В образцах катионного полиакриламида

1. Принцип метода: мономер акриламид экстрагируется из образца катионного полиакриламида смесью воды и ацетона, которая размягчает, но не растворяет полимер. Экстракт анализируют с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения (ЖХВР) с ультрафиолетовым детектором. Идентификация осуществляется по времени удерживания стандарта, концентрация определяется измерениями площади пиков.

2. Аппаратура.

2.1. Для экстракции.

2.1.1. Стеклянные колбы, емкостью около 125 мл, с притертыми пробками.

2.1.2. Весы точностью до 0,1 мг.

2.1.3. Лабораторный вибростол или смеситель.

2.1.4. Мерные цилиндры.

2.1.5. Шприцы, емкостью 2 мл.

2.1.6. Одноразовые фильтры для шприцов диаметром 25 мм, снабженные мембранами из поливинилфторида с размером пор 0,45 мкм.

2.1.7. Лабораторная дробилка.

2.1.8. Сита из плетеной проволоки, размер апертуры - 1000 мкм.

2.2. Для анализов.

2.2.1. Жидкостной хроматограф высокого разрешения, с системой непрерывной подачи растворителя, клапаном введения образцов, петлей на 5 мкм, термостатом для колонок, спектрометрическим ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны, регистрирующее устройство (самописец) или электронный интегратор, колонка с наполнителем длиной 150 мм и внутренним диаметром 4,6 мм (например, FISONS PLRP-S 100A, колонка 5 мкм или аналогичная).

2.2.2. Весы с точностью до 0,1 мг.

2.2.3. Мерные колбы.

2.2.4. Пипетки с точностью 0,03 мл.

2.2.5. Микролитровые шприцы.

2.3. Реактивы.

2.3.1. Гелий высокой чистоты, давление на линии 0,0069 кПа.

2.3.2. Акриламид (марки для электрофореза).

2.3.3. Ацетон.

2.3.4. Фосфорная кислота 88 % масс., плотность р = 1,75 г/см³.

2.3.5. Дигидрофосфат натрия дегидрат.

2.3.6. Элюент. Взвесить с точностью до 0,001 г 6,240 г дигидрофосфата натрия дегидрата и растворить его в 500 мл воды. Перенести количественно в мерную колбу на 2000 мл, заполнить колбу водой до метки и перемешать. Довести рН до 3,0 фосфорной кислотой. Дегазировать при помощи ультразвуковой бани или продувая раствор гелия. Хранить элюент в бутылке из темного стекла.

2.3.7. Растворитель - ацетоноводная смесь. Отмерить 800 мл ацетона в мерный цилиндр на 1 л. Затем отмерить 200 мл воды в мерный цилиндр на 250 мл. Перелить воду в 1-й цилиндр тщательно смешать, но без интенсивного перемешивания (произойдет уменьшение объема, что является нормальным). Дегазировать при помощи ультразвуковой бани или пропусканием через раствор гелия. Хранить смесь в бутылке из темного стекла.

2.3.8. Мономер акриламид, стандартный раствор для хранения (1000 мг/л). Взвесить с точностью до 0,001 г 0,5 г акриламида, поместить мономер в колбу и залить 200 мл ацетоноводной смеси, затем перенести в мерную колбу на 500 мл и довести объем до метки растворителем. Хранить в герметичной склянке в холодильнике. Раствор устойчив в течение 4 недель.

2.3.9. Мономер акриламид, стандартный раствор (20 мг/л). Ввести пипеткой 5 мл основного раствора (1000 мг/л) в мерную колбу на 250 мл, довести объем до метки растворителем. Хранить в герметичной склянке в холодильнике. Раствор устойчив в течение 1 недели.

2.4. Ход определения.

2.4.1. Подготовка образца для испытаний. Образцы, содержащие более 10 масс. % частиц размером более 1000 мкм, должны быть измельчены с помощью лабораторной дробилки, пока весь материал не будет проходить через сито с апертурой 1000 мкм. Полученный материал - проба А.

2.4.2. Подготовка пробы для анализа.

2.4.2.1. Взвесить с точностью до 0,001 г 4 г образца для испытаний (А), поместить его в 125 мл колбу, добавить 40 мл ацетоноводной смеси.

2.4.2.2. Плотно закрыть колбу и перемешивать на вибростоле или смесителе не менее 16 часов.

2.4.2.3. Полученный жидкий экстракт (проба Б) хранить в холодильнике не более 1 недели до анализа.

2.4.3. Условия хроматографирования:

- подвижная фаза/ растворитель для элюирования - водный раствор 0,02 моль/л дигидрофосфата натрия при рН 3,0;

- объемная скорость потока - 1,5 мл/мин;

- температура колонки - 40 °С;

- длина волны - около 220 нм в области максимального поглощения.

2.4.4. Анализ экстракта. Используя шприц отобрать часть жидкого экстракта (образец Б). Установить фильтр шприца и иглу, удалить весь воздух, вставить иглу в отверстие для дозирования в 5 мкл петле. Промыть петлю приблизительно половиной содержимого шприца перед впрыскиванием в колонку. Измерить площадь пика со временем удерживания, соответствующим стандарту акриламида (предполагается, что отклик датчика - линейная функция концентрации, но линейность должна сначала быть установлена хроматографистом посредством калибровочного графика).

2.4.5. Для контрольного опыта повторить анализ (п. 2.4.4), используя вместо жидкого экстракта (образец Б) ацетоноводную смесь.

2.4.6. Калибровка. Повторить анализ (п. 2.4.4), используя вместо жидкого экстракта (образец Б) стандартный раствор акриламида (20 мг/л). Проводить калибровку необходимо после анализа 4—5 образцов. Если площади пиков последовательных растворов изменяются больше чем на 10 %, необходима корректировка процедуры.

2.4.7. Выражение результатов.

2.4.7.1. Содержание остаточного акриламида (С_A), выраженное в мг на кг продукта, рассчитывается по следующей формуле:

где:

2.4.7.2. Точность. Абсолютное различие между двумя отдельными результатами, полученными при условии повторяемости, не должно превышать величину повторяемости r, рассчитываемую по следующему уравнению:

r = 0,20 Z,   где:

Приложение 8

(справочное)