Контроль качества дезинфекции помещений

3.1. Метод бактериологического исследования смывов.

3.1.1. Пробы, каждую в отдельности, отмывают в той же пробирке путем нескольких погружений и отжатий тампона.

Отжатые тампоны удаляют, а жидкость центрифугируют при 3000 - 3500 об/мин в течение 20 - 30 мин. Затем надосадочную жидкость сливают, в пробирку наливают такое же количество стерильной воды, содержимое смешивают и снова центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а из центрифугата делают посевы.

При наличии в смыве грубых механических примесей их растирают в пробирке стеклянной палочкой, после чего смыв переносят в центрифужную пробирку.

3.1.2. Для индикации кишечной палочки 0,5 мл центрифугата высевают в пробирки с модифицированной средой Хейфеца или КОДА (см. приложение п. 5.1.). Посевы выдерживают в термостате при температуре 37 - 38 °С в течение 12 - 18 ч. Изменение сиренево-красного цвета среды в зеленый или салатовый цвет с помутнением сред и газообразованием свидетельствует о наличии роста кишечной палочки.

Другие изменения цвета ( желтоватый, розовый, сероватый), наблюдаемые при росте микроорганизмов других видов, не учитывают.

В сомнительных случаях делают подтверждающий посев с жидких сред на агар Эндо. Посевы инкубируют при температуре 37 - 38 °С в течение 12 - 16 ч.

3.1.3. Для индикации стафилококков 0,5 мл центрифугата высевают в 5 мл мясопептонного бульона с 6,5 % хлористого натрия. Через 22 - 24 ч инкубирования посевов при температуре 37 - 38 °С делают пересевы бактериологической петлей на 8,5 %-ный солевой мясопептонный агар. Посевы выдерживают в термостате 22 - 24 ч при температуре 37 - 38 °С. Из выросших культур для подтверждения роста стафилококков готовят мазки, окрашивают их простым методом и микроскопируют.

3.1.4. Для индикации спорообразующих аэробов смывы обрабатывают как указано в пп. 3.1.1., но перед центрифугированием их прогревают на водяной бане при 65 °С в течение 30 мин, затем центрифугируют. Из центрифугата каждой пробы делают посевы в одну пробирку с МПБ и на 2 чашки с МПА (для контроля качества дезинфекции при сибирской язве МПА может быть заменен дифференциально-диагностической средой - см. приложение п. 5.3). Посевы инкубируют в термостате при 37 °С в течение 24 - 48 ч.

При наличии роста на МПА подсчитывают количество колоний, а также изучают их морфологию при малом увеличении микроскопа. В случае возникновения подозрения на выделение возбудителя сибирской язвы, идентификацию такой культуры проводят в порядке, предусмотренном действующими Методическими указаниями по данному вопросу.

При наличии роста на дифференциально-диагностической среде в крышку чашки Петри вносят 1 - 2 мл 25 %-ного водного раствора аммиака, чашку (крышкой вниз) выдерживают при 20 ± 2 °С в течение 1 мин, после чего визуально или под малым увеличением микроскопа проводят учет теста.

Под действием паров аммиака происходит порозовение колоний микроорганизмов, обладающих фосфатазной активностью.

Вас. anthracis фосфатазной активностью не обладает и его колонии остаются бесцветными.

При отсутствии роста или характерных колоний на плотных средах и наличии роста в МПБ, делают дробные посевы из МПБ на плотную питательную среду, с которыми поступают как указано выше.

3.1.5. При просмотре посевов учитывают общее количество проб, в которых обнаружен рост санитарно-показательных микроорганизмов, а при споровой инфекции - и количество колоний непатогенных споро-образующих аэробов рода Bacillus.

3.2. Метод отпечатков на тонкий слой плотной питательной среды.

3.2.1. Метод отпечатков является ускоренным методом выделения санитарно-показательных микроорганизмов с поверхностей животноводческих объектов и наиболее приемлем в условиях промышленного ведения животноводства на комплексах, птицефабриках и других объектах, где имеются лаборатории.

3.2.2. Ванны и пробирки с пробами-отпечатками, доставленные в лабораторию, помещают в термостате при температуре 37 °С на 16 - 18 ч.

3.2.3. После инкубирования пробы просматривают невооруженным глазом на наличие роста.

При отсутствии макроколоний и изменения среды пробы дальнейшим исследованиям не подвергают. В сомнительных случаях, когда отсутствует рост макроколоний, но произошло изменение цвета или прозрачности среды, пробы-отпечатки высушивают на воздухе до полного подсыхания среды, фиксируют над пламенем, окрашивают по Муромцеву и микроскопируют с целью обнаружения микроколоний.

3.2.4. Учитывают общее количество отпечатков, в которых обнаружен рост микроорганизмов.

3.3. Исследование с целью выделения микобактерий.

3.3.1. Контроль качества заключительной дезинфекции при туберкулезе проводят параллельно двумя методами по выделению стафилококка и микобактерий.

3.3.2. Смывы обрабатывают как указано в пп. 3.1.1. Из центрифугата каждой объединенной пробы делают высев на среды для выделения стафилококков, с которыми поступают как указано в пп. 3.1.3., и готовят по 6 мазков на узких (1,2×7,5 см) предметных стеклах (см. приложение п. 4). Мазки высушивают при комнатной температуре или в термостате в течение 2 - 3 ч., складывают их по два тыльной стороной и погружают в 8 - 12 %-ный раствор серной кислоты на 15 мин. После этого стекла-мазки берут пинцетом и погружают на 5 - 10 секунд в стерильную дистиллированную воду, а затем переносят в пробирки со средой Сотона и помещают в термостат при 37 - 38 °С на 12 суток.

3.3.3. Пробы почвы с прилегающей территории и соскобов с поверхности помещений, каждую в отдельности, помещают в колбу, заливают 2 - 3-кратным количеством дистиллированной воды, взбалтывают и фильтруют через двойной слой марли в узкогорлую колбу емкостью 200 - 250 мл. К фильтрату добавляют 2 - 3 мл ксилола или авиационного бензина, встряхивают 15 - 20 мин и доливают дистиллированной воды до горлышка. Содержимое отстаивают 30 мин с целью получения флотата, из которого готовят мазки на узких предметных стеклах. В дальнейшем с мазками поступают как указано в пп. 3.3.2.

3.3.4. При наличии роста стафилококков хотя бы в одной исследованной пробе качество дезинфекции признают неудовлетворительным и дальнейшее исследование по выделению микобактерий не проводят.

3.3.5. Стекла с мазками извлекают из пробирок на 6, 8, 12 день инкубирования, высушивают, фиксируют над пламенем горелки, окрашивают по Циль-Нильсену и микроскопируют для обнаружения микроколоний.

3.4. Оценка результатов исследования.

3.4.1. Качество профилактической дезинфекции помещений для получения и содержания молодняка животных (птицы) и текущей дезинфекции изолированных секций (боксов, скотных дворов) с автономной системой жизнеобеспечения животных признают удовлетворительным при отсутствии роста санитарно-показательных микроорганизмов в 90 % исследованных проб.

При профилактической дезинфекции помещений для содержания взрослого поголовья и текущей дезинфекции частично освобожденных от животных или неизолированных помещений допускается выделение санитарно-показательных микроорганизмов из 20 % исследованных проб.

3.4.2. Качество заключительной дезинфекции при ее контроле по выделению бактерий группы кишечной палочки, стафилококков, грибов и микобактерий признают удовлетворительным при отсутствии выделения названных культур во всех исследованных пробах.

При споровых инфекциях качество дезинфекции признают удовлетворительным при отсутствии роста Вас. anthracis при этом допускают рост в прямом посеве на МПА единичных (не более трех в смыве) колоний непатогенных спорообразующих аэробов рода Bacillus.