Правила приготовления и стерилизации питательных сред

Предварительно приготовленный картофельный (200 г картофеля режут ломтиками и варят в 1 л воды до готовности) или овсяный (150 г овсяных хлопьев варят в 1 л воды) отвар вливают в мерную посуду, фильтруют, добавляют агар и доводят объем до 1 л. Устанавливают нужное значение pH. Для стерилизации среду разливают в колбы, флаконы, пробирки не более, чем наполовину. Пробки (ватно-марлевые) закрывают плотной бумагой и помещают в автоклав.

Существуют несколько способов стерилизации:

1) стерилизация насыщенным паром под давлением (табл. 2);

Таблица 2

Соотношение температуры насыщенного пара и давления

при стерилизации питательных сред

Давление, атм		Температура, °С
Нормальное	Добавочное
1,0	–	100
1,0	0,5	112
1,0	1,0	121
1,0	1,5	128
1,0	2,0	134

2) стерилизация сред фильтрованием через мелкопористые фильтры. Применяются бактериологические фильтры Зейтца, мембранные фильтры. Фильтрующая способность их определяется размерами пор и степенью пористости. Метод необходим в тех случаях, когда среды не выдерживают нагревания (например, среды, содержащие белки);

3) химическая стерилизация. Среду выдерживают 7 ч с 0,1 %-ной перекисью водорода при температуре 45 °С;

4) стерилизация с помощью антибиотиков. Этим методом пользуются в тех случаях, когда стремятся освободиться от одних групп микроорганизмов при сохранении других и для уменьшения обсемененности материала;

5) стерилизация током высокой частоты, ультразвуком, ИК-лучами.

Задание:

    1. Приготовить среду Чапека, картофельно-глюкозный, овсяный агар.

    2. Разлить охлажденную до 45 °С среду в чашки Петри (по 12 чашек каждой среды) и пробирки (по 10 пробирок соответственно).

    3. Высеять споры или мицелий грибов, выросших на пораженных объектах во «влажных камерах» на чашки Петри и поместить на агар стерильные пораженные ткани растений.

    4. Выделить из предоставленного пораженного материала гриб Phytophthora infestans на ломтиках картофеля.

ЗАНЯТИЕ 3

Тема: Изучение культуральных и морфологических признаков, используемых в систематике грибов пор. Moniliales ( Hyphomycetales ).

Цель: Научиться описывать морфологические структуры грибов пор. Moniliales (Hyphomycetales) и измерять объекты при микроскопировании.

Оборудование: Микроскоп, бинокуляр, пенал с набором инструментов.

Материал: Чистые культуры грибов на средах либо пораженные органы и ткани растений с хорошо развитым спороношением.

I . Конидиеносцы (по Литвинову, 1969)

Характер расположения

Расположение поодиночке, свободно отстоящие друг от друга или объединенные в группы, но не сросшиеся (не спаянные) между собой.

Расположение группами, сросшиеся (спаянные) между собой в пучки – коремии.

Расположенные тесным слоем на подушковидных стромах, состоящих из рыхло сплетенных гиф мицелия (спороложа или спородохии), большей частью короткие.

Степень дифференциации

Отчетливо обособленные (дифференцированные), заметно отличающиеся от вегетативных гиф мицелия.

Мало или почти не отличающиеся от вегетативных гиф мицелия.

Тип ветвления

Неразветвленные (простые).

Разветвленные (моноподиально, симподиально, дихотомически, мутовчато, кистевидно и т.п.).

Моноподиальным называется такое ветвление, при котором боковые ветви отходят от главной центральной оси конидиеносца.

Симподиальное ветвление – это ветвление, при котором центральная ось конидиеносца прекращает свой рост, а боковая ветвь ее служит как бы продолжением центральной оси; от этой боковой ветви отходит боковая ветвь следующего порядка, тоже как бы продолжающая центральную ось, и т.д.. Таким образом, главная ось конидиеносца состоит из ветвей различных порядков.

Дихотомическим называется такое ветвление, при котором конидиеносец в точке роста разветвляется вилкообразно, обычно несколько раз, последовательно.

Окраска

Бесцветные, светло-, ярко- или темноокрашенные (оболочка и содержимое).

Разные принципы в строении и расположении конидиеносца

Положение (приподнимающиеся, прямостоячие, ниспадающие, стелющиеся).

Размеры (высота и толщина).

Форма и характер окончания (вершинка).

Поверхность оболочки (гладкая, шероховатая и др.).

Способ отхождения (от субстратных или воздушных гиф мицелия).

 

II . Конидии

Строение и окраска

Одноклеточные, двуклеточные или многоклеточные; с поперечными и продольными перегородками (муральные); наличие придатков.

Бесцветные, светло-, ярко- или темноокрашенные; окраска в массе.

Способ образования

Путем расчленения (распадения) недифференцированной или слабо обособленной гифы мицелия на отдельные клетки – конидии (споры).

Путем возникновения на более обособленных (дифференцированных) ответвлениях грибницы (т.е. конидиеносцах).

Акропетально или базипетально.

Экзогенно или псевдоэндогенно.

Расположение

Непосредственно на конидиеносце.

На фиалидах, стеригмах, зубчиках, выступах или веточках.

На интеркалярных расширенных клетках.

На вершине (апикально), с боков (плеврогенно).

Одиночные, в цепочках (параллельных, переплетающихся или соединенных в колонку) или собранные (скученные) в головки или гроздья и т.п.