Выявление и учет численности аммонифицирующих бактерий высевом в МПБ

При высеве из почвенных суспензий в мясо-пептонном бульоне развиваются различные виды рода Pseudomonas (Ps. fluorescens, Ps. putida, Ps. ovalis, Ps. putrefaciens и др.), Proteus vulgaris, Escherichia coli, представители спорообразующих бактерий рода Bacillus (Вас. subtilis, Вас, cereus var. mycoides, Вас. mesentericus и др.;). Факультативно-аэробные бактерии (представители родов Bacillus и Pseudomonas, Е. coli, Pr. vulgaris) растут и у поверхности, и в глубине среды, образуя помутнение, хлопья, осадки. Бактерии, предпочитающие, аэробные условия, например Вас. mesentericus, развиваются на поверхности среды в виде пленки.

Представители рода Bacillus, как уже отмечалось, играют большую роль в минерализации органических соединений азота. К этому роду относятся палочковидные бактерии разной длины, обычно грамположительные, подвижные (перитрихи), весьма разнообразные по своим физиологическим свойствам. Виды рода Bacillus характеризуются бациллярным типом спорообразования, при котором клетка в период формирования споры сохраняется палочковидной или в некоторых случаях только слегка утолщается. Спора локализуется в центре клетки, эксцентрально или терминально, что зависит от вида микроорганизма.

Бактериальные эндоспоры образуются не для размножения, для перенесения неблагоприятных условий. Это – покоящиеся формы клеток, в которых процессы жизнедеятельности сильно заторможены. Споры имеют многослойную оболочку, содержат мало свободной воды и поэтому хорошо переносят различные неблагоприятные воздействия, губительные для вегетативных клеток. У большинства бактерий в клетке образуется одна спора. Когда спора сформируется, оболочка и остальные части клетки разрушаются и спора освобождается. Попав в благоприятные условия, споры прорастают. Каждая спора дает одну вегетативную клетку.

При, рассмотрении препаратов живых бактерий споры довольно легко различить, так как они сильно преломляют свет. При обычных способах окраски споры не прокрашиваются или окрашиваются очень слабо и имеют вид светлых включений на фоне окрашенной плазмы. Для окраски спор препарат обрабатывают концентрированными растворами красителей с протравами при нагревании (стр. 130). Чтобы установить расположение споты в клетке, добиваются контрастного окрашивания споры и остальной части клетки.

Лучший способ рассмотрения спор и определения их расположения в клетке – микроскопирование живых клеток с фазово-контрастным устройством.

В почвах наиболее часто встречаются следующие виды рода Bacillus.

Вас. subtilis – колонии сухие, бесцветные или серовато-белые, мелкоморщинистые или образующие бархатистый налет, расплывающиеся по поверхности агара и тогда имеющие по краям складки; край более или менее волнистый; плотно прилегают к агаровой среде. Палочки короткие и тонкие 3–5×0,6 мкм; нередко соединены в длинные нити. Споры овальные 0,9×0,6 мкм, расположены без строгой локализации – эксцентрально или ближе к центру, но не строго центрально.

Вас. mesentericus – колонии обычно плотно прилегают к агаровой среде, иногда срастаются со средой, тонкие, морщинистые, серовато-белые, кремовые или желто-бурые. Имеет много разновидностей. Из них часто встречается Вас. mesentericus ruber, колонии которого окрашены в розоватый цвет, и Вас. mesentericus niger, у которого колонии черного цвета. Палочки тонкие, длинные и короткие 3–10×0,5–0,6 мкм, одиночные или соединены в длинные нити. Споры овальные и продолговатые 0,9×0,5 мкм, могут располагаться в любой части клеток. При формировании спор клетки не раздуваются.

Вас. cereus – колонии плоские, относительно диффузные с ровной мелкобугристой (мучнистой, крупитчатой) поверхностью, слегка вогнутые, матовые, с волнистыми краями. Клетки толстые, 1,0–1,5 мкм в поперечнике и длиной 3–5 мкм, иногда более длинные; одиночные и соединенные в цепочки и нити. Споры овальные, 1,2–1,5×0,9 мкм, расположены эксцентрально. Плазма клеток зернистая или вакуолизированная.

Нас simplex – колонии напоминают Вас. cereus. Отличаются образованием зеленовато-желтого пигмента, выделяющегося в среду. Клетки мелкие 2–5×0,6 мкм, чаще всего одиночные, цепочки не образуют. Споры овальные 0,9×0,6 мкм, расположены эксцентрально.

Вас. cereus var. mycoides – колонии плоские, ризоидные или мицелиевидные, стелющиеся по поверхности агара. Клетки 5–10×0,8–1,2 мкм, иногда длиннее; одиночные или соединены в длинные цепочки-нити; плазма клеток вакуолизирована. Споры продолговатые, овальные 1,0–1,5×0,8–1,0 мкм, расположены эксцентрально.

Вас. megaterium – колонии правильной округлой формы без лопастей и рубчиков, с резко очерченным или слегка волнистым, краем, похожие на капли стеарина, выпуклые, гладкие, но, чаще с кольцом или концентрическими кругами на поверхности, молочно-белые, кремоватые, иногда коричневатые; жирноблестящие или матовые. В молодой культуре клетки, толстые, 1,2–1,5, а иногда до 2 мкм в поперечнике, и от 3 до 10–12 мкм длиной; одиночные или соединены в цепочки. В старых культурах клетки более короткие, округлые, иногда веретеновидные с суженными концами. Содержимое клеток грубозернистое с большим количеством запасных питательных веществ (жир, гликоген). Споры овальные или продолговатые 1,5×0,7–1,0 мкм, расположены эксцентрально, часто поперек клетки или диагонально.

Вас. polymyxa – колонии бесцветные, плоские или выпуклые, гладкие и слизистые, нередко с пальчатыми выростами по краям. Клетки 2,0–7,0×0,6–1,0 мкм, одиночные, в парах и коротких цепочках; при спорообразовании раздуваются лимоновидно или образуют формы, напоминающие клостридии. Споры овальные, продолговатые 2,6×,7 мкм, расположены в центре клетки.

Вас. asterosporus – колонии мелкие, белые или сероватые, иногда с зеленоватым отливом, плоские, нежные, слизистые, гомогенные. Палочки толстые 3–7×,0–1,2 мкм, одиночные и в парах. Споры цилиндрические или продолговатые 1,5–2,0×,0 мкм, расположены в центре клеток; последние во время спорообразования слегка раздуваются, напоминая клостридиальную форму.

Вас. brevis – колонии белые, иногда с желтоватым оттенком, выпуклые или плоские, блестящие, с зубчатыми краями, маслянистой консистенции. Клетки 3–5×7–1,0 мкм, одиночные, реже соединенные в цепочки. Споры овальные 0,8–1,0 мкм в поперечнике, расположены на концах клеток; конец клетки со спорой слегка утолщен.