М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Применение реакции агглютинации в серодиагностике.

РАс целью серодиагностики брюшного тифа (реакция Видаля).

Реакция агглютинации по Видалю с целью серодиагностики брюшного тифа

Для постановки реакции берут:

1) сыворотку исследуемого больного для определения в ней
антител;

2) О - и Н-диагноста кумы бактерий брюшного тифа, паратифа А и паратифа В;

3) физиологический раствор.

Кровь для получения сыворотки берут в количестве—15—20 капель путем укола мякоти пальца или 2 —3 мл при помощи венепункции.

Дают крови свернуться в термостате в течение 30—60 минут, затем простерилизованной петлей обводят сгусток, отделяя его от стенки пробирки, и дают отстояться сыворотке на холоду до образования над сгустком прозрачного слоя. Сыворотку помещают пипеткой в отдельную пробирку. Первое разведение (1:50) делают при помощи пипетки—0,1 мл сыворотки + 4,9 мл физио­логического раствора. Дальнейшие разведения (1:100— 1:200 — 1 : 400—1:800) готовят по обычной схеме.

Берут 6 рядов пробирок по 6 пробирок в каждом. По 1 мл сыворотки разведения 1: 100 наливают в первую пробирку каждого ряда, 1: 200 — во вторую, 1 : 400 — в третью и т. д.; в шестую, контрольную, пробирку наливают 1 мл физиологического раствора.

Во все пробирки первого ряда добавляют по 1—2 капли брюшнотифозного Н-диагностикума; в пробирки второго ряда — брюшнотифозный 0-диагностикум; в пробирки третьего я четвертого ряда добавляют А-паратифозный, Н - и 0-диагностикумы, а в 5-й и 6-й ряд— В-паратифозный H - и 0-диагностикум. Пробирки ставят в термостат на 2 часа, отмечают результат реакции, затем оставляют при комнатной температуре на сутки; после этого срока дают заключение об окончательном результате реакции.

Возбудителем заболевания считается тот микроб, который агглютинируется сывороткой больного. Реакция считается положителыной, если агглютинация произошла хотя бы в первой пробирке с разведением 1: 100; обычно она наступает в больших разведениях. Если происходит групповая агглютинация с двумя или с тремя антигенами, то за возбудителя болезни принимается тот микроб, с которым произошла агглютинация в наиболее высоком разведении сыворотки.

Нагрузочные реакции

РНГА с Vi-эритроцитарным диагиостикумом

Тип реакции - реакция непрямой гемагглютинации.

Исследуемый материал - сыворотка крови обследуемого.

Диагностический препарат - Vi-эритроцитарный диагностикум (взвесь в физиологическом растворе эритроцитов барана с нагруженными на них Vi - антигенами S.typhi ).

Принцип реакции: к разведениям сыворотки обследуемого добавляют Vi-эритроцитарный диагностикум.

Положительный результат – гемагглютинат ("зонтик"); отрицательный результат - плотный осадок эритроцитов на дне лунки ("пуговка").

Диагностический тигр реакции 1/ 40.

Применение: отбор лиц, имеющих титр антител к Vi – антигенам S.typhi выше диагностического.

Трактовка результатов: лица с положительной реакцией в титре выше, чем 1/40 считаются подозрительными на бактерионосительство S.typhi и подлежат бактериологическому обследованию на наличие S.typhi в кале, моче и желчи.

Контрольные вопросы:

1.Каков механизм иммунологической толерантности?

2. Какими свойствами обладают толерогены?

3.Что изучает трансплантология?

4.Какие виды антител Вы знаете?

5.Что такое серодиагностика?

6.Каков механизм реакции развернутой агглютинации.

 

Список литературы:

Обязательная:

1. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А.,Сидорович И.Г. Иммунология:Учебник.—М.:Медицина,2000.— 432 с : ил.(Учеб. лит. для студ. медвузов).

2. Ковальчук Л.В и др. Иммунология: практикум: учеб. пособие – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. – 176 с.

3. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2001. – 768 с.

4. Борисов Л.Б. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М. 1997 г.

 

Дополнительная:

1. Генкель П.А., Микробиология с основами вирусологии. М.,1974 г.

2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для мед. вузов.- 3-е издание, испр. и доп. – СПб, СпецЛит. 2002. – 591 с.

3. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., Медицина. 1994 г.

4. Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. Микробиология. М. 1983 г.

Тема№5 ИММУНИТЕТ: ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ФАКТОРОВ ИММУНИТЕТА И НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ПРИ ИНФЕКЦИЯХ РАЗЛИЧНОЙ ЭТИОЛОГИИ. ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЙ ИММУНИТЕТ. КОМПЛЕМЕНЗАВИСИМЫЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ

Цель: Познакомиться с особенностями взаимодействие факторов иммунитета и неспецифической резистентности при инфекциях различной этиологии. Изучить механизмы противоопухолевого иммунитета. Научиться учитывать результаты реакции иммунного гемолиза и РСК и интерпретиро­вать их результаты

 

Основные вопросы, разбираемые на занятии:

1. Особенности взаимодействие факторов иммунитета и неспецифической резистентности при инфекциях различной этиологии

2. Противоопухолевый иммунитет, его значение.

3. Реакции с участием комплемента (реакции иммунного бактериолизиса, иммунного ге­молиза, РСК).

4. Получение препаратов: комплемент, гемолитическая сыворотка.

5. Определение периода болезни с помощью серодиагностики (раздельное определение IgM, IgG).

План

Программа

1.Взаимодействие факторов иммунитета и неспецифической резистентности при инфекциях различной этиологии

2. Противоопухолевый иммунитет

3. Комплементзависимые серологические реакции

Демонстрации.

1. Таблицы и схемы, иллюстрирующие иммунный ответ при различных инфекциях.

2. Результаты РСК

Задание студентам

1. Зарисовать схему иммунного ответа при бактериальных инфекциях

2.Зарисовать схему иммунного ответа при вирусных инфекциях

3. Зарисовать схему иммунного ответа при протозойных инвазиях

4. Зарисовать схему иммунного ответа при глистных инвазиях

5. Зарисовать схему иммунного ответа при микозах

6. Учесть результаты РСК