Тинкториальные свойства микроорганизмов, их сущность, дифференциально-диагностическое значение, определение методами Грама и Циль-Нильсена

Лейшмании, кожный и висцеральный лейшманиоз.

Таксономия: тип Sarcomastigophorae, подтип Mastigophora — жгутиковые, класс Zoomastigophora, отряд Kinetoplastida, род Leishmania.

Характеристика возбудителей: внутриклеточные паразиты, развивающиеся в макрофагах или клетках ретикулоэндотелиальной системы. Размножаются простым делением, проходят два цикла бесполого развития: жгутиковый и безжгутиковый. В жгутиковом цикле паразиты развиваются на питательных средах или в кишечнике москита, зараженного при сосании крови больных людей или животных. Заглоченные москитом амастиготы превращаются в кишечнике в промастиготы, делятся и на 6е-сутки накапливаются в глотке москита. Возбудитель имеет удлиненную веретенообразную форму. Протоплазма содержит ядро, цитоплазму, зерна волютина и кинетопласт. Жгутик, отхо-дящий от заостренного конца, способствует перемещению лейшманий.

Безжгутиковый цикл проходит в ретикулоэндотелиальных клетках печени, селезенки, лимфатических узлов, в макрофагах инфицированного организма. Паразиты имеют округлую форму, без жгутиков; при окраске по Романовскому—Гимзе цитоплазма приобретает серовато-голубой цвет, а ядро и кинетопласт — красновато-фиолетовый.

Культивирование: питательная среда NNN, содержащую агар с дефибринированной кровью кролика. Лейшмании также растут на хорион-аллантоисной оболочке куриного эмбриона и в культурах клеток.

Эпидемиология: в странах теплого климата. Механизм передачи возбудителей — трансмиссивный, через укус переносчиков — москитов. Основные источники возбудителей: при кожном антропонозном лейшманиозе — люди; при кожном зоонозном лейшманиозе — грызуны; при висцеральных лейшманиозах — люди; при кожно-слизистом лейшманиозе — грызуны, дикие и домашние животные.

Патогенез и клиника. Различают два возбудителя кожного лейшманиоза: L. tropica — возбудитель антропонозного лейшманиоза и L. major — возбудитель зоонозного кожного лейшманиоза.

Антропонозный кожный лейшманиоз характеризуется длительным инкубационным периодом — несколько месяцев. На месте укуса москитом появляется бугорок, который увеличивается и через 3 месяца изъязвляется. Язвы чаще располагаются на лице и верхних конечностях, рубцуются к концу года. Зоонозный кожный лейшманиоз (рано изъязвляющийся лейшманиоз, пендинская язва, сельская форма) протекает более остро. Инкубационный период составляет 2—4 недели. Мокнущие язвы чаще локализуются на нижних конечностях. Кожно-слизистый лейшманиоз вызывают лейшмании комплекса L. braziliensis; развивается гранулематозное и язвенное поражение кожи носа, слизистых оболочек рта и гортани. Антрапонозный висцеральный лейшманиоз вызывается лейшманиями комплекса L. donovani; у больных поражаются печень, селезенка, лимфоузлы, костный мозг и пищеварительный тракт.

Иммунитет: стойкий пожизненный

Микробиологическая диагностика. В мазках (из бугорков, содержимого язв, пунктатов из органов), окрашенных по Романовскому— Гимзе, обнаруживают внутриклеточно расположенные мелкие, овальной формы лейшмании (амастиготы). Для выделения чистой культуры возбудителя делают посев на среду NNN: инкубация 3 недели. Серологические методы недостаточно специ-фичны. Возможно применение РИФ, ИФА.

Кожно-аллергический тест на ГЗТ к лейшманину применяют при эпидемиологических исследованиях лейшманиоза.

Лечение: При висцеральном лейшманиозе применяют препараты сурьмы и диамидины (пентамидин). При кожном лейшманиозе — акрихин, амфотерицин.

Профилактика: уничтожают больных животных, проводят борьбу с грызунами и москитами. Иммунопрофилактику кожного лейшманиоза осуществляют

Тинкториальные свойства микроорганизмов, их сущность, дифференциально-диагностическое значение, определение методами Грама и Циль-Нильсена.

Тинкториальные св-ва - св-ва бактерий, грибов и простейших, характеризующие их способность вступать в реакцию с красителями и окрашиваться определенным образом. Окраску мазка производят простыми или сложными методами. Простые заключаются в окраске препарата одним красителем (Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.). При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые). Сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и др.) включают последовательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-диагностическое значение. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков (серебрение по Морозову), клеточной стенки (по Грамму), нуклеоида(по Фельгену, Романовскому-Гимзе), капсулы (по мет. Бурри-Гинса), споры (По Ожешко, по Шефферу) и разных цитоплазматических включений, например, зерна волютина (по Нейссеру). Окраска по методу Грамма. На фиксированный мазок нанести карбол.-спиртовой р-р генцианового фиолетового через фильтрационную бумагу. Через 1-2 мин.ее снять, краситель слить. Нанести р-р люголя на 1-2 мин. Обесцветить этиловым спиртом в теч. 30-60с. до прекращения отхожд. фиолетовых струек красителя. Промыть водой. Докрасить водным раствором фуксина в теч. 1-2 мин., промыть водой, высушить. Грам+ в темно-фиолет., Грам- в красный. Окраска по Грамму имеет важное диагностич. значение. К Грам+ бакт. относятся стафилококки, стрептококки, коринебактерии дифтерии, микобактерии туберкулеза. К Грам- гонококки, менингококки, кишечная палочка. Некоторые виды бакт. могут окраш. по Граму вариабельно в зависимости от возраста, особенностей культивирования и других факторов. Основная ошибка состоит в переобесцыечивании мазка этиловым спиртом, Грам+ при этом утрачивают первоначальную окраску генциановым фиолетовым и приобретают красный цвет в рез. последующей окраске фуксином. А Грам- могут сохранять сине-фиолетовый цв. Окраска на кислотоустойчивость по Циллю-Нильсену. На фиксир. мазок нанести карболовый р-р фуксина через фильтрационную бумагу и подогреть до появления паров в течении 3-5 мин. Снять бумагу, промыть водой. Нанести 5% р-р серной к-ты или 3% р-р смеси спирта с хлороводородной к-той на 1-2 мин. для обесцвечивания. Промыть водой. Докрасить мазок водным р-ром метиленового синего в теч. 3-5 мин. Промыть водой, высушить. Кислотоустойчивость обусловлена наличием в клет. стенке и цитоплазме бакт. повышенного кол-ва липидов, воска и оксикислот. Р-р карболовой к-ты разрыхляет клет. стенку и повышает ее тинкториальные св-ва, а высокая концентрация красителя и нагревание в проц. окраски усиливают реакцию взаимод. красителя с бакт. кл-ми. При обработке преп. серной к-той некислотоустойчивые обесцвечиваются и окраш. метиленовым синим в голубой цв, а кислотоустойчивые остаются окашеными фуксином в красный цвет.