу в черных участках ее, заметно внедряясь иглами вглубь грибницы.

При микроскопировании найти многоклеточный мицелий и крупные многоклеточные темноокрашенные конидии округло-грушевидной или заостренно-вытянутой формы. Обратить внимание на то, что конидиеносцы – гифы, на которых находятся конидии, слабо развиты и мало отличаются от других вегетативных гиф (чаще они слегка пигментированы – серые, буроватые). Конидии образуются на таких конидиеносцах поодиночке или короткими цепочками (рис.15).

7. Для приготовления препарата гриба Helminthosporium взять грибницу в темных ее участках, заметно внедряясь иглами вглубь грибницы.

При микроскопировании найти многоклеточный мицелий и крупные многоклеточные конидии булавовидной формы с поперечными перегородками оливкового цвета (рис.16).

8. Для приготовлении препарата гриба Geotrichum снять (слегка соскабливая ) иглой его белый стелющийся мицелий с субстрата.

При микроскопировании следует установить многоклеточность мицелия и отсутствие специальных органов размножения. Гриб размножается оидиями, которые образуются на концах гиф путем их расчленения в виде бесцветных клеток прямоугольной или округло-прямоугольной формы. В препарате могут наблюдаться иногда цепочки нераспавшихся оидий (рис.17).

 

 

Оборудование и материалы. Микроскопы, флаконы с глицериновой смесью, предметные и покровные стекла, препаровальные иглы, фильтровальная бумага – по числу студентов.

Контрольные вопросы

 

1. Каково строение тела мицелиальных грибов?

2. Какие признаки грибов называются культуральными?

3. Как приготовить микроскопический препарат мицелиальных грибов?

4. Назовите типы спор и органы бесполого способа размножения грибов?

5. Чем отличается строение конидиеносцев у различных мицелиальных грибов?

6. Приведите примеры грибов, размножающихся спорангиоспорами, конидиями и оидиями?

7. Каково практическое значение грибов Rhizopus, Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Alternaria, Helminthosporium, Geotrichum?

 

 

Лабораторная работа 5.

 

Тема 2. Морфология микроорганизмов. Продолжение.

«Изучение основных морфологических и культуральных признаков дрожжей.

Дрожжи являются одноклеточными грибными неподвижным организма-ми, не имеющими настоящего мицелия.

Морфологические признаки дрожжей. Дрожжевые клетки имеют самую разнообразную форму (рис.18): округлую, овальную, яйцевидную (Saccharomyces), цилиндрическую (Schizosaccharomyces), лимоновидная (Saccharomycodes) и т.д.

 

а б в

 

Рис. 18. Форма клеток и способы вегетативного размножения дрожжей:

а – почкование; б – деление; в – почкующееся деление

 

Размеры клеток у разных видов дрожжей, применяемых в пищевых производствах, варьируют от 3…5 мкм в поперечнике и 6…10 мкм в длину, Форма и размеры дрожжевых клеток зависят от вида, возраста, питательной среды, способа культивирования. У зрелых дрожжей обнаруживаются 1…2 вакуоли различной формы. В цитоплазме имеются различные клеточные включения: гликоген, волютин, капли жира.

Способы вегетативного размножения дрожжей. Размножаются дрожжи преимущественно вегетативным способом, реже – половым с помощью спор. Одним из наиболее распространенных способов вегетативного размножения, характерного для дрожжей овальной и круглой формы является почкование (рис.18 а). Дрожжи цилиндрической формы размножаются вегетативно делением (рис.18 б). Для дрожжей лимоновидной формы характерно почкующееся деление, когда на широком основании формируется почка и одновременно закладывается перегородка (рис.18 в). Для изучения морфологии дрожжи выращивают на стерильном сусле концентрацией 8…10% СВ, сусло-агаре при 25…28⁰С в течение 2…5 суток.

Выявление включений клетки. Гликоген (запасной полисахарид) обнаруживают при помощи прижизненной окраски дрожжей раствором йода. Гликоген окрашивается в красно-бурый цвет и является признаком зрелости дрожжей.

Метахроматин или волютин (запасной полифосфат в соединении с простыми белками и рибонуклеиновой кислотой) выявляют по способу Омелянского: