ИЗОЛИРОВАНИЕ ПОДКИСЛЕННОЙ ВОДОЙ

Метод изолирования подкисленной водой, предложенный Драгендорфом. Одним из описанных в литературе методов изолировании, главным образом алкалоидов, является метод Драгендорфа. Идея изолирования подкисленной водой высказывалась и до него рядом авторов, например Грэмом.

По методу Драгендорфа алкалоиды и некоторые вещества неалкалоидного характера 2—3 раза извлекали при температуре 40—50" водой, содержащей серную кислоту. Водные вытяжки упаривали до сиропообразной консистенции, настаивали с 3—4-кратным объемом 96° спирта в течение 24 часов при температуре 30° и фильтровали. Фильтр с целью очистки обрабатывали петролейным эфиром, а затем последовательно экстрагировали бензином, хлоро­формом и снова петролейным эфиром. После извлечений из кислого рас­твора водную жидкость подщелачивали раствором аммиака и снова после­довательно экстрагировали бензином и амиловым спиртом. Метод имел огра­ниченное применение, так как он обладал рядом недостатков, главным из которых являлись упаривание сернокислой вытяжки на водяной бане до сиро­пообразной консистенции и применение нескольких органических раствори­телей. Эти операции могли привести к значительным потерям ряда алка­лоидов.

Современная модификация метода извлечения подкисленной водой. В 1942 г. М. Д. Швайкова и А. В. Степанов для изолиро­вания алкалоидов из объектов растительного происхождения предложили так называемый скоростной метод извлечения алкалоидов. В 1947 г. этот метод был применен А. А. Васильевой с целью изолирования алкалоидов из свежих внутренних орга­нов трупа, а затем вошел в практику лабораторий.

В 1956—1961 гг. проф. В. Ф. Крамаренко и его сотрудники своими исследованиями показали необходимость учета рН среды как в процессе изолирования алкалоидов из биологического ма­териала, так и при экстрагировании их органическими раствори­телями из водных вытяжек (стр. 126). При учете этих данных исследование объектов растительного происхождения (мука, хлеб, крупа и т. д.) на наличие в них алкалоидов производится следующим образом: 5 г исследуемого объекта тщательно сме­шивают с 60 мл дистиллированной воды1, подкисленной насы­щенным водным раствором винной (или щавелевой) кислоты до рН 2,0—2,5 (по универсальному индикатору), и оставляют при комнатной температуре на 2 часа. Периодически смесь взбалты­вают. Водный слой сливают декантацией и подвергают центри­фугированию 30 минут при 3000 оборотов в минуту. Прозрачную жидкость переносят в делительную воронку и трижды новыми порциями (по 15—20 мл) осторожно, чтобы избежать образования эмульсии, экстрагируют хлороформом. Для разделе­ния эмульсия (в случае ее образования) пользуются центрифугированием. Хлороформную вытяжку исследуют на группу ве­ществ, экстрагируемых из кислого раствора, а также и некото­рые алкалоиды и вещества, обладающие слабо основными свой­ствами (кофеин, стрихнин, бруцин).

Водный остаток подщелачивают раствором аммиака до рН 10 по универсальному индикатору и вновь 3—4 раза, соблюдая осторожность, экстрагируют небольшими порциями (по 15— 20 мл) хлороформа. Хлороформные извлечения, слитые вместе, по удалении хлороформа исследуют на наличие алкалоидов и других веществ основного характера.

При исследовании на наличие алкалоидов соли, сахара и т. п. задача значительно упрощается. Такие продукты растворяют в воде, подкисляют винной (щавелевой) кислотой до кислой реак­ции (рН 2—2,5) и повторно экстрагируют хлороформом из кис­лого раствора, а затем из раствора подщелоченного аммиаком до рН 10. Хлороформные вытяжки исследуют на наличие ве­ществ, экстрагируемых хлороформом из кислого и щелочного растворов.

При исследовании внутренних органов трупов (печень, желу­док и т. п.) на наличие алкалоидов и других органических ве­ществ поступают следующим образом: 100 г тщательно измель­ченного материала заливают 200 мл дистиллированной воды (со­отношение объекта и воды 1:2), подкисленной до рН 2,0—2,5 насыщенным водным раствором винной или щавелевой кислоты, и оставляют на 2 часа при периодическом взбалтывании. Водное извлечение сливают с твердых частиц объекта, а последние еще раз настаивают, примерно час с водой, подкисленной винной или щавелевой кислотой до рН 2,5. Водную вытяжку процеживают через двойной слой марли. Объединенные извлечения центрифу­гируют. Прозрачную жидкость повторно экстрагируют хлоро­формом из кислого раствора (3—4 раза по 15—20 мл хлорофор­ма), а затем из щелочного (3—4 раза). Подщелачивание до рН 10 производят 25% раствором аммиака, проверяя реакцию среды по универсальному индикатору.

Соединенные вместе хлороформные вытяжки из кислого рас­твора исследуют на вещества, изолируемые из кислых растворов, а хлороформные вытяжки из щелочного раствора — на алкалои­ды и синтетические вещества основного характера.

Достоинства и недостатки метода изолирова­ния подкисленной водой. Метод изолирования алкалои­дов и других органических веществ, имеющих токсикологическое значение, подкисленной водой обладает рядом преимуществ пе­ред методом извлечения подкисленным спиртом. Наиболее важные из них следующие.

1.Ускорение времени производства анализа в 3—4 раза.

2. Более высокая чувствительность по отношению к ряду ор­ганических веществ: стрихнину, бруцину, кониину, колхицину, дикаину, ареколину и другим соединениям. Повышение чувствительности в основном связано с меньшим количеством операций, возможно, и с отсутствием нагревания.

3. Метод не требует затраты чистого этилового спирта. Недостаток метода заключается в трудности использования его для исследования на органические вещества, трудно раство­римые в воде, а иногда также при исследовании сильно загнив­шего трупного материала.

Кроме описанных методов изолирования алкалоидов, при хи­мико-токсикологических исследованиях иногда для отдельных алкалоидов (ареколин, никотин, кониин) рекомендуется дистил­ляция с водяным паром с последующим экстрагированием алка­лоида из дистиллята соответствующим органическим раствори­телем.

Все описанные методы изолирования алкалоидов не гаранти­руют, однако, получения настолько чистого вещества, чтобы оно могло быть обнаружено и определено в дальнейшем обычными аналитическими реакциями и методами. Как правило, алкалоид или другое вещество основного характера, представляющее токсикологический интерес, изолируется из объектов исследования вместе с жирами, жирными кислотами, белками и продуктами их распада (смолы, красящие вещества и т. п.), маскирующими это вещество и мешающими его обнаружению и определению. Особое значение при этом приобретает очистка изолированных из биологического материала (трупный материал) алкалоидов.