Методы лабораторной диагностики

105. Методы лабораторной диагностики клещевых боррелиозов можно условно подразделить на две группы:

1) Методы, направленные на прямую детекцию возбудителя, его антигенов или ДНК;

2) Методы, направленные на обнаружение антител к B.burgdorferi sensu lato.

106. Культуральный метод . Боррелии могут быть выделены in vitro методом культивирования в жидкой питательной среде BSK II (модифицированная среда Barbour-Stoenner-Kelly). В качестве клинического материала для посевов служат пораженные ткани (биоптаты кожи из краевой зоны кольцевидной МЭ, из доброкачественной лимфоцитомы кожи и хронического атрофического акродерматита) и биологические жидкости больного (кровь, спинномозговая и внутрисуставная жидкости).

107. Так как количество спирохет в тканях и жидкостях организма незначительно, то эффективность выделения боррелий варьирует в пределах 6–45%. В 5–10% случаев боррелии выделяют из цереброспинальной жидкости, из крови – менее 4%.

108. Эффективность высевов зависит от стадии заболевания. Культуральный метод, хотя и считается «золотым стандартом», но не имеет широкого применения в виду его длительности (от 3–4 до 10 недель), дороговизны и недостаточной эффективности.

109. Прямая микроскопия.При микроскопическом исследовании в качестве клинического материала используют кровь, спинномозговую и внутрисуставную жидкость, биопсийный материал, клещевой гомогенизат.

110. Результаты световой микроскопии субъективны и противоречивы, так как в процессе фиксации и окрашивания препарата боррелии теряют четкость морфологической структуры, что приводит к сложностям дифференциации боррелий с артефактами и непатогенными спирохетами.

111. В некоторых случаях для детекции боррелий используют иммуногистохимический метод диагностики или электронную микроскопию. Следует учитывать, что количество боррелий в большинстве клинических образцов очень небольшое, поэтому иногда применяют предварительное концентрирование боррелий с помощью центрифугирования. В любом случае отрицательный результат микроскопического исследования не исключает заболевания человека.

Приготовление и просмотр витальных препаратов

Из клещей в темном поле микроскопа

112. Необходимое оборудование: микроскоп с темнопольным конденсором ОИ-13 и препаратоводителем типа СТ-12, осветитель ОИ-19 или другой системы, чистые обезжиренные предметные стекла толщиной не более 1,2 мм, покровные стекла 18x18 мм, заточенные препаровальные иглы. Оптимальна сухая система с общим увеличением x600 (объектив - x40; бинокулярная насадка АУ-12 - x1,5; окуляры - x10).

113. Для приготовления препарата из взрослого клеща на предметное стекло наносят каплю физиологического раствора объемом 20 мкл, в которую помещают исследуемую особь. Придерживая клеща одной препаровальной иглой, второй надо сделать 5-6 надрезов идиосомы и слегка надавить на нее так, чтобы в физиологический раствор вытекло небольшое количество бурого по цвету материала. Этот материал, состоящий преимущественно из обрывков эпителия дивертикул средней кишки и элементов ее содержимого, круговым перемещением остатков исследуемого клеща равномерно распределяют по площади 0,7-0,8 кв. см. Затем каплю перекрывают покровным стеклом. Такой препарат начинает подсыхать через 10-15 мин., поэтому его просмотр следует начинать немедленно после приготовления. При необходимости некоторое время он может быть сохранен во влажной камере.

114. Для просмотра препарата освещение устанавливают так, чтобы при закрытой диафрагме осветителя на наложенном на зеркало микроскопа листе бумаги можно было четко видеть изображение нити спирали лампы, что достигается передвижением патрона с ней в кожухе осветителя. После установки света открывают диафрагму осветителя, на верхнюю линзу конденсора наносят капли дистиллированной воды и помещают препарат на предметный столик микроскопа. Далее, используя объектив с небольшим увеличением (x8-x9), поднимая и опуская конденсор, следует добиться появления в поле зрения светлого пятна, которое с помощью зеркала и регулировочных винтов конденсора выводят на середину поля. Установив объектив x40, переходят к просмотру. Поля зрения просматривают параллельными рядами так, чтобы вся площадь препарата могла быть обследована равномерно. Для этого делают соответствующие интервалы между полями зрения в одном ряду, а также между соседними рядами.

115. В препаратах из сильно инфицированных клещей боррелий обычно удается обнаружить в самом начале просмотра. Но так как среди зараженных переносчиков, как правило, преобладают слабо инфицированные особи, то выявление спирохет часто требует большего объема работы.

116. Норма просмотра, при которой препарат может считаться отрицательным, составляет не менее 200-250 полей зрения. Аналогичным образом можно вести и исследование нимф. При этом объем капли физиологического раствора, в которой иссекают клеща, должен быть значительно меньше (не более 5 мкл).

117.