Иммуно-серологические методы исследования
Кокцидиоидомикоз Для проведения иммунодиагностических исследований используют МФА, РНГА, РИД, РЛА, РСК и ИФА. Метод флуоресцирующих антител является одним из наиболее чувствительных и достоверных методов обнаружения возбудителей особо опасных микозов в различных объектах исследования. С помощью МФА предварительный ответ может быть получен в течение 1-2 час от начала исследований нативного материала. Для постановки МФА используются «Иммуноглобулины флуоресцирующие кокцидиоидные сухие», приготовленные на основе антител кроличьих сывороток против артроконидий (артроспор) Coccidioides. Они обладают группоспецифическими свойствами, взаимодействуя с возбудителями кокцидиоидомикоза, гистоплазмоза, бластомикоза и паракокцидиоидомикоза. Чувствительность МФА – 1х105 клеток/мл по ОСО мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Исследование материала проводится согласно инструкции по применению препарата. Для обнаружения антигенов Coccidioides spp . используют РНГА с эритроцитарным диагностикумом («Диагностикум эритроцитарный кокцидиоидозный иммуноглобулиновый сухой»). Диагностикум представляет собой формализированные танизированные эритроциты, нагруженные иммуноглобулинами М противококцидиоидных сывороток. Препарат предназначен для обнаружения артроспор Coccidioides в пробах из объектов внешней среды. Чувствительность РНГА составляет 1x104 - 1x105 кл/мл по подсчету в камере Горяева или 5х106 – 5х107 кл/мл по ОСО мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Исследование материала проводится согласно инструкции по применению. Самым простым и доступным методом определения антител (IgM и IgG) считается РИД. Преимущество РИД состоит в том, что по характеру линий преципитата можно выявить специфические системы антиген-антитело. Однако ее чувствительность невысока – 73%, по сравнению с РСК (75%) и ИФА (87%), к тому же постановка РИД требует длительного периода инкубации – до 4 дней. РЛА и ИФА являются наиболее чувствительными методами, но возможны ложноположительные результаты, которые должны подтверждаться с помощью РИД. РСК и ИФА, отличающиеся значительной трудоемкостью, находят ограниченное применение в практических лабораториях. Тем не менее, ИФА обладает наибольшей чувствительностью, особенно в период ранней инфекции, в то время как использование РСК и РИД предпочтительно в более поздний период развития кокцидиоидомикоза. Прогнозировать развитие инфекции позволяют количественные тесты, в первую очередь РСК, с помощью которой определяют уровень IgG. Нарастание количества IgG или титры IgG 1:32 и выше указывают на активность инфекционного процесса и возможность развития диссеминированной формы кокцидиоидомикоза. Однако IgG могут отсутствовать у иммунокомпрометированных пациентов, таких как больные СПИД, сахарным диабетом или больные, получающие иммуносупрессивную терапию. Кроме того, существующие коммерческие тест-системы могут существенно отличаться по чувствительности и специфичности. В связи с этим результаты серологических исследований требуют подтверждения другими методами лабораторной диагностики, и, в первую очередь, культуральным. Для диагностики кокцидиоидомикоза имеются зарубежные коммерческие тест-системы: - тест-система для выявления антикокцидиоидных антител путем агглютинации частиц латекса (Coccidioides latex agglutination system) и реакции иммунодифузии (Meridian, Bioscience, Inc., USA). - тест-система для количественного определения IgM и IgG-антител к кокцидиоидным антигенам (TP, СF) в твердофазном иммуноферментном анализе (Premier™ Coccidioides EIA, Meridian, Bioscience, Inc., USA). -тест-система определения методом двойной иммунодиффузии сывороточных антител к микромицетам рода Coccidioides (Hyland– Coccidioidomycosis immunodiffusion test). Гистоплазмоз Для диагностики гистоплазмоза широко используются такие методы как МФА, РСК, РИД, ТИФА и иммуноблотинг. В качестве антигенов в серологических тестах обычно используют гистоплазмин или компоненты, выделенные из культурального фильтрата мицелиальной фазы, а также целые дрожжевые клетки. Существующие трудности интерпретации результатов серологических тестов связаны с наличием общих антигенов Н. capsulatum, В. dermatitidis и Coccidioides spp . В настоящее время имеется коммерческая тест-система для выявления преципитирующих антител при гистоплазмозе - HP-test latex histoplasmin reagent (HP-test, «Hyland»). Для диагностики гистоплазмоза используют реакцию преципитации в агаре. Преципитины появляются в начале болезни, на 2-3 неделе, сохраняются 4-6 недель. В качестве антигена в реакции преципитации обычно применяют гистоплазмин или его фракции. Для идентификации полос преципитации необходим контроль с заведомо положительной референс-сывороткой. Обнаружение линий преципитации к двум важным диагностическим антигенам H. capsulatum – H и М, один из наиболее широко доступных методов для диагностики. Специфичность этого теста составляет 70 - 100 %. Реакция связывания комплемента (РСК) является более чувствительной, чем реакция преципитации (70 - 90 %), но менее специфичной (70 - 80 %). В качестве антигенов в данной реакции можно использовать как цельные клетки дрожжевой фазы, так и гистоплазмин. Следует отметить, что при использовании любых антигенов они дают перекрестные реакции с сыворотками от больных другими микозами (бластомикоз, кандидоз, кокцидиоидомикоз, паракокцидиоидомикоз). Антитела появляются на 3-6 неделях после инфицирования H. сapsulatum у 95 % пациентов с диагнозом гистоплазмоза, и повторные тесты дают положительные результаты в течение многих месяцев. Титры между 1:8 и 1:16 считаются слабоположительными и определяются в почти в 25 % случаев. Однако эти титры антител могут свидетельствовать о прошедшей инфекции или обнаруживаться в сыворотках здоровых людей из эндемичных по гистоплазмозу регионов. Высокие титры (1:32 и больше) или четырехкратное увеличение титра в течение времени – показатель острого гистоплазмоза. При постановке ИФА используют различные антигенные препараты (гистоплазмин, экстракт дрожжевых клеток). Чувствительность составляет 45% - 100% в зависимости от длительности заболевания. Методы, основанные на обнаружении антигенов, в ряде случаев могут быть более эффективными, чем выявление антител (при диагностировании гистоплазмоза в острой фазе, при диссеминированном гистоплазмозе у пациентов с ВИЧ-инфекцией). Антигены можно обнаружить при исследовании крови, плевральной, бронхоальвеолярной и цереброспинальной жидкостей, в моче. Для обнаружения и идентификации антигенов H. capsulatum в мокроте и в тканях органов используют МФА и ИФА. Бластомикоз Для серологической диагностики бластомикоза используются РИД, РСК, а также различные варианты реакции РНГА и РЛА. Чувствительность РИД составляет 80%, тогда как РСК лишь 50%. Для идентификации полос преципитации необходим контроль с заведомо положительной референс-сывороткой. Тем не менее, отрицательный результат обеих реакций не исключает диагноз бластомикоза. Широко используется в различных иммунологических реакциях референс-сыворотка, приготовленная на основе видоспецифического, так называемого А-антигена. Очищенный А-антиген состоит из 5 больших гликопротеиновых комплексов. Из этих компонентов только 2 связаны с А-антигенной активностью возбудителя бластомикоза. РИД с А-антигеном в настоящее время применяют как для идентификации культур возбудителя бластомикоза, так и для обнаружения антител в сыворотках больных. Более точный диагноз может быть поставлен при сочетанном использовании РИД и РСК. Для иммунодиагностики бластомикоза используют различные модификации ИФА как с А-антигеном, так и антигенами дрожжевой фазы гриба. Для мечения антител применяют преимущественно щелочную фосфатазу, однако хорошие результаты получены и при метке уреазой. При сравнительной оценке чувствительности ИФА, РСК и РИД со взвесью дрожжевых клеток в качестве антигена показано, что чувствительность первого метода превосходила таковую РСК и РИД. Однако отмечено наличие у некоторых штаммов возбудителя бластомикоза антигенов, реагирующих перекрестно с сыворотками больных гистоплазмозом. В работах зарубежных исследователей показана перспективность использования антигенов клеточной стенки дрожжевой формы B. dermatittidis (BAD1 и α-(1,3)-глюкан) для разработки диагностических тест-систем. Паракокцидиоидомикоз Наиболее часто применяются РИД и иммуноэлектрофорез с различными антигенами мицелиальной или дрожжевой фаз. Для выявления антител у больных легочной формой может быть использован метод подавления твердофазного иммуноферментного анализа, основанный на выявлении молекул антигенов 43 кДа и 70 кДа в бронхоальвеолярном лаваже, а также дот-блот-анализ как альтернатива ИФА для выявления 27кДа рекомбинантного антигена.
Популярное: Как выбрать специалиста по управлению гостиницей: Понятно, что управление гостиницей невозможно без специальных знаний. Соответственно, важна квалификация... Почему стероиды повышают давление?: Основных причин три... Как вы ведете себя при стрессе?: Вы можете самостоятельно управлять стрессом! Каждый из нас имеет право и возможность уменьшить его воздействие на нас... ©2015-2024 megaobuchalka.ru Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. (235)
|
Почему 1285321 студент выбрали МегаОбучалку... Система поиска информации Мобильная версия сайта Удобная навигация Нет шокирующей рекламы |