Отбор проб для исследования на туберкулез

При отборе проб для исследования на туберкулез учитывают цель исследования и характер объекта, от которого берут пробы. Если необходимо подтвердить наличие туберкулеза при положительных туберкулиновых реакциях и отрицательных результатах вскрытия, прибегают к исследованию материала, взятого как от убитых, так и от живых животных. От последних пробы берут мноногократно с разными интервалами. Пробами для исследования от живых животных служат молоко, мокрота, моча, каловые массы, истечения из влагалища.

Проба молока берется из всех четырех долей вымени. Предварительно вымя обмывают теплой водой с мылом, высушивают стерильной салфеткой, а затем соски протирают 70 º спиртом. В таком же порядке обрабатывают и руки при взятии проб. Первые струйки молока сдаивают отдельно, а затем берут пробу в стерильную посуду из первой и последней порции удоя. Из каждой доли вымени берут не меньше 25 мл молока. Всю пробу центрифугируют при 3000 об/мин 20-30 мин. Осадок обрабатывают 6%-ным растворам серной кислоты, промывают физраствором, центрифугируют. Исследуют осадок и слой сливок.

Пробу мокроты собирают с помощью стерильных марлевых салфеток во время кашля, при необходимости кашель вызывают искусственно(слизь можно собирать с помощью ложки со слизистой оболочки носа). Заливают равным объемом 10%-ного раствора трехзамещенного фосфата натрия, хорошо перемешивают и ставят в термостат на 24 ч. Затем центрифугируют при 3000 об/мин 10-15 мин. Исследуют осадок [12].

Пробу мочи берут стерильным катетером в количестве 150-200 мл. из мочевого пузыря или во время мочеиспускания.

Пробу фекалий берут из прямой кишки в количестве 30-50 г и помещают в стерильную стеклянную банку с крышкой.

Пробу истечений из влагалища и других полостей собирают стерильной ложкой в количестве 3-5 мл.

После вынужденного убоя или гибели животного в лабораторию направляют кусочки измененных органов и тканей со свежими, еще неинкапсулироваными и необызвествленными поражениями. При отсутствии видимых изменений в органах животных, реагирующих на туберкулин, в лабораторию для бактериологического исследования направляют заглоточные, подчелюстные, бронхиальные, средостенные, паховые, предлопаточные лимфатические узлы, а также кусочки средних долей легкого. Материал можно консервировать 30%-м водным раствором глицерина [25].

Иммунитет и средства специфической профилактики. При туберкулезе он нестерильный, сохраняющийся до тех пор, пока микобактерии находятся в организме. Фагоцитоз имеет незавершонный характер, и фагоцитированные микобактерии не погибают. В организме вырабатываются агглютинины и комплементсвязывающие антитела, но их роль в иммунитете незначительна. Защита в основном определяется способностью организма купировать патологический процесс, ограничивать возбудителя в гранулемах-туберкулах [10].

У зараженных животных развивается состояние относительной невосприимчивости и экзогенной инфекции. Иммунизирующими свойствами обладают в определенной степени также атипичные микобактерии. Иммунитет клеточный, нестерильный, сохраняется на период нахождения микобактерий в организме. В отдельных районах страны используют вакцино- и химиопрофилактику туберкулеза телят с помощью вакцины БЦЖ и изониазида [16].

Роль живых возбудителей болезни в образовании иммунитета при туберкулезе подтверждается опытами Р. Коха по повторному заражению больных морских свинок. При первичном подкожном заражении их на месте введения через 10-15 дней образуется вначале узелок, а потом незаживающая язва. Наряду с этим наблюдается воспаление окружающих лимфатических узлов. После повторного же заражения через 4-6 недель в месте инъекции появляется отечно-воспалительный очаг, кожа некротизируется , отторгается и образуется язва, которая быстро заживает. При этом лимфатические узлы в процесс не вовлекаются. Этот опыт, названный феноменом Коха, показывает, что вторично введенные микобактерии туберкулеза встречаются в организме с наличием частичного иммунитета , вследствие чего реактивное воспаление, быстро развивающееся в месте заражения, локализирует и удаляет вторичный аффект, ликвидируя таким образом реакцию. В этом случае повышенная чувствительность организма препятствует распространению микобактерий туберкулеза и способствует удалению их из организма [29].

Профилактика и меры борьбы. В целях недопущения заболевания животных туберкулезом руководители хозяйств, владельцы скота и ветеринарные специалисты обязаны:

- не допускать ввод животных из других неблагополучных хозяйств и населенных пунктов, а также перемещение животных внутри хозяйства без разрешения ветеринарных специалистов;

- исследовать всех поступающих в хозяйство животных в период 30-дневного карантина на туберкулез аллергическим методом. В общее стадо животных вводят только при получении у каждого из них отрицательных результатов исследований.

Если при исследовании выявлены реагирующие животные, принимают меры к установлению диагноза и при установлении туберкулеза все поголовье данной группы подвергают убою.

Организовать на каждой ферме строгое соблюдение санитарных правил, осуществлять комплекс профилактических мер, способствующих повышению естественной резистентности организма животных. Оборудовать необходимые объекты ветеринарного и санитарного назначения.

Не разрешать посторонним лицам посещать животноводческие фермы, скотные дворы. Не допускать контакта животных со скотом неблагополучных по туберкулезу хозяйств (ферм), населенных пунктов на пастбищах, в местах водопоя скота и т. п., строго выполнять «Ветеринарные правила по предупреждению заражения пастбищ, водоисточников и трасс перегона (перевоза) скота возбудителями туберкулеза, а так же их обеззараживанию» [7].

При продаже или вывозе животных в другие хозяйства для межхозяйственного обмена и племенных целей, разрешается отбирать из хозяйств благополучных по туберкулезу не менее 4 лет.

Государственные ветеринарные инспектора районов обязаны обеспечить проверку эпизоотического состояния поголовья животных на каждой ферме в отношении туберкулеза [7].

В некоторых хозяйствах оздоровление от туберкулеза проводится с применением вакцины БЦЖ (с разрешения ветотдела).

Эффективность вакцины БЦЖ:

1.Применение вакцины БЦЖ способствует формированию иммунитета.

2.Ежегодная вакцинация БЦЖ поголовья, позволяет выявить больных активными формами туберкулеза животных по проявлению гиперэргических реакций на вакцину [17].

Отрицательная сторона: в возрасте 16-18 месяцев (т.е. в период отбора нетелей) многие ревакцинированные (через 12 месяцев после ревакцинации) телята реагируют на туберкулин. К сожалению тестов, позволяющих отличать поствакцинальную аллергию от инфекции, нет.

Наиболее напряженный иммунитет (100%) получен при трехкратном введении вакцины БЦЖ (в возрасте 10-15 дней, через 12 и 18 месяцев после первого отела), что подтверждается лабораторными методами исследования материала от животных [6].

Для дезинфекции животноводческих помещений предложена композиционная смесь – щелочной раствор фенолята натрия. Оба компонента этой смеси (раствор фенолята натрия водный и раствор щелочи отработанной) являются отходами химического производства. В ходе лабораторного исследования указанного препарата установлено, что он обладает выраженным бактериостатическим действием на микобактерии туберкулеза [2].

Проведение исследований по разработанной сотрудниками ветотдела методике показали неподготовленность практической ветеринарной службы к квалифицированной диагностике, профилактике и мерам борьбы с инфекционными заболеваниями животных. Все это свидетельствует о необходимости перехода к активным формам обучения ветеринарных специалистов. Одним из таких методов являются деловые игры (анкетный метод, на карточках, ролевая игра) [21].

Согласно санитарным и ветеринарным правилам 1996 г для того чтобы определить благополучие стада необходимо в начале определить степень неблагополучия стад крупного рогатого скота с учетом распространенности болезни: более менее ограниченная – при выявлении двукратной туберкулиновой пробой до 15% животных от их наличия в стаде (на ферме); значительная – при выявлении более 15% больных животных.

Оздоровление неблагополучных по туберкулезу стад крупного рогатого скота проводят следующими способами:

а) систематические диагностические исследования с выделениями больных животных или целых неблагополучных групп и последующем их убоем;

б) единовременная полная замена поголовья неблагополучного стада (фермы) здоровыми животными.

В обоих случаях обязательно осуществление комплекса организационно-санитарных мероприятий, предусмотренными настоящими Правилами.

Метод единовременной полной замены поголовья применяют, когда туберкулез впервые установлен в районе, области, республике, и при значительной распространенности болезни в стаде (заболеваемость более 15% поголовья).

В этом случае после наложения ограничений:

- прекращают аллергические исследование скота на туберкулез;

- не проводят осеменение коров и телок;

- все получаемое молоко подвергают пастеризации при 85 ºС в течение 30 мин. или при 90 ºС в течение 5 мин, после чего используют для выпойки откормочных телят или отправляют на молокоперерабатывающее предприятие;

- в течение 6 месяцев все поголовье неблагополучного стада вместе с молодняком сдают на убой. В первую очередь отправляют на мясокомбинат откормочное поголовье, непродуктивных коров, волов и молодняк;

- после освобождения помещений от скота проводят их дезинфекцию 3 %-ным щелочным раствором формальдегида;

- во всех освободившихся коровниках, телятниках, родильных отделениях, цехах очищают полы, проходы и стены от навоза, остатков корма, демонтируют транспортеры для механического удаления навоза;

- снимают деревянные полы. Пригодные для повторного использования доски после тщательной очистки и мойки дезинфицируют в течении 24 ч в ваннах с 3%-ным раствором формальдегида и каустической соды. Непригодные доски сжигают;

- снимают на 15-20 см. подпольный грунт и вывозят его за пределы фермы для биотермического обезвреживания, а на данное место завозят новый грунт;

- очищают от мусора, навоза прифермерскую территорию, выгульные площадки;

- весь навоз вывозят за пределы фермы в специально отведенное место, складируют в бурты шириной 3 м и высотой 2м, закрывают землей и огораживают; используют этот навоз не ранее, чем через 2 года после закладки в бурты;

- в животноводческих помещениях проводят ремонт, настилают полы, укладывают навозные транспортеры;

- всю непригодную для использования спецодежду, обувь, малоценный инвентарь сжигают;

- после завершения ветеринарно-санитарных мероприятий, проведения заключительной дезинфекции всех помещений на территории фермы и лабораторной проверки качества дезинфекции с неблагополучной фермы снимают ограничения.

При заболевании туберкулезом менее 15% поголовье стада оздоровление может проводиться методом систематических диагностических исследований с убоем больных животных:

- всех животных с 2-месячного возраста через каждые 45-60 дней исследуют аллергической внутрикожной туберкулиновой пробой. Одновременно исследуют на туберкулез имеющихся в хозяйстве животных других видов (в том числе собак и кошек). Реагирующих на туберкулин животных признают больными, таврят буквой «Т», изолируют и в течение 15 дней сдают на убой. Реагирующих на туберкулин собак и кошек умерщвляют [18].

В тоже время требование о недоступности контактов больных и здоровых животных в ряде случаев просто труднодоступно выполнить. Так, при оздоровлении этим методом, ценный скот чаще всего заболевает в первый же год после ввода в основное стадо из-за полного отсутствия у него иммунитета. Следовательно, ремонт стада необходимо проводить здоровыми телочками из этого же стада [26].

При полученнии по всему стаду двух подряд отрицательных результатов исследования животных ставят на 6-месячное контрольное наблюдение, в период которого проводят два исследования с интервалом в 3 месяца. При получении отрицательных результатов и проведении комплекса ветеринарно-санитарных мероприятий ферму (стадо) объявляют благополучным по туберкулезу.

В стадах оздоравливаемых этим методом поступают следующим образом:

- телят, родившихся от больных коров, сдают на убой вместе с матерями;

- телок, родившихся от не реагирующих коров оздоравливаемого стада (до его постановки под контрольное наблюдение), содержат изолированной группой, ставят на откорм и затем сдают на убой;

- молодняк, полученный в период контрольного наблюдения, выращивают в условиях изоляции, и после снятия с хозяйства ограничений используют в обычном порядке.

Перед снятием ограничений проводят комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий [18].

Необходимо изолированное выращивание молодняка крупного рогатого скота по следующей схеме: выпаивание их до 7- 10 дней молозивом и молоком матери, а затем – ЗЦМ и сухим обратом или молоком и обратом, пастеризованными при 85 ºС в течении 30 мин. Технологию выращивания животных организуют по принципу «пусто – занято». После освобождения от животных помещение или секцию чистят, моют, дезинфицируют и заполняют вновь не менее чем через 4 дня родившимися телятами [4].

Работами многих ученых установлено, что микобактерии туберкулеза внутри животноводческих помещений находятся на поверхности полов, стен, столбов, оборудования других предметов. Количество выделяемых культур микобактерий находятся в прямой зависимости от эпизоотического состояния хозяйств. В этой связи контроль качества дезинфекции должен рассматриваться как один из важнейших методов борьбы с туберкулезом.

За день до поездки в колхоз производится исследование и подготовка всего необходимого материала:

1. Получение спирта, для дезинфекции места введения.

2.Осмотр ножниц и аппарата БИ-8.

3. Получение туберкулина.

4. Подготовка спецодежды.

При прибытии на ферму сначала проводится инструктаж по технике безопасности для пастухов и ветспециалистов. Затем пригоняют стадо и загоняют его в огражденную территорию 600 кв. м., соединенную с такой же площадкой узким коридором с двумя дверями, т. е. раскол, где помещается несколько животных. Пастухи загоняют по одному животному в коридор, и здесь начинается работа ветспециалистов:

1. Производится обстригание волос в нижней части шеи с помощью ножниц.

2. Место дезинфицируют 96%-ным раствором спирта.

3. Вставляют в аппарат БИ-8 бутылек с туберкулином и закрепляют его.

4. Заряжают аппарат порцией аллергена в объеме 0,2 мл.

5. Подносят перпендикулярно к коже аппарат и нажимают на кнопку спуска.

6. Смотрим на место введения для удостоверенности, что манипуляции произведены правильно (внутри кожи чувствуется аллерген в виде горошины).

И такие манипуляции проводят с каждым животным.

В следующий раз приезжаем через 3 суток. Так же прогоняем животных через коридор и производим считывание результатов реакции. Я просматривал каждое животное, когда их прогоняли через загон, и обращал внимание на место (хорошо заметно по выстреженым волосам) и если видно увеличение толщены кожи, производит измерения специальной линейкой. Сначала собирается складка из кожи в ближайшей области шеи, и считывают данные. Затем собирают складку в месте введения туберкулина и если разница в данных равна или превышает 3 мм, то животное считают положительно реагирующим на туберкулин.

Всех животных положительно реагирующих на туберкулин изолируют, обрезают у них хвосты или метят их краской и за 15 дней сдают на убой не зависимо от продуктивной и племенной ценности. Убой всех положительно прореагировавших животных проводится только на бойне в районе. При каждом забое животных из ОАО присутствует человек из ветстанции. Его обязанности выявить есть ли пат, изменения в внутренних органах животных, при наличии изменений в отдельных органах они отправляются в ветлабораторию где бактериологический подтверждают об наличии возбудителя, и затем все с видимыми изменениями в структуре, уничтожаются. Мясо идет на промпереработку.

Запрещено продавать животных из хозяйства и производить перегруппировку стада без разрешения ветспециалиста. Обязательно раз в год обслуживающий персонал проходит медобследование и при обнаружении признаков туберкулеза, человека отстраняют от работы с животными.

Для кормления используют только корма с собственных полей, либо закупают в хозяйствах благополучных по туберкулезу.

Телят выращивают на отдельной ферме, не допускают ни каких контактов с взрослым стадом. Поение производится в первые дни молозивом от здоровых коров, а затем обратом пастеризованным, до месячного возраста и переводят на свежую траву или хорошее сено. При достижении годовалого возраста отбирают лучших телок для ремонта стада, а остальных сдают на убой. Остальных животных исследуют на туберкулез и затем только вводят в общее стадо.

Ветврачи проводят также осмотр ферм, что бы они были чистые. Проводят контроль дезинфекции, дезинсекции, дератизации и санитарного ремонта животноводческих помещений. Дезинфекцию проводят 20%-ной взвесью свежегашеной известью путем трехкратной побелки с интервалом в 1 ч. Навоз, подстилку и остатки корма от животных отвозят на поле и складывают в кучу для биотермического обезвреживания.

Итак, на туберкулёз было исследовано 1209 голов, на четвертом они исследовались повторно после 45 дней. В результате было выявлено