Этапы реализации наследственной информации у прокариот и эукариот.

Репликация (синтез) ДНК

Синтез ДНК всегда начинается в строго определенных точках. Фермент топоизомераза раскручивает спираль. Геликаза разрушает водородные связи между цепями ДНК и образует вилку репликаций. SSB-белки препятствуют повторному формированию водородных связей.

РНК-праймаза синтезирует короткие фрагменты РНК (праймеры),которые присоединяются к 3'-концу.

ДНК-полимераза начинают от праймера и синтезирует дочернюю цепь(5' 3')-

Направление синтеза одной цепи ДНК совпадает с направлением движения вилки репликаций, поэтому данная цепь синтезируется непрерывно. Здесь синтез идет быстро. Направление синтеза второй цепи противоположно напралению вилки репликаций. Поэтому синтез данной цепи происходит в виде отдельных участков и идет медленно (фрагменты Оказаки).

Созревание ДНК: отщепляется РНК-праймеры, достраиваются недостающие нуклеотиды, фрагменты ДНК соединяются с помощью лигазы. Топоизомераза раскручивает спираль.

Этапы реализации наследственной информации (у эукариот)

1.Транскрипция

2.Процессинг

3.Трансялция

4.Посттрансляционные изменения

Трансляция – синтез молекулы РНК на основе молекулы ДНК. Ключевой фермент – РНК-полимераза.

РНК-полимераза должна распознать промотер и взаимодействовать с ним. Промотер –особый участок ДНК, который располагается перед информативной частью гена. Взаимодействие с промотором необходимо для активации РНК-полимеразы. После активации РНК-полимераза обеспечивает разрыв водородных связей между цепями ДНК.

!Синтез РНК всегда происходит по определенной кодогенной цепи ДНК.На этой цепи промотер располагается ближе к 3'-концу.

Синтез РНК происходит по принципам комплементарности и антипараллельности.

РНК-полимераза достигает стоп-кодона (терминатор или терминирующей кодон).Это является сигналом для прекращения синтеза. Фермент инактивируется, отделяется от ДНК при этом освобождается вновь синтезированная молекула ДНК – первичный трансткрипт – про-РНК. Восстанавливается исходная структура ДНК.

Особенности строения гена эукариот:

У эукариотов гены включают в себя различные по функции участки

А) Интроны- фрагменты ДНК (гена), которые не кодируют аминокислоты в белке

Б)Экзоны – участки ДНК, которые кодируют аминокислоты в белке.

Прирывистая природа гена была обнаружена Роберцом и Шарпом ( Ноб. Премия 1903г).

Количество интронов и экзонов в разных генах сильно отличается.

Процессинг (созревание)

Происходит созревание первичного транскрипта и образуется зрелая молекула матричной РНК, которая может участвовать в синтезе белка на рибосомах.

Этапы:

1) На 5'- конце РНК формируется особый участок (структура) – КЭП или шапочка. КЭП обеспечивает взаимодействие с малой субъединицей рибосомы.

2) На 3'-конце РНК присоединяется от 100 до 200 молекул нуклеотидов, несущих аденин (полиА). При синтезе белка эти нуклеотиды постепенно отщепляется, разрушение полиА является сигналом для разрушения молекул РНК.

3) К некоторым нуклеотидам РНК присоединяется группа CH₃ – метилирование. Это увеличивает устойчивость ДНК к действию ферментов цитоплазмы.

4) Сплайсинг – происходит вырезание интронов и сшивание между собой экзонов. Фермент рестриктаза удаляет, лигаза- сшивает)

Зрелая матричная РНК включает в себя:

Лидер обеспечивает связывание матричной РНК с субъединицей рибосомы.

СК – стартовый кодон – одинаковый у всех матричных РНК, кодирует аминокислоту

Кодирующий участок – кодирует аминокислоты в белке.

Стоп-кодон – сигнал о прекращаемся синтезе белка.

Во время процессинга происходит жесткий отбор в цитоплазму из ядра выходит около 10% молекул от числа первичных транскриптов.

Альтернативный сплайсинг

У человека имеется 25-30 тысяч генов.

Однако у человека выделено около 100 тысяч белков.

Альтернативный сплайсинг – это ситуация, при которой в клетках разных тканей один и тот же ген обеспечивает синтез одинаковых молекул проРНК. В разных клетках по разному определяется количество и границы между экзонами и интронами. В результате из одинаковых первичных транскриптов получаются различные мРНК и синтезируются разные белки.

Альтернативный сплайсинг доказан примерно для 50% генов человека.

Трансляция – это процесс сборки пептидной цепи на рибосомах согласно информации, заложенной в иРНК.

Этапы:

1.Инициация (начало)

2.Элонгация (удлинение молекулы)

3.Терминация (конец)

Инициация.

Молекула матрРНК с помощью КЭПа контактирует с малой субъединицей рибосомы. С помощью лидера РНК связывается с субъединицей рибосомы. К стартовому кодону присоединяется транспРНК, которая несет транспортную кислоту метионин. Затем присоединяется большая субъединица рибосомы. В целой рибосоме формируется два активных центра: аминоацильный и пептидильный. Аминоакцильный свободен, а пептидильный занят тРНК с метионином.

Элонгация.

В аминоакцильный цент входит мРНК, антикодон которой соответствует кодируещему.

После этого рибосома сдвигается относительно мРНК на 1 кодон.При этом аминоакцильный центр освобождается. В пептидильном центре находится мРНК, соединяется с второй аминокислотой. Процесс циклически повторяется.

3.Терминация

В аминоацильный центр поступает стоп-кодон, который распознается специальным белком, это является сигналом для прекращения синтеза белка. Субъединицы рибосомы разъединяются, освобождая при этом мРНК и вновь синтезируется полипептид.

4.Пострансляционные изменения.

При трансляции образуется первичная структура полипептида.Этого недостаточно для выполнения функций белка, поэтому белок изменяется, что обеспечивает его активность.

Образуется:

А) вторичная структура (водородные связи)

Б)глобула – третичная структура (дисульфидные связи)

В) четвертичная структура – гемоглобин

Г)Гликозилирование – присоединение к белку остатков сахаров (антитела)

Д) расщепление большого полипептида на несколько фрагментов.

Различия в реализации наследственной информации прокариот и эукариот:

1.У прокариот отстутсвуют экзоны и интроны, поэтому отсутствуют этапы процессинга и сплайсинга.

2.У прокариот транскрипция и трансляция происходит одновременно, т.е. идет синтез РНК и уже начинается синтез ДНК.

3.У эукариот синтез различных видов РНК контролируется различными ферментами. У прокариот все типы РНК синтезируются одним ферментом

4.У эукариот каждый ген имеет свой собственный уникальный промотер, у прокариот один промотер может контролировать работу несколькихгенов.

5. Только у прокариот имеется система Оперона