Эталон ответа к задаче №3

Задания

 

1. Назовите источники аналитических ошибок при определении активности ферментов.

2. Расскажите особенности подготовки биологического материала для ферментативных исследований.

3. Объясните, какие действия должен предпринять лаборант в случае с гемолизированной сывороткой.

4. Расскажите принцип метода Райтмана - Френкеля определения АЛТ по конечной точке.

 

Эталон ответа к задаче № 1

 

1. Для получения надежных результатов при исследовании ферментов требуется правильно проводить взятие крови и получение сыворотки (плазмы); соблюдать, чтобы рН буферного раствора, концентрация субстратов и коферментов, температура в ходе инкубации были оптимальными; строго соблюдать время проведения реакции; нельзя использовать просроченные реактивы. Несоблюдение перечисленных параметров является источником грубых аналитических ошибок. Гемолизированную сыворотку использовать для определения активности ферментов нельзя, т.к. следы гемолиза влияют на результаты исследования в связи с дополнительным выбросом ферментов из эритроцитов.

2. При работе с ферментами сыворотку необходимо как можно быстрее отделить от эритроцитов, избегать нагревания, повторного замораживания и оттаивания, исследовать не откладывая. Взятие крови для исследования ферментов нужно проводить натощак. Лекарственные препараты, принятые больными, влияют на активность ферментов.

3. В регистрационном журнале лаборант должен записать, что «сыворотка гемолизированная, анализ надо повторить» и сообщить в отделение, откуда доставлен биоматериал.

4. При каталитическом действии АЛТ в результате реакции переаминирования аланин превращается в пировиноградную кислоту (ПВК). При добавлении к ПВК 2,4-ДНФГ (динитрофенилгидразина) реакция останавливается и образуется гидразон пировиноградной кислоты, который в щелочной среде даёт коричневое окрашивание. Интенсивность окраски прямо пропорциональна активности АЛТ.

Задача № 2

 

У обследуемого пациента после проведения глюкозо - толерантного теста получены следующие показатели глюкозы в сыворотке:

натощак- 6,8 ммоль/л,

через 1час после сахарной нагрузки- 12,9 ммоль/л,

через 2часа после сахарной нагрузки- 11,2 ммоль/л,

через 3 часа после сахарной нагрузки- 10,1 ммоль/л.

 

Задания

 

1. Оцените результаты и сделайте заключение о толерантности к глюкозе у обследуемого пациента.

2. Расскажите алгоритм проведения глюкозо - толерантного теста (ГТТ).

3. Почему при проведении сахарной нагрузки необходимо неоднократно измерять содержание глюкозы?

4. Назовите противопоказания для проведения ГТТ.

 

Эталон ответа к задаче № 2

 

1. У обследуемого пациента толерантность к глюкозе снижена.

2. ГТТ проводится следующим образом: у обследуемого натощак берут кровь из пальца и определяют в ней концентрацию глюкозы, затем пациенту дают выпить раствор глюкозы (50-75 г. глюкозы в зависимости от массы тела на 250 мл H₂O).Через каждый час в течение 3-х часов определяют концентрацию глюкозы в крови. По полученным данным строят гликемическую кривую: проводят оси координат, откладывают на оси Y – концентрацию глюкозы, на оси Х – время взятия крови, находят точки пересечения и соединяют полученные точки.

3. Неоднократное измерение глюкозы необходимо для того, чтобы знать быстроту, высоту подъёма, продолжительность гипергликемии и характер её снижения в ответ на введённую глюкозу. Замедленное возвращение глюкозы к исходному уровню показывает, что нарушена секреция инсулина в ответ на введённую глюкозу.

4. Умеренная гипергликемия натощак, сахарный диабет. При панкреатите раствор глюкозы вводят внутривенно.

Задача №3

 

В аналитической характеристике к набору для определения общего белка биуретовым методом указано, что линейность метода сохраняется до 120 г/л. На калибровочном графике это соответствует экстинции - 0,397. Экстинция одной из опытных проб составила – 0,418.

 

Задания

 

1. Назовите действия, которые надо предпринять в данной ситуации, чтобы определить содержание общего белка.

2. Расскажите алгоритм построения калибровочного графика для определения общего белка.

3. Объясните, как можно рассчитать концентрацию общего белка без калибровочного графика?

4. Расскажите принцип определения общего белка биуретовым методом.

 

Эталон ответа к задаче №3

 

1. При более высокой величине экстинкции сыворотку следует развести 0,9% NaCl в 2 раза, исследование повторить, а результат умножить на степень разведения.

2. Из основного стандартного раствора белка делают разведения и получают несколько стандартных растворов разной концентрации. С каждым стандартом проводят биуретовую реакцию, затем определяют оптическую плотность каждого раствора. По полученным данным строится график. Калибровочный график строится на миллиметровой бумаге. Масштаб выбирается так, чтобы график проходил под углом в 45 градусов. Проводятся оси координат. На оси абсцисс откладываются известные концентрации стандартных растворов, а на оси ординат -соответствующие им значения оптической плотности. Через точки пересечения проводят прямую линию. Составляют калибровочную таблицу или рассчитывают калибровочный коэффициент.

3. Содержание аналита можно определить по стандартной пробе. Стандартную пробу обрабатывают параллельно опытной. Концентрацию общего белка в опытной пробе рассчитывают по формуле:

С_опыта = (Е_опыта : Е_станд.) • С_станд.

4. Общий белок с сульфатом меди в щелочной среде даёт сине-фиолетовое окрашивание, интенсивность которого прямо пропорциональна содержанию общего белка.

Задача № 4

Лаборант определял общий билирубин и его фракции в сыворотке крови методом Йендрашика. Все пробы колориметрировал одновременно после 20 минутной экспозиции, что привело к грубой аналитической ошибке и искажению результатов.

 

Задания

 

1. Назовите причину, которая привела к искажению результата?

2. Расскажите принцип определения общего билирубина и его фракций методом Йендрашика.

3. Назовите нормальное процентное соотношение обеих фракций билирубина в плазме (сыворотке).

4. Дайте общую характеристику билирубина.