Сметная стоимость исследования: 120 млн. рублей

Аннотация

 

к теме НИР 040: «Молекулярно-генетические и эпигенетические механизмы регуляции иммунной системы в норме и при патологии».

Руководитель темы: Силков А.Н.

Ответственные исполнители:Кожевников В.С., Лопатникова Ю.А., Колесникова О.П., Чепурнов А.А.

Сроки начала и окончания работы: 2013–2016 гг.

Приоритетное направление развития науки, технологий и техники в РФ– НАУКИ О ЖИЗНИ;

Критические технологии –Геномные, протеомные и постгеномные технологии

Направление фундаментальных исследований РАМН

РАЗДЕЛ I. ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ МЕДИЦИНСКОЙ НАУКИ

НАПРАВЛЕНИЕ 2. Постгеномные технологии и их роль в современной медицине

НАПРАВЛЕНИЕ 6. Использование геномных, постгеномных и нанотехнологий для создания основ персонифицированной медицины

Актуальность.

Регуляция цитокиновой сети, гомеостаза иммунокомпетентных клеток и иммунного ответа осуществляется на всех уровнях продукции и функционирования молекул и клеток иммунной системы. Наряду с альтернативным сплайсингом и аллельным полиморфизмом, описан целый ряд механизмов, участвующих в регуляции активности цитокиновой сети – одной из основных систем регуляции различных клеточных и тканевых процессов в организме. Для многих медиаторов, в том числе для ключевых провоспалительных цитокинов TNF и IL-1, играющих важную роль в патогенезе многих заболеваний, показано наличие 2 и более рецепторов с разной аффинностью, которые по разному экспрессируются на различных субпопуляциях, и по разному проводят сигнал лиганда [3, 1]. Кроме того, наряду с мембраносвязанными формами существуют растворимые рецепторы, которые могут, как нейтрализовать активность лиганда, так и депонировать его и транспортировать к мембраносвязанному рецептору. Также, в настоящее время, установлено, что в норме и при некоторых патологических состояниях образуются аутоантитела (ААТ), которые также могут участвовать в регуляции активности цитокинов в норме и при патологии [13].

Таким образом, оценка мембраносвязанных и растворимых форм рецепторов, аутоантател, наряду с частотой встречаемости аллельных вариантов генов рецепторов TNF и IL-1 при патологии может иметь большое значение для определения предрасположенности к заболеваниям, имеющим иммунопатогенетическую природу, и выбору адекватного метода иммунокоррекции.

Регуляторные функции актуального набора цитокинов в иммунном ответе во многом реализуется изменением соотношений активности T1/T2 и Treg/T17, а их нарушения лежат в основе многих видов патологии [7, 6]. В связи с этим, восстановление регуляции со стороны Т-клеток и нормализация баланса цитокинов является одной из активно разрабатываемых стратегий коррекции иммунных дисфункций, пониманию которых способствует их многостороннее исследование в экспериментальных моделях. [9, 11].

На основе хронической РТПХ разработаны модели различной степени тяжести системной иммунопатологии. У части реципиентов развивается тяжелое проявление аутоиммунного заболевания, сочетающее иммунокомплексный гломерулонефрит, гемолитическую анемию и иммунодефицит (модель гломерулонефрита, близкая люпус-нефриту у человека), у части – более легкое, сочетающее гемолитическую анемию и иммунодефицит (модель иммунодефицита) [4, 16]. Характер патологии в значительной степени зависит от присущей каждому индивиду «эпигенетической составляющей» и различается по параметрам преобладания Th1 или Th2 регуляторных влияний и баланса соответствующих цитокинов, продукции подклассов IgG, гуморального и клеточного иммунного ответа, гомеостатической пролиферации, анемии, функциональной активности макрофагов, продукции цитокинов, метаболизма липидов. Вероятная В-клеточная обусловленность подавления первичного гуморального иммунного ответа наряду с сохранной анамнестической реакцией в моделях иммунодефицита и гломерулонефрита позволяет использовать их как адекватные модели для изучения формирования В-клеточной основы иммунной памяти [5]. В прикладном аспекте модель используется для модуляции баланса Th1/Th2 и липидного обмена препаратами с иммуномодулирующими свойствами.

Важным механизмом контроля количества иммунокомпетентных клеток (антиген-реактивных в иммунном ответе, клеток памяти и наивных клеток в гомеостатических процессах) является регуляция длины теломер, которые сокращаются при каждом клеточном делении [2]. Показано, что для запуска клеточного старения ("запрет" клеточного цикла, активационный апоптоз и пр.) достаточно критического укорочения теломер на отдельных, а не на всех, хромосомах [8]. Другой механизм влияния укорочения теломер на функции клеток заключается в отмене репрессирующей активности теломерного гетерохроматина на гены субтеломерных зон хромосом, что может приводить к их экспрессии. Наши исследования продемонстрировали укорочение теломер на 1q, 10p, 17p хромосомах при атопическом дерматите. В субтеломерных зонах этих хромосом локализуются несколько генов, продукты которых участвуют в липидном обмене кожи, дифференцировке кератиноцитов, в регуляции активации и апоптоза иммунокомпетентных клеток. При ревматоидном артрите нами выявлено укорочение теломер 4р хромосомы, в субтеломерной зоне которой, среди прочих, локализуется ген BST1, экспрессия которого повышена в синовиальных клетках пациентов с тяжёлыми формами РА, рефрактерными к терапии моноклональными антителами к ФНО-α [15].

Показано, что длина теломер на отдельных хромосомах (хромосом-специфическая длина теломер, "теломерный профиль") индивидуальна, характерна для всех клеток данного организма и сохраняется в течение жизни. В связи с этим, пролиферация клеток любой этиологии (например, гомеостатическая пролиферация, в том числе, при недостаточности тимопоэза, либо экспансия антиген-реактивных клеток в иммунном ответе) у разных индивидуумов может проявиться развитием разных видов патологии, зависящей от экспрессии генов субтеломерных областей хромосом с укороченными теломерами [12].

Активность генов, от которых зависит развитие патологии, может регулироваться и механизмами, основанными на интерференции РНК. Система РНК-интерференции является важной частью иммунного ответа к вирусам и к другому чужеродному генетическому материалу. Малые интерферирующие РНК (siRNA) принимают участие в реакциях РНК-интерференции, например, в противовирусных реакциях и поддержании структуры хроматина. Молекулярные механизмы данных взаимодействий в настоящее время исследуются, в частности, была предложена гипотеза участия малых РНК в РНК-зависимом метилировании ДНК.

Практически, экспрессия любого гена с известной последовательностью нуклеотидов может быть изменена при введении специфических siRNA. Данное свойство делает siRNA удобным инструментом для исследования функций генов и изучения мишеней лекарственных средств [14]. Результаты испытаний первых терапевтических препаратов РНК интерференции показали, что препараты с малыми интерферирующими РНК легко переносятся пациентами и имеют приемлемые фармакокинетические свойства. В частности, нокдаун генов, обеспечиваемых препаратами siRNA, даёт стопроцентную выживаемость при заражении летальной дозой вируса Эбола в экспериментах на приматах, что открывает перспективы идентификации целей терапевтического воздействия при геморрагических лихорадках Конго-Крымская, Эбола и Ласса с использованием высокопроизводительного скрининга малых интерферирующих РНК [10].

Цель исследования:изучение молекулярно-генетических и эпигенетических механизмов, участвующих в регуляции активности иммунокомпетентных клеток в норме и при патологических состояниях и разработка на их основе новых методов диагностики, прогноза и лечения иммунопатологических состояний.

Задачи исследования

1. Изучить содержание аутоантител к TNF в зависимости от типа и тяжести иммунопатологических состояний (РА и БА) и биологическую активность ААТ в тестах in vitro.

2. Оценить мембраносвязанные и растворимые формы рецепторов к TNF и IL-1 в норме и при патологических состояниях различного генеза и тяжести

3. Изучить частоту встречаемости аллельных вариантов генов рецепторов 1 и 2 типов TNF и IL-1 в норме и при патологических состояниях

4. Оценить прогностическую и диагностическую значимость критериев содержания ААТ, мембраносвязанных и растворимых рецепторов, частоты встречаемости аллельных вариантов генов рецепторов TNFи IL-1 при иммунопатологических состояниях.

5. Изучить действие деметилирующего агента ДНК - 5-азацитидина на девиацию Th1/Th2 ответа в модели гломерулонефрита in vivo.

6. Изучить количество субпопуляций регуляторных (Treg) и хелперных (Th17) Т клеток и их соотношение в модели гломерулонефрита и иммунодефицита in vivo.

7. Оценить уровень трансаминаз, холестерина в печени в модели гломерулонефрита и иммунодефицита и выраженность фибросклеротических изменений в печени.

8. Исследовать уровень активации LXRs на разных этапах развития гломерулонефрита и иммунодефицита.

9. Исследовать хромосом-специфическую вариабельность длины теломер лимфоцитов у здоровых людей разного возраста и больных бронхиальной астмой, аутоиммунным тиреоидитом, ишемической болезнью сердца, гипертонической болезнью и диабетом второго типа.

10. Оценить взаимосвязь возрастного укорочения теломер с активностью теломеразы иммунокомпетентных клеток и показателями тимопоэза в норме и при патологии.

11. Исследовать соотношение TREC⁺ и TREC^- клеток среди CD31⁺ и CD31⁺/CD31^- среди CD4⁺-клеток, а также соотношение этих клеток в разных фазах клеточного цикла и в апоптозе в норме и при патологии.

12. Смоделировать in vitro пролиферацию популяций Т-клеток в ответ на IL-7 и IL-15 с оценкой активности теломеразы, клеточного цикла и апоптоза, а также изменений экспрессии CD31- и TREC-позитивных клеток.

13. Разработка псевдовирусной конструкции как экспертной системы для изучения механизмов нокдауна инфекционного процесса посредством малых интерферирующих РНК.

14. Исследование коммерчески доступной библиотеки малых интерферирующих РНК на способность нокдауна генов для выявления критичных аспектов вирус-клеточного взаимодействия.

15. Выявление способности специфических siRNA изменять экспрессию генов с известной последовательностью нуклеотидов для исследования функций генов и изучения мишеней лекарственных средств

 

Годовые этапы исследования:

Этап 2013 г.

1. Изучение содержания ААТ к TNF, растворимых рецепторов к TNF и IL-1 в сыворотке крови, количества рецепторов TNF и IL-1 на иммунокомпетентных клетках у больных ревматоидным артритом (отв. исполнитель: Лопатникова Ю.А.).

2. Исследование активности теломеразы, фаз клеточного цикла, экспрессии молекулы CD31 и количества TREC-позитивных клеток в культурах клеток с IL-7 и IL-15 (отв. исполнитель: Кожевников В.С.).

3. Высокопроизводительный скрининг siRNA целевых к протеинкиназам. (отв. исполнитель: Чепурнов А.А.).

4. Изучениеэпигенетических механизмов регуляции иммунных процессов и их нарушения, приводящие к возникновению иммунопатологических состояний, в экспериментальных моделях (отв. исполнитель: Колесникова О.П.).

Этап 2014 г.

1. Определение содержания растворимых рецепторов к TNF и IL-1 в сыворотке крови, количества рецепторов TNF и IL-1 на иммунокомпетентных клетках у больных атопическим дерматитом (отв. исполнитель: Лопатникова Ю.А.).

2. Оценка встречаемости аллельных вариантов генов рецепторов TNF и IL-1 у больных ревматоидным артритом (отв. исполнитель: Силков А.Н.).

3. Изучениемеханизмов регуляции направленности иммунного ответа, в том числе дисбаланса Treg/Th17 в патогенезе аутоиммунных заболеваний в экспериментальных моделях (отв. исполнитель: Колесникова О.П.).

4. Оценка интенсивности гомеостатической пролиферации наивных клеток на уровне TREC(^+/-)CD31⁺ и CD31(^+/-)CD4⁺-клеток в норме и у больных бронхиальной астмой и ревматоидным артритом (отв. исполнитель: Кожевников В.С.).

Этап 2015 г.

1. Определение содержания ААТ к TNF, растворимых рецепторов к TNF в сыворотке крови у больных бронхиальной астмой. Оценка биологической активности ААТ к TNF в экспериментальных тестах in vitro (отв. исполнитель: Лопатникова Ю.А.).

2. Исследование возрастной динамики хромосом-специфической вариабельности длины теломер лимфоцитов, активности теломеразы и абсолютного количества TREC-позитивных клеток у здоровых доноров (отв. исполнитель: Кожевников В.С.).

3. Высокопроизводительный скрининг siRNA целевых к G-протеинам, ассоциированным с рецепторами и ионными каналами клеток (отв. исполнитель: Чепурнов А.А.).

4. Определение уровня трансаминаз, холестерина в печени в модели гломерулонефрита и иммунодефицита и выраженность фибросклеротических изменений в печени (отв. исполнитель: Колесникова О.П.).

Этап 2016 г.

1. Определение содержания ААТ к TNF, растворимых рецепторов к TNF в сыворотке крови, количества рецепторов TNF на иммунокомпетентных клетках у больных туберкулезом легких (отв. исполнитель: Лопатникова Ю.А.).

2. Оценка встречаемости аллельных вариантов генов рецепторов TNF и IL-1 у больных с иммунопатологическими состояниями (отв. исполнитель: Силков А.Н.).

3. Определение уровня активации LXRs на разных этапах развития гломерулонефрита и иммунодефицита (отв. исполнитель: Колесникова О.П.).

4. Оценка длины теломер отдельных хромосом лимфоцитов при иммунопатологических состояниях и возраст-зависимой патологии. Разработка диагностических и прогностических критериев развития иммунопатологических состояний (отв. исполнитель: Кожевников В.С.).

5. Высокопроизводительный скрининг siRNA целевых к фосфотазам и протеазам (отв. исполнитель: Чепурнов А.А.).

 

Научный коллектив (пофамильный список с указанием должности, научной степени):

1. Сенников С.В. профессор, д.м.н., зав. лабораторий

2. Колесникова О.П., д-р мед. наук, зав.лаб.

3. Кожевников В.С. профессор, д.м.н., зав. лабораторий

4. Блинова Е.А., канд. мед. наук, н.с.

5. Вольский Н.Н., канд. мед. наук, в.н.с.

6. Гаврилова Е.Д. (0,5 ставки), канд. биол. наук, н.с.

7. Гойман Е.В., канд. мед. наук, н.с.

8. Горева Е.П. м.н.с.

9. Зиннатова Е.В., канд. мед. наук, н.с

10. Киреев Ф.Д. м.н.с.

11. Колокольцева И.А., лаборант- исследователь.

12. Королькова О.Ю., канд. мед. наук, н.с.

13. Лопатникова Ю.А. канд. биол. наук, с.н.с.

14. Никитина Р.А., лаборант- исследователь.

15. Облеухова И.А. м.н.с.

16. Перминова О.М., канд. мед. наук, н.с.

17. Васильев Ф.Ф., м.н.с.

18. Садовская В.А. м.н.с.

19. Силков А.Н. канд. биол. наук, с.н.с.

20. Скоробогатых Е.В., н.с.

21. Хабарова А.П. лаборант-исследователь

22. Храпова М.В. (0,5 ставки), канд. биол. наук, н.с.

23. Чепурнов А.А. профессор, д.б.н., с.н.с.

24. Шевченко Ю.А. н.с., к.б.н.

25. Щукина А.Ю. лаборант-исследователь

 

Объекты и объем исследования:

Планируется использовать периферическую кровь от условно-здоровых доноров, и больных ревматоидным артритом, атопическим дерматитом и бронхиальной астмой находящихся на стационарном лечении в Клинике Иммунопатологии ФГБУ «НИИКИ» СО РАМН. Клинический материал от больных туберкулезом легких будет получен из ФГБУ ''ННИИТ'' Минздравсоцразвития России, от больных аутоиммунном тиреоидитом, ишемической болезнью сердца и гипертонической болезнью – из МКБ №1 г. Новосибирска. Для экспериментальных моделей будут использованы линейные мыши и их гибриды F1.

Методы исследования:

Для получения значений по абсолютному содержанию ААТ к TNF будет выделена чистая фракция ААТ методами аффинной хроматографии, с использованием трех сорбентов и последующей магнитной сепарацией, что позволит получить чистую фракцию ААТ без примеси самого медиатора TNF. Оценка содержания в сыворотке рецепторов к цитокинам TNF и IL-1 будет проведена с использованием коммерческих тест-систем ИФА, для оценки содержания ААТ будет использован сборный набор для ИФА. Определение уровня экспрессии рецепторов 1 и 2 типов к TNF и IL-1 будет проводиться методами иммунофенотипирования с использованием коммерческих антител и оптимизированного протокола оценки с использованием калибровочных частиц. Генотипирование ДНК будет проводиться с помощью анализа полиморфизма длин рестрицированных фрагментов и аллельспецифической полимеразной цепной реакции. Для каждого гена будет анализироваться 2-3 точки SNP. Для работы с клетками будут использованы методы выделения, разделения и культивирования, иммунофенотипирования и определения молекул (аминокислотных и нуклеотидных последовательностей) внутри клеток с использованием проточной цитофлюориметрии, методы гибридизации in situ (FISH), FISH с последующей проточной цитометрией (flow–FISH). Выделение CD4⁺- и Tх1- и Tх2-клеток будет выполняться методом сортинга. Количественная оценка экспрессии мРНК методом ОР-ПЦР в реальном времени и для определения аллельных вариантов генов цитокинов будет использована ПЦР в различных модификациях. Для определения уровня холестерина, ферментов и иммунных комплексов будут использованы иммунохимические и биохимические методы.

Аппаратура и оборудование:

1. Мультимодальный планшетный ридер LB 941 TriStar фирмы Berthold Technologies

2. Цитофлюориметры BD FACSAria, BD FACS Calibur

3. Анализатор белка Origen Analyzer

4. Ламинарные боксы для культуральных работ и для проведения ПЦР

5. Мультимодальная центрифуга Jouan MR 23i

6. СО2 инкубаторы Sanyo MCO

7. Амплификаторы MI Research PTC-200 и MiniOpticon

8. Аппарат для электрофореза

9. Система очистки воды

10. Микроскоп Axioskop 40

11. Видеоденситометр IMVDS

Научная новизна:

Впервые будут получены результаты по относительному и абсолютному содержанию ААТ к TNF в сыворотке крови больных ревматоидным артритом и бронхиальной астмой в стадии ремиссии и обострения, а также проведен корреляционный анализ с содержанием растворимых рецепторов и самого медиатора. В ряде экспериментальных тестов in vitro будет изучена биологическая активность ААТ к TNF, как собственная, так и по эффекту на внесение в культуру самого медиатора. С помощью калибровочных частиц будет определено количество экспрессированных мембраносвязанных форм рецепторов к TNF и IL-1 на субпопуляциях иммунокомпетентных клеток в норме и у больных ревматоидным артритом и атопическим дерматитом. Будут получены новые данные по частоте встречаемости аллельных вариантов генов рецепторов TNF и IL-1 I и II типов у жителей Юго-Западной Сибири в норме и у больных ревматоидным артритом, атопическим дерматитом.

Будут получены новые данные, характеризующие действие 5-азацитидина на активность Th1/Th2 ответа, количество субпопуляций регуляторных (Treg) и хелперных (Th17) клеток, уровень активации LXRs в модели гломерулонефрита и иммунодефицита in vivo.

Будут получены новые данные об укорочении теломер, активности теломеразы, тимопоэза и гомеостатической пролиферации популяций иммунокомпетентных клеток при иммунопатологических и возраст-зависимых заболеваниях, а также данные о возрастной динамике длины теломер отдельных хромосом иммунокомпетентных клеток в норме и при патологии.

Впервые будут получены данные о siRNA, способных блокировать начальные механизмы инфекции возбудителями геморрагических лихорадок.

 

Ожидаемые результаты и их научная и практическая значимость:

В ходе проведения исследования планируется получить результаты по содержанию ААТ к TNF в сыворотке здоровых доноров и больных РА и БА на разных стадиях патогенетического процесса. Предполагается обнаружить изменения как в общем количестве ААТ, так и возможно изменения связанные с соотношением подклассов IgG ААТ. При проведении корреляционного анализа будут выявлены взаимосвязи между содержанием в сыворотке самого медиатора, его растворимых рецепторов и IgG ААТ. Данные по биологической активности позволят оценить характер патогенетического влияния аутоантител к цитокину. Результаты полученные по проценту клеток экспрессирующих рецепторы к TNF и IL-1 и по абсолютному числу рецепторов на Т-, В-лимфоцитах и моноцитах условно-здоровых доноров и больных РА и АД позволят предположить вовлеченность данных субпопуляций в патогенетический процесс. Кроме того, при влиянии на эти клетки поликлонального активатора ЛПС, планируется оценить потенциальную возможность клеток реагировать на стимуляцию в тесах in vitro, что может свидетельствовать об уровне предактивированности клеток иммунной системы. Проведенный корреляционный анализ между содержанием растворимых рецепторов к TNF и IL-1, самих медиаторов в сыворотке и уровнем экспрессии мембраносвязанных форм рецепторов позволит получить новые данные по функционированию системы рецепторов в норме и при патологии, и возможно разработать прогностические и диагностические критерии для последующего использования в терапии и диагностике. Исследование встречаемости аллельных вариантов генов цитокинов TNF и IL-1 при различных иммунопатологических заболеваниях поможет оценить влияние генетических факторов на регуляцию биологических эффектов медиаторов в патогенезе.

Будут охарактеризованы эпигенетические механизмы регуляции иммунных процессов и её нарушения, приводящие к возникновению иммунопатологических состояний, и предложены схемы корригирующей терапии. Предполагается выяснить возможную роль иммунных комплексов в регуляции активности стерол-27-гидроксилазы и в патогенезе гиперхолестеринемии при аутоиммунных заболеваниях для достижения клинического эффекта в экспериментальной модели и при заболеваниях человека. Планируется разработка новой терапевтической стратегии, учитывающей изменения метаболизма липидов для коррекции иммунопатологических состояний.

Выявление новых механизмов развития заболеваний, индуцируемых укорочением теломер и реализуемых продуктами генов субтеломерных зон хромосом. Создание базы данных о возрастной динамике теломер CD4⁺-, CD8⁺, CD16⁺- и CD19⁺-клеток здоровых людей, позволяющей подбирать контрольную группу, соответствующую по полу и возрасту исследуемым больным. Вероятно, что в некоторых случаях укорочение теломер отдельных субпопуляций иммунокомпетентных клеток или их отдельных хромосом может опережать развитие патологии, что может служить основанием прогноза её развития и разработки методов её профилактики.

Анализ выявленных siRNA позволит выявить молекулярные механизмы некоторых этапов инфекции и спрогнозировать препараты, способные подавить развитие инфекции.

Область применения. Фундаментальная биология и иммунология; медицина, совершенствование методов прогноза, диагностики, лечения заболеваний; геронтология

 

Форма внедрения. Патенты, разработка диагностических и прогностических критериев для оценки тяжести протекания патологических процессов, методические рекомендации

 

Медико-социальная и экономическая эффективность. Повышение эффективности лечения иммунопатологических состояний с использованием новых диагностических и прогностических критериев, создание новых методов борьбы с высоколетальными инфекционными заболеваниями.

 

Взаимодействие с другими НИУ, вузами, клиниками: ФГБУ «ИХБФМ» СО РАН, ФГБУ ''ННИИТ'' Минздравсоцразвития России,МКБ №1

 

Сметная стоимость исследования: 120 млн. рублей

Научно-медицинская литература

1. Cabal-Hierro L, Lazo PS. Signal transduction by tumor necrosis factor receptors. // Cell Signal. 2012 Jun;24(6):1297-305.

2. Aviv A, Aviv H. Telomeres, hidden mosaicism, loss of heterozygosity, and complex genetic traits. // Hum Genet. 1998 Jul;103(1):2-4.

1. Blüml S, Scheinecker C, Smolen JS, Redlich K. Targeting TNF receptors in rheumatoid arthritis. // Int Immunol. 2012 May;24(5):275-81.

4. Chu YW, Gress RE. Murine models of chronic graft-versus-host disease: insights and unresolved issues. // Biol Blood Marrow Transplant. 2008 Apr;14(4):365-78.5. Crowley JE, Scholz JL, Quinn WJ 3rd, et all. Homeostatic control of B lymphocyte subsets. // Immunol Res. 2008;42(1-3):75-83.

6. Dolff S, Abdulahad WH, Westra J, Doornbos-van der Meer B, Limburg PC, Kallenberg CG, Bijl M. Increase in IL-21 producing T-cells in patients with systemic lupus erythematosus. // Arthritis Res Ther. 2011;13(5):R157

7. Dolff S, Bijl M, Huitema MG, Limburg PC, Kallenberg CG, Abdulahad WH. Disturbed Th1, Th2, Th17 and T(reg) balance in patients with systemic lupus erythematosus. // Clin Immunol. 2011 Nov;141(2):197-204.

8. Hemann MT, Strong MA, Hao LY, Greider CW. The shortest telomere, not average telomere length, is critical for cell viability and chromosome stability. // Cell.2001 Oct 5;107(1):67-77.9. Kang HK, Liu M, Datta SK. Low-dose peptide tolerance therapy of lupus generates plasmacytoid dendritic cells that cause expansion of autoantigen-specific regulatory T cells and contraction of inflammatory Th17 cells. // J Immunol. 2007 Jun 15;178(12):7849-58.

1. Mitka M. Experimental RNA therapy shows promise against Ebola virus in monkey studies.// JAMA. 2010 Jul 7;304(1):31.

11. Miyake K, Akahoshi M, Nakashima H. Th subset balance in lupus nephritis. // J Biomed Biotechnol. 2011;2011:980286.

1. Rufer N., Dragowska W., Thornbury G., Roosnek E., Lansdorp P.M. Telomere length dynamics in human lymphocyte subpopulations measured by flow cytometry // Nat Biotech. – 1998. – Vol.16. – P.743-747.
2. Shealy DJ, Visvanathan S. Anti-TNF antibodies: lessons from the past, roadmap for the future. // Handb Exp Pharmacol. 2008;(181):101-29.
3. Watts JK, Corey DR. Silencing disease genes in the laboratory and the clinic.// J Pathol. 2012 Jan;226(2):365-79.

15. Зиннатова Е.В. Особенности распределения длины теломер на отдельных хромосомах в лимфоцитах в норме и при иммунопатологических заболеваниях. / Дисс. Канд.мед наук. -2012. -Новосибирск. - 120 с.16. Кудаева О.Т., Гаврилова Е.Д., Колесникова О.П., Козлов В.А. Формирование иммунной памяти при стимуляции первичного иммунного ответа. // Российский иммунол. журн., 2010, 4, № 3, 237-242