Выявление и определение численности микроорганизмов почвы высевом на МПА

Мясо-пептонный агар – богатая питательными веществами среда, на которой развиваются многие гетеротрофные микроорганизмы. При высеве из почвы на МПА вырастают микроорганизмы различных систематических и физиологических групп: грамотрицательные не образующие эндоспор бактерии родов Pseudomonas, Flavobacterium и Achromobacter, грамположительные спорообразующие палочки рода Bacillus, кокки родов Miсrococcus и Sarcina, различные микобактерии (род Mycobacterium), некоторые высшие актиномицеты (род Actinomyces – Streptomyces) и мицелиальные грибы (род Aspergillus, Penicillium, Trichoderma, Allernaria и др.).

Бактерии рода Pseudomonas образуют на МПА колонии круглые и неправильной формы, средние, крупные и широко распространяющиеся по поверхности среды, выпуклые и плоские, слизистые и пастообразные, просвечивающие, бесцветные или пигментированные (грязно-белые, синие, сине-зеленые, красные, желтые, оранжевые, бурые и черные).

Характерная особенность ряда представителей рода Pseudomonas – образование сине-зеленого или желто-зеленого флуоресцирующего пигмента. Флуоресценцию колонии иногда удается наблюдать только в ультрафиолетовых лучах. У некоторых видов пигменты диффундируют в среду, окрашивая ее в соответствующий цвет. Пигментообразование зависит от состава и рН среды.

Клетки Pseudomonas прямые или слабо изогнутые, часто с заостренными концами, располагаются одиночно, парами или короткими цепочками, подвижны, имеют полярные жгутики (монотрихи или лофотрихи). Размеры клеток различных видов колеблются в пределах 0,7–7,5×0,3–1,5 мкм. С возрастом форма клеток не меняется. Только в очень старых культурах могут быть клетки до 14 мкм длиной и инволюционные формы.

Виды рода Flavobacterium образуют на МПА колонии 2–3 мм в диаметре, круглые, редко – неправильной формы, гладкие, желтого цвета за счет каротиноидных пигментов, не диффундирующих в среду. Клетки флавобактерий – мелкие (0,3–4,5×0,25–1,0 мкм), слегка искривленные, подвижные (перитрихи) или неподвижные палочки, расположенные одиночно, в парах и коротких цепочках. В некоторых культурах образуют нити. Для флавобактерий характерен спэпинг-тип обособления делящихся клеток.

Представители рода Achromobacter вырастают на МПА в виде мелких, круглых, гладких или сухих колоний, белого или серого цвета. Это мелкие палочки (0,5–2,3, редко до 5,8×0,1 – 1,0 мкм), одиночные, в парах, реже – в коротких цепочках; неподвижные, или подвижные (перитрихи).

Виды рода Micrococcus образуют на МПА довольно разнообразные колонии: чаще – мелкие и средних размеров (2–4 мм в диаметре), но у некоторых видов – широко разрастающиеся по поверхности среды; матовые, влажные, блестящие и даже маслянистые; плоские и выпуклые; гладкие, зернистые, мелкоскладчатые, бугристые, иногда радиально исчерченные; пастообразной консистенции, иногда слизистые, реже сухие и плотные; чаще всего белые, белоснежные, серые, реже бесцветные, иногда буроватые, желто-зеленые, желто-лимонные, розовые и красные. Пигменты не диффундируют в среду. Клетки сферические, мелкие, 0,2–1,5 мкм в диаметре, одиночные и соединенные в пары, по три-четыре в ряд, или в неправильные бесформенные скопления, легко распадающиеся на отдельные элементы. Деление клетки происходит в любом направлении. Как правило, микрококки неподвижны и не образуют эндоспор.

У рода Sarcina колонии средних размеров, компактные, правильной круглой формы, лишь иногда широко распространяются по поверхности среды; выпуклые или плоские; гладкие, зернистые, бугристые или складчатые; матовые, влажные или жирноблестящие; пастообразной консистенции или слизистые; белые и белоснежные, чаще желтые и лимонно-желтые, иногда розовые и красные. Клетки сферические, 0,5–1,5, иногда 2–3 мкм в диаметре, как правило, неподвижные и не образующие эндоспор, делятся в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и образуют скопления кубической формы.

Род Mycobacterium относится к группе актиномицетов. Колонии микобактерий на МПА растут медленно. Вначале они мелкие, круглые, компактные, но постепенно увеличиваются и в отдельных случаях довольно широко разрастаются по поверхности среды. Колонии мягкие, пастообразные, слизистые (растекающиеся по субстрату), иногда сухие и крошащиеся; выпуклые; гладкие, бугристые или складчатые, с концентрическим кольцом; матовые, влажные или блестящие; белые или окрашенные (красные, оранжевые, желтые, зеленые, синие, темно-бурые и почти черные). Пигменты в субстрат не выделяются.

Клетки в молодой культуре палочковидные, обычно искривленные с неправильными контурами, различной величины, чаще в пределах 3,0–7,0×0,7 мкм, но есть виды с более короткими и длинными клетками.

Для микобактерий характерно более или менее выраженное ветвление клеток. Оно обнаруживается в основном в молодых культурах и при развитии на определенных средах. У некоторых видов ветвящихся клеток очень немного. С возрастом клетки большинства видов распадаются на овальные образования. Расположение этих структур часто повторяет очертания ранее существовавших палочек. У некоторых видов такой распад наблюдается уже через несколько часов после пересева в свежую питательную среду. Эти микроорганизмы в последнее время относят к роду Arthrobacter. В старых культурах многие микобактерий образуют покоящиеся клетки – артроспоры, с утолщенной оболочкой и более плотной плазмой. Кокковидные и покоящиеся клетки при пересевах на новую среду прорастают в палочки. Обособление делящихся клеток микобактерий происходит по снэппинг-типу.