А. Моноклональные антитела

Занятие №19 (Лабораторная работа)

Тема: «Учение об иммунитете.

Неспецифические и специфические факторы защиты организма.

Антигены и антитела»

Цель занятия: ознакомиться с понятием «иммунитет»; изучить виды иммунитета,  неспецифические и специфические факторы защиты организма; ознакомиться с понятиями «антиген» и «антитело»; изучить антигенную структуру бактериальной клетки.

 

План занятия (Вопросы для обсуждения) :

1. Понятие об иммунитете. Виды иммунитета.

2. Неспецифические факторы защиты организма. Анатомо-физиологические факторы неспецифической резистентности.

3. Гуморальные факторы неспецифической резистентности.

4. Клеточные факторы неспецифической резистентности. Фагоцитоз.

5. Понятие об антигенах. Антигенная структура бактериальной клетки. Виды антигенной специфичности.

6. Понятие об антителах. Классификация и строение антител. Специфичность антител.

7. Динамика выработки антител. Моноклональные антитела.

 

Оформление протокола лабораторного занятия:

· Выписать определения понятий «иммунитет».

· Переписать или вклеить схему «Виды иммунитета».

· Дать определение понятию «комплемент». Вклеить схему «Пути активации комплемента».

· Вклеить или зарисовать схему «Стадии фагоцитоза» с описанием каждой стадии.

· Выписать определения понятий «антиген».

· Выписать основные признаки и свойства антигенов.

· Зарисовать схему «Антигенная структура бактериальной клетки».

· Дать определение понятиям: «антитело», «аффинность», «авидность», «валентность АТ».

· Дать краткую характеристику основных классов иммуноглобулинов (IgG, IgE, IgA, IgM, IgD), зарисовать или вклеить схемы их строения.

 

Дополнительный материал

Антигенная структура бактериальной клетки	Строение IgG
Стадии фагоцитоза (по Ройту А., 1991)

Пути активации комплемента

Первичный и вторичный иммунный ответ

Классификация видов иммунитета:

Моноклональные антитела

А. Моноклональные антитела

Моноклональные антитела (МАТ) секретируются иммунными клетками, происходящими от единственной антителообразующей клетки. Поэтому МАТ направлены только против определенного эпитопа иммуногенного вещества, так называемой "антигенной детерминанты". Для получения МАТ изолируют лимфоциты из селезенки иммунизированной мыши (1) и производят их слияние с опухолевыми клетками мыши (клетками миеломы) (2). Это необходимо, так как жизнеспособность антителопродуцирующих лимфоцитов в культуре ограничена лишь несколькими неделями. При слиянии с опухолевой клеткой возникают гибридные клетки, так называемые гибридомы, которые являются потенциально бессмертными.

Слияние клеток (2) является редким событием, частота которого повышается в присутствии полиэтиленгликоля [ПЭГ (PEG)]. Отбор продуктивных гибридных клеток проводится при длительной инкубации первичной культуры в ГАТ-среде (НАТ-среде) (3), содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимидин. Аминоптерин, аналог дигидрофолиевой кислоты, конкурентно ингибирует дигидрофолат-редуктазу и тем самым биосинтез дТМФ . Поскольку дТМФ существенно необходим для синтеза ДНК, миеломные клетки не могут выживать в присутствии аминоптерина. С другой стороны, клетки селезенки могут преодолевать действие ингибитора, используя для синтеза ДНК гипоксантин и тимидин, однако и они существуют в течение ограниченного времени. Только гибридома выживает в виде культуры в среде ГАТ, так как эти клетки обладают одновременно бессмертием миеломных клеток и способностью клеток селезенки приспосабливаться к аминоптерину.

в действительности продуцировать антитела способны только единичные гибридомные клетки. Такие клетки необходимо выделить и размножить клонированием (4). После тестирования клонов на способность образовывать антитела отбираются положительные культуры, которые снова клонируются и подвергаются последующей селекции (5). В результате получают гибридому, продуцирующую моноклональные антитела. Производство моноклональных антител этими клетками осуществляют in vitro в биореакторе или in vivo в асцитной жидкости мыши (6).