Подойти к столу и взять все, что нужно для определения общего числа лейкоцитов, рассказать методику, определить практически у кролика (нормального, с лейкоцитозом и лейкопенией).

Методика подсчета количества лейкоцитов

А. Кровь набирается в лейкоцитарный меланжер до метки 0,5 и разводится в 20 раз (до метки 11) 3% раствором под-крашенной метиленовой синькой уксусной кислоты. Подсчет лейкоцитов производится в камере Горяева в 100 больших квадратах сетки.

Б. В Видалевскую пробирку вносят 0,4 мл 3% уксусной кислоты и 0,02 мл крови, взятой с помощью пипетки от гемометра Сали. Перед заполнением камеры Горяева пробирку с разведенной кровью тщательно встряхивают.

Для вычисления количества лейкоцитов в 1 литре пользуются следующей формулой:

где

L – количество сосчитанных лейкоцитов;

16·100– количество малых квадратов в 100 больших;

20 – разведение крови;

1/4000 – объём 1 малого квадрата равен (1/20·1/20·1/10 = 1/4000 мм3, где 1/20 каждая сторона квадрата, 1/10 – глубина квадрата под покровным стеклом).

Интерпретация полученных данных. Нормальное количество лейкоцитов: 4.0 – 9.0 х 109/л. Уменьшение их числа в крови называется лейкопенией, увеличение - лейкоцитозом.

Лейкоцитоз может быть абсолютным (истинным) и относительным (перераспределительным).

Абсолютный лейкоцитоз – наблюдается при острых воспалительных процессах, некрозе тканей, острых бактериальных инфекциях (за исключением брюшного тифа, бруцеллеза, туляремии и др.), аллергических состояниях, злокачественных опухолях (с деструкцией тканей), закрытых травмах черепа и кровоизлияниях в мозг, диабетической и уремической коме, шоке, острой кровопотере, как первичная реакция – при лучевой болезни. Значительное повышение количество лейкоцитов встречается при лейкозах.

Относительный (перераспределительный) является следствием поступления лейкоцитов в ток крови из органов, служащих для нее депо. Это происходит после приема пищи (пищевой лейкоцитоз), горячих и холодных ванн, сильных эмоций (вегетососудистый лейкоцитоз), интенсивной мышечной работы (миогенный лейкоцитоз) и т.д.

Лейкопения. Лейкопения рассматривается как показатель угнетения функциональной способности костного мозга в результате воздействия токсических веществ (мышьяк, бензол и т.п.), некоторых медикаментов (сульфаниламиды, левомицетин, бутадион, иммуран, циклофосфан и т.п.), вирусов (гриппа, вирусного гепатита, кори и т.п.), микробов (брюшного тифа, бруцеллеза и т.п.), ионизирующей радиации, рентгеновского излучения и гиперспленизма (увеличение функции селезенки).

Приготовить мазок крови на морфологию у кролика (нормального и с гемолитической анемией). Зафиксировать и покрасить по Романовскому, выявить дегенеративные формы эритроцитов.

На предметное стекло наносят тонкий мазок крови, который после высыхания фиксируют в метиловом спирте 3 минуты или в смеси Никифорова 20 минут. Мазок заливают краской Романовского и через 25-30 минут смывают краску водопроводной водой; после высушивания мазок рассматривают с помощью иммерсионной системы микроскопа.

В мазке крови обратить внимание на величину и форму эритроцитов, степень насыщенности их гемоглобином, наличие патологических форм.

Гемолитические анемии.

К ним относятся заболевания, при которых кроверазрушение преобладает над кровообразованием. Разрушение эритроцитов при гемолизе приводит к общему гемосидерозу и надпочечной желтухе. Иногда развивается гемоглобинурийный нефроз – заболевание почек, при котором продукты распада гемоглобина поражают проксимальные канальцы почек. Появляется гемосидерин в почечном эпителии, вызывая некроз эпителия и разрывы базальных мембран.

При гемолитической анемии появляется:

1. Пойкилоцитоз – эритроциты разной формы;

2. Анизоцитоз – эритроциты различной величины;

3. Гиперхромные, гипохромные (в зависимости от интенсивности окраски).

4. В эритроцитах могут быть остатки ядер (тельца Жоли – базофильные зерна, и кольца Кабо – базофильные кольца). (Рис. 1, 2)

В крови могут появляться незрелые формы эритроцитов: эритробласты, оксифильные, полихроматофильные, базофильные нормоциты, мегалобласты, мегалоциты и др.

Подойти к столу и взять все, что нужно для определения общего числа эритроцитов, рассказать методику. Определить их практически у кролика (нормального, с постгеморрагической и гемолитической анемиями).

Оборудование и реактивы:

1 смесители (меланжеры) или пробирки для подсчета эритроцитов

2 2% — раствор NaCl (для разведения эритроцитов) или жидкость Гайема

3 счетная камера

Методика подсчета количества эритроцитов

А. Кровь из уха кролика набирают в эритроцитарный меланжер до метки 0,5 и разводят в 200 раз 2% раствором поваренной соли (до метки 101). После тщательного встряхивания меланжера заполняют счетную камеру и производят подсчет эритроцитов по известным правилам.

Б. В предварительно высушенную чистую пробирку точно отмеривают пипеткой 4 мл 2% раствора поваренной соли. Осторожно выдувают в неё 0,02 мл крови, взятой из краевой вены уха кролика (кровь забирают пипеткой от гемометра Сали). Взвесь тщательно перемешивают и заполняют ею камеру.

Для вычисления количества эритроцитов в 1 л пользуются формулой:

,

где: А – число сосчитанных эритроцитов,

80 – количество малых квадратов, в которых считали эритроциты,

1/4000 – объем камеры над малым квадратом сетки Горяева в мкл,

200 – разведение крови в смесителе.