В готовых мазках, окрашенных по Романовскому, сосчитать лейкоцитарную формулу.

Техника подсчета лейкоцитарной формулы

Подсчет лейкоцитарной формулы производится в готовых окрашенных мазках периферической крови человека с использованием иммерсионной системы микроскопа. В связи с тем, что клетки на мазке распределяются неравномерно, поиск лейкоцитов в мазке производят с соблюдением определенных правил перемещения предметного стекла.

Рекомендуем подсчет лейкоцитов производить в четырех зонах(четырехпольный метод), на которые делят мазок, мысленно проведя через его центр продольную и поперечную линии. В каждой из этих зон следует найти по 25 лейкоцитов; передвижение мазка в каждой зоне ведут по зигзагообразной линии (орнамент-меандр), каждый отрезок которой составляет приблизительно 3 поля зрения микроскопа (см. рисунок).

Результаты подсчета лейкоцитарной формулы записываются в виде лейкограммы. - сдвиг лейкоцитарной формулы влево — увеличение количества незрелых (палочкоядерных) нейтрофилов в периферической крови, появление метамиелоцитов (юных), миелоцитов; - сдвиг лейкоцитарной формулы вправо — уменьшение нормального количества палочкоядерных нейтрофилов и увеличение числа сегментоядерных нейтрофилов с гиперсегментированными ядрами (мегалобластная анемия, болезни почек и печени, состояние после переливания крови).

Подойти к столу и взять все необходимое для окраски крови на ретикулоциты. В полученном мазке крови сосчитать их количество.

Метод прижизненной (суправитальной) окраски ретикулоцитов бриллиант-крезилблау

Оборудование и реактивы:

1 Предметные стекла (обезжиренные)

2 1% раствор бриллианткрезилблау (спиртовой)

3 Шлифовальное предметное стекло

4 Чашка Петри

5 Фильтровальная бумага

6 Стеклянная палочка

7 Иммерсионное масло

Каплю краски (бриллиант-крезилблау) наносят стеклянной палочкой на предварительно хорошо вымытое, обезжиренное и подогретое над пламенем горелки стекло и делают мазок тонким шлифованным стеклом. Краска быстро высыхает. Такие стекла можно заготовить впрок.

На приготовленное таким образом стекло наносят каплю крови, делают тонкий мазок и тотчас же помещают во влажную камеру. Для этого удобно пользоваться чашкой Петри с крышкой, на дно которой кладут влажный бумажный фильтр.

Во влажной камере мазки выдерживают 5-8 минут, затем высушивают на воздухе, рассматривают с помощью иммерсионной системы микроскопа. Эритроциты и ретикулоциты при этом методе окраски красятся в зеленовато-голубоватый цвет, в отличие от окраски по Романовского-Гимза, где эритроциты красятся в розовый цвет, а ретикулоциты вообще не выявляются. Ретикулоциты отличаются от зрелых эритроцитов наличием окрашенной в синий цвет зернисто-сетчатой субстанции. Для подсчета ретикулоцитов поле зрения микроскопа ограничивают бумажным окошечком. В мазке подсчитывают в поле зрения 1000 эритроцитов и отмечают сколько среди них ретикулоцитов. Найденное количество делят на 10, т.е. выражают в промилле (‰).

Нормальное содержание ретикулоцитов в крови 0,2 — 1,0%.

Подойти к столу и взять все необходимое для определения билирубина в сыворотке крови и моче больного желтухой.

Определение билирубина в сыворотке крови больного желтухой

А. Прямая реакция Ван-ден-Берга

В пробирку наливают 0,5 мл исследуемой сыворотки крови и 1 мл дистиллированной воды. После тщательного перемешивания к жидкости добавляется 0,25 мл диазореактива Эрлиха. Если проба положительная, появляется розовая или красноватая окраска. Иногда окрашивание жидкости происходит не сразу, а спустя 3-5 минут.

Непрямая реакция Ван-ден-Берга

В центрифужную пробирку наливают 1 мл сыворотки крови и 2 мл этилового спирта. Тщательно перемешивают и центрифугируют в течение 10 минут при 1500 об/мин. Про-зрачную жидкость отсасывают в другую пробирку и добавляют 0,25 мл диазореактива Эрлиха. Проба считается положительной при появлении более или менее интенсивной красноватой окраски.

Б. Метод Йендрашека

Общий билирубин. В пробирку вносят 0,5 мл сыворотки, 1,75 мл кофеинового реактива и 0,25 мл диазореактива.

Прямой билирубин. В пробирку вносят 0,5 мл сыворотки, 1,75 мл физиологического раствора и 0,25 мл диазореактива.

Непрямой билирубин. Определяется по разности между общим и прямым билирубином.