Лабораторная диагностика гонореи

Установление этиологического диагноза гонореи возможно только при обнаружении возбудителя заболевания в патологическом отделяемом.

Наиболее распространенным методом выявления гонококка является бактериоскопический. Исследуют по 2 мазка из каждого очага поражения: один для ориентировочной микроскопии обрабатывают 1 % водным раствором метиленового синего или 0,5 % водным раствором бриллиантового зеленого, другой — для окончательной идентификации гонококков окрашивают по способу Грама. Идентификация гонококка производится на основании его свойств: морфологии, расположения и отношения к окраске по способу Грама.

Диаметр гонококка 0,6—1,0 мкм. Размножаясь делением в разных плоскостях, гонококки не образуют цепочек. Внутри лейкоцитов гонококки располагаются парами или группами так, что одни диплококки лежат по отношению к другим под разными углами.

Внеклеточное расположение гонококков также имеет характерные особенности. Часто гонококки лежат на клетках плоского эпителия и большом количестве с перпендикулярным расположением диплококков друг к другу внутри ряда. Частота внутри- и внеклеточного нахождения гонококков зависит как от периода заболевания, так и от методики взятия материала.

Основной дифференциальный признак — отношение гонококка к окраске по методу Грама. Гонококки грамотрицательны, т.е. легко обесцвечиваются спиртом и окрашиваются дополнительной розовой краской.

Положительным лабораторный анализ из гонококка можно считать только в случае выявления их типичных форм в мазках, окрашенных метиленовым синим (бриллиантовым зеленым) и по методу Грама.

Чувствительность бактериоскопического метода исследования явно недостаточна при диагностике торпидно протекающей и хронической гонореи, при обнаружении в мазках измененных форм микроорганизмов, при экстрагенитальной локализации процесса, а также при решении вопроса об излеченности.

В этих случаях необходимо бактериологическое исследование. Без него не может быть поставлен диагноз гонореи у детей, у которых значительно чаще, чем у взрослых, в мочеполовых органах находятся другие представители рода нейссерий.

Решающим при бактериологической диагностике гонореи является качество питательных сред. В течение многих лет для выделения гонококков от больных в нашей стране использовался мясопептонный агар из кроличьего мяса или свежих бычьих сердец с добавлением 25—30 % асцитической жидкости от больных с сердечной недостаточностью.

В.Н. Бедновой и М.В. Яцухой (1975) были разработаны безасцитные питательные среды из ингредиентов производственного изготовления.

Один из вариантов безасцитной питательной среды изготавливается производственным путем под названием «Питательная среда для выделения гонококков, сухая». Для приготовления рабочей среды в лабораториях требуется только стерильная дистиллированная вода. Отечественная безасцитная питательная среда обладает высокими ростовыми свойствами.

В последние годы организован выпуск сред в микроупаковках («Микрокульт» и др.), представляющих собой пластмассовые пластинки с углублениями, заполненными средой; при выращивании посевов создается атмосфера с повышенным содержанием СО₂, а через 18 ч посевы обрабатывают реактивом на выявление оксидазы. Этот метод непригоден для исследования материала из прямой кишки и ротоглотки из-за обильной посторонней флоры в первом случае и наличия других нейссерий во втором.

Помимо сред, предназначенных для непосредственного посева из очага, применяют транспортировочные среды, или среды сохранения. Эти среды служат не для размножения гонококка, а для сохранения его жизнеспособным.

Для подавления сопутствующей гонококку бактериальной флоры и повышения интенсивности его роста в среду добавляют антибиотики: 20 ЕД/мл полимиксина М сульфата и 6,2 ЕД/мл ристомицина сульфата, вместо которого можно использовать линкомицина гидрохлорид — 2 мкг/мл. Без добавления к среде антибиотиков невозможно выделение гонококка из прямой кишки.

Для дифференциации грамотрицательных кокков необходимо выделение их в чистой культуре. При этом следует учитывать их рост на необогащенных питательных средах и при комнатной температуре, так как в таких условиях хорошо размножаются непатогенные нейссерии. При выделении чистой культуры изучают морфологию, расположение, окраску выделенного микроорганизма, вид колоний, оксидазную, каталазную и сахаролитическую активность. Наиболее трудным является отличие гонококка от менингококка.

Колонии гонококка вырастают в течение 1 - 2 сут, хотя наблюдается поздний рост - на 7 - 8-е сутки, особенно если материалом для посева служит слизь из канала шейки матки. Все колонии гонококка имеют круглые очертания, ровные края, блестящую поверхность; они прозрачные, бесцветные или слегка беловатые, слизистого характера, легко снимаются с поверхности среды. При микроскопии окрашенных по методу Грама мазков из культур гонококки выглядят в основном отдельными грамотрицательными кокками, беспорядочно рассыпанными по периферии скопления и более густо расположенными в центре.

Гонококки, как и другие нейссерии, вырабатывают цитохромоксидазу. Это выявляется путем заливки поверхности роста культуры 1 % водным раствором диметилпарафенилендиамина или другим реактивом: сначала наблюдается покраснение, а затем почернение колоний гонококка.

R. Saginur и соавт. (1982) изучали каталазный тест для идентификации гонококков. Для постановки реакции использовали 30 % раствор Нг0₂. При соприкосновении поверхности колоний гонококка с этим раствором в 100 % случаев отмечалось мгновенное образование пены.

Каталазоположительными бывают отдельные штаммы других нейссерии. Авторы считают возможным использовать каталазную реакцию в качестве отборочного теста на наличие гонококков с последующим подтверждением путем изучения сахаролитических свойств.

Ферментативные свойства нейссерии изучаются давно.

В 1978 г. была разработана оригинальная желточная среда ферментации для выявления сахаролитических свойств нейссерий, обладающих высокой чувствительностью и специфичностью.

В 1968 г. R. PospiSil и соавт. предложили экономную модификацию определения сахаролитических свойств гонококка: испытуемый штамм наносят на поверхность среды, помещают на нее диски из фильтровальной бумаги диаметром 1,5 см, пропитанные 10 % растворами различных Сахаров, а через 18 ч роста культуры в термостате на все диски наносят по 1 капле 0,5 % раствора фенолового красного. При разложении сахара ферментом микроорганизма диск становится желтым, при отсутствии разложения остается красным.

Для диагностики гонореи ротоглотки, по данным Г.С. Капцевой (1981), важны взятие патологического материала со слизистой оболочки миндалин и глотки ватным тампоном, импрегнированным активированным углем, использование безасцитной питательной среды с антибиотиками и оротовой кислотой (1 мкг/мл).

При гонорее прямой кишки наиболее выраженные воспалительные явления наблюдаются в анальном канале. В связи с этим рекомендуется производить забор патологического материала для диагностического исследования ложкой Фолькмана с поверхности слизистой оболочки канала с посевом его только на среды с антибиотиками.

Серологические методы исследования при диагностике гонореи применяются ограниченно. Определенное значение имеет реакция Борде—Жангу, особенно при хронической и осложненной гонорее.

Изучалась и реакция пассивной гемагглютинации (РПГА), однако в широкую практику она не вошла. В процессе изучения находится иммуноферментный анализ (ИФА).

Преимуществами ИФА являются возможность определения нежизнеспособных микроорганизмов, L-форм, а также автоматизация теста. Недостаток ИФА — невозможность определения чувствительности гонококка к антибиотикам и его ферментативных свойств.

На современном этапе важное значение приобретает активное выявление больных гонореей. Оптимальным является использование с этой целью высокочувствительных и простых отборочных тестов.

В течение многих десятилетий были попытки использовать метод внутрикожных проб. Однако несовершенство метода приготовления и очистки препаратов не позволило внедрить данный метод в практику. В 1970 г. В.Ф. Рунова предложила универсальный способ получения аллергенов из бактерий с высоким содержанием белка.

В.Н. Беднова совместно с М.Г. Агилиной в 80-е годы изучали внутрикожную пробу с аллергеном гонококка, приготовленным по методу Руновой. Были установлены высокие чувствительность (85,6—87,9 %) и специфичность (93 %), что позволило рекомендовать этот тест в качестве отборочного при диагностике гонореи.

Список использованной литературы:

1. Кожные и венерические болезни Ю.К. Скрипкин, В.Н. Мордовцев том 1

2. Дерматовенерология под ред. Е.В. Соколовского

3. Современные аспекты терапии гонококковой инфекции Васильев М.М., Дмитриев Г.А., Газарян И.Ю. Вестник Дермат. 1996 №3

4. Болезни, передаваемые половым путем: уроки прошлого и взгляд в будущее Аковбян В.А., Прохоренков В.И. Вестник Дермат. 2005 №3

5. Заболевания, передаваемые половым путем Адаскевич В.П. Витебск

6. Интернет www.venerologia.ru, www.medlinks.ru.