Изучение энергии активации биологических процессов
ГОУВПО «Мордовский государственный университет Имени Н.П. Огарёва» ЛАБОРАТОРНЫЙ ПРАКТИКУМ ПО БИОФИЗИКЕ САРАНСК ИЗДАТЕЛЬСТВО МОРДОВСКОГО УНИВЕРСИТЕТА Лабораторный практикум по биофизике: Методические указания для студентов биологического факультета / Мордовский гос.ун-т; Сост. В.В. Ревин. - Саранск, 2010.
В методическом пособии дается описание лабораторных работ по основным разделам курса «Биофизика». Данное пособие рекомендовано для студентов биологического факультета специальностей «Биология», «Биоэкология», «Биохимия» и «Биотехнология». Печатается по решению редакционно-издательского Совета Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарёва. Составитель: доктор биологических наук Ревин Виктор Васильевич Предисловие В последние годы для решения как фундаментальных, так и прикладных задач отводится биофизике. Биофизика – это наука, изучающая физические и физико-химические процессы, протекающих в биологических системах на молекулярном, клеточном и организменном уровнях. Данная наука относительно молодая. Она возникла на стыке наук между физикой, химией и биологией. На сегодняшний день она оперирует различными методами исследований, к которым в свою очередь предъявляются высокие требования. Применение биофизических методов длжно предполагать сравнительно небольшое количество исследуемого биологического материала. Методы должны также обладать высокой чувствительностью и позволять проводить иследования в условиях, близких к естественным.
Лабораторная работа №1 Изучение энергии активации биологических процессов. Живой организм представляет собой открытую систему, которая постоянно обменивается с окружающей средой веществом и энергией. Вещества, попадающие в организм извне, вступают в сложный процесс физико-химических превращений. В скорость их в отдельных органоидах, клетках и в целом организме играет решающую роль в регулировании жизненного процесса. В связи с этим важное значение приобретает изучение закономерностей протекания в организме химических реакций. Биологическая кинетика изучает скорость биологических процессов и ее зависимость от концентрации веществ, участвующих в биологических превращениях, а также от внешних условий, в частности от температуры. Такая зависимость понятна, если учесть, что любое химическое превращение, происходит при условии соударения молекул, находящихся в беспорядочном тепловом движении. По мере повышения температуры увеличивается длина пробега молекул и, следовательно, вероятность их столкновения друг с другом. Таким образом, относительное количество молекул, с повышением температуры увеличивается, как и скорость реакции. Величину, показывающую, во сколько раз возрастает количество активных молекул (а следовательно, и скорость реакции) при повышении температуры на 100С, называют температурным коэффициентом и обозначают символом Q10 (коэффициент Вант-Гоффа). Между величиной температурного коэффициента реакции Q10 и той избыточной энергией, которой должны обладать молекулы, чтобы их соударение привело к химической реакции (как называемой энергией активации Е), существует зависимость, которую выражают формулой
Е=0,46•Т1Т2lgQ10, (1.1)
где Е – энергия активации, кДж; Т1 и Т2 – температуры, выраженные в градусах абсолютной шкалы с разницей в 100С (Т2= Т1+10); lgQ10 – десятичный логарифм температурного коэффициента (Т0К=t0С+2730). Приведенной формулой пользуются для определения энергии активации биологических процессов, в том числе секреции желез, пульсации сократительных вакуолей простейших, сокращения мышц и т.д. Для вычисления энергии активации какого-либо биологического процесса необходимо: 1) определить его скорость при двух температурах - Т1 и Т2; 2) найти величину Q10, разделив значение скорости, полученное при Т2, на число, полученное при Т1; 3) найти по таблице логарифмов десятичный логарифм Q10 и подставить в формулу (1.1) значение в градусах абсолютной шкалы. Энергия активации рассчитывается не только для отдельных реакций и процессов, но и для клеточного и органоидного уровня. В связи с этим проведем расчет энергии активации мембраносвязанного фермента Na-,K-АТФ-азы (молекулярный уровень) и интенсивности сердцебиения лягушки при разных температурах (органоидный уровень).
Упражнение I. Влияние температуры на ферментативную активность Na-, К-АТФ-аза. Принцип метода.При работе Na-, К-АТФ-аза от молекулы АТФ отщепляется одна молекула неорганического фомфора и остается одна молекула АДФ. По нарастанию неорганического фосфора и остается одна молекула АТФ. По нарастанию неорганического фосфора и инкубационной среде судят об активности АТФ-азы:
АТФ → АДФ + Рн.
Цель работы. Установить зависимость скорости образования неорганического фосфора от температуры. Рассчитать коэффициент Вант-Гоффа и энергию активации. Приборы: 1. Фотоэлектроколориметр (ФЭК), 2. Ультратермостат, 3. Аналитические весы, разновесы.
Посуда: 1. Чашки Петри 2. Стеклянные пробирки объемом 10 мл 3. Пипетки на 1 и 2 мл 4. фарфоровая чашка с пестиком.
Реактивы и материалы: 1. Фильтровальная бумага (синяя лента), 2. 18 мМ раствор АТФ, 3. 6,6% раствор молибденовокислого аммония, 4. 20% ТХУ (трихлоруксусная кислота), 5. 2,5% раствор FeSO4, 6. 7,5 Н раствор H2SO4, 7. 0,05 М трис-HCl с 7,5, 8. 18 мМ раствор MgCl2, 9. 5,4 мМ NaCl, 10. 18 мМ раствор KCl, 11. ножницы. Ход работы: Перед началом опыта необходимо включить термостат (положение HI), предварительно поставив регулятор контактного термометра на 300С. Работу нужно начинать только при достижении в термостате заданной температуры. Опыты состоят из 2 серий: 1) контроль и опыт при температуре инкубации 200С (комнатная температура); 2) контроль и опыт при температуре инкубации гомогената 300С. Для определения активности фермента берут 50 мг живой ткани (сердце, почка, нерв, мозг), растирают его в фарфоровой ступке с 3 мл трис-HCl буфера (рН 7,5). Полученный гомогенат доводят трис-HCl до конечного объема – 10 мл. После этого отбирают пипеткой 1 мл полученного гомогената и переносят его в пробирку, добавляют 4 мл инкубационной смеси. Инкубационная смесь состоит из 1 мл 0,05 М трис-HCl, 18 мМ раствор MgCl2, 1 мл 18 мМ раствор KCl, 1 мл 5,4 мМ NaCl, рН полученного раствора – 7,5. Затем пробирки первой серии выдерживают при 200С 1 мин. После этого в каждую пробирку добавляют по 1 мл 18 мМ раствора АТФ, в контрольную пробу до добавления АТФ вносят 1 мл 20% раствора ТХУ для инактивации фермента. После 5-минутной инкубации при 200С реакцию прекращают добавлением 1 мл 20% раствора ТХУ (в контрольную пробу ТХУ второй раз не добавляют). Для дальнейшего анализа берут в пробирки по 1 мл исследуемого раствора (контрольный и опытный) и добавляют туда же 2 мл 7,5 н H2SO4, 2 мл 6,6% молибденовокислого аммония и 2 мл 2,5% раствора FeSO4 (свежеприготовленного). Аналогичный опыт проводят при температуре 300С. Активность фермента определяют по калибровочной кривой в зависимости от величины оптической плотности КН2РО4 и концентрации раствора. Зная оптическую плотность исследуемого раствора, по калибровочной кривой нужно найти концентрацию неорганического фосфора в исследуемых растворах. Определить температурный коэффициент Вант-Гоффа и рассчитать энергию активации.
Популярное: Модели организации как закрытой, открытой, частично открытой системы: Закрытая система имеет жесткие фиксированные границы, ее действия относительно независимы... Как построить свою речь (словесное оформление):
При подготовке публичного выступления перед оратором возникает вопрос, как лучше словесно оформить свою... Почему двоичная система счисления так распространена?: Каждая цифра должна быть как-то представлена на физическом носителе... Генезис конфликтологии как науки в древней Греции: Для уяснения предыстории конфликтологии существенное значение имеет обращение к античной... ©2015-2024 megaobuchalka.ru Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. (878)
|
Почему 1285321 студент выбрали МегаОбучалку... Система поиска информации Мобильная версия сайта Удобная навигация Нет шокирующей рекламы |