Ксантопротеиновая реакция

Принцип метода.При добавлении к раствору белка концентрированной азотной кислоты белок выпадает в осадок, который при нагревании растворяется и жидкость окрашивается в желтый цвет. Эта реакция характерна для ароматических аминокислот (фенилаланина, тирозина и триптофона), которые подвергаются нитрованию:

Нитропроизводное аминокислот в щелочной среде образуют соли хиноидной структуры, окрашенные в оранжевый цвет. Например:

Ход работы.В одну пробирку наливают 5 капель разбавленного раствора яичного альбумина, во вторую – 5 капель 1%-ного раствора желатина, в третью – 5 капель 1%-ного раствора растительного альбумина. Затем в пробирки добавляют по 3 капли концентрированной азотной кислоты и нагревают (осторожно!). При нагревании раствор и выпавший белый осадок или муть от свернувшегося белка окрашиваются в ярко-желтый цвет при наличии ароматических аминокислот: в пробирке с желатином появляется едва заметное бледно-желтое окрашивание (обусловленное незначительной примесью других белков). Пробирки охлаждают, после этого в них осторожно добавляют по 10 капель 30%-ного раствора гидроксида натрия. Выпавший в начале осадок белка растворяется, и жидкость окрашивается в ярко-оранжевый цвет.

Реакция Адамкевича

Принцип метода. При добавлении к раствору белка небольших количеств глиоксиловой кислоты в присутствии крепкой серной кислоты получается красно-фиолетовое окрашивание. Эта реакция характерна для триптофана, который в кислой среде вступает в реакцию с альдегидами с образованием окрашенных продуктов конденсации. Для проведения реакции используют ледяную уксусную кислоту, которая всегда содержит следы глиоксиловой кислоты:

Ход работы. В одну пробирку наливают 5 капель разбавленного раствора яичного альбумина, во вторую – 5 капель 1%-ного раствора желатина, в третью – 5 капель 1%-ного раствора растительного альбумина. В каждую пробирку добавляют по 2–3 капли глиоксиловой кислоты и по 5 капель ледяной уксусной кислоты. Раствор слегка нагревают, охлаждают и по стенке пробирки осторожно (подслаивая) приливают 10 капель концентрированной серной кислоты. На границе двух слоев жидкости при наличии триптофана наблюдается красно-фиолетовое окрашивание в виде кольца. Появление окраски можно ускорить, поместив пробирку в кипящую водяную баню.

Реакция Фоля

Принцип метода.Добавление к раствору белка крепкой щелочи и уксуснокислого свинца при кипячении приводит к потемнению раствора. Реакция обусловлена присутствием в белке серосодержащих аминокислот (цистеина и метионина). Эти аминокислоты при нагревании в присутствии щелочи разрушаются, образуя сернистый натрий:

Уксуснокислый свинец реагирует со щелочью с образованием плюмбита натрия:

(СH₃COO)₂ + NaOH Pb(ONa)₂ + 2CH₃COOH

Сернистый натрий при взаимодействии с плюмбитом образует черный осадок сернистого свинца:

Na₂S + Pb(ONa)₂ + 2 H₂O PbS + 4NaOH

Ход работы.В одну пробирку наливают 5 капель разбавленного раствора яичного альбумина, во вторую – 5 капель 1%-ного раствора желатина, в третью –

5 капель 1%-ного раствора растительного альбумина. В каждую пробирку добавляют по 5 капель 30%-ного раствора гидроксида натрия и по 1 капле 5%-ного раствора уксуснокислого свинца. Содержимое пробирок подвергают кипячению.

Материалы и реактивы: разбавленный раствор яичного альбумина (см. приложение Б, п.1); 1% раствор желатина; раствор растительного альбумина(cм. приложение Б, п.2.); 10%, 30% растворы гидроксид натрия; 1% раствор сульфата меди; 0,5% раствор нингидрина; азотная кислота концентрированная; уксусная кислота, ледяная; глиоксиловая кислота (см. приложение Б, п.3); серная кислота (d=1,84); 5% раствор уксуснокислого свинца.

Оборудование: пробирки; капельницы; спиртовки; водяная баня.

Контрольные вопросы

1. Назовите универсальные реакции на белки.

2. Укажите специфические реакции на аминокислоты.

3. Какие аминокислоты называются незаменимыми? Каково их строение?

4. Что такое аминокислотный скор?

5. По каким принципам классифицируются аминокислоты?