Профилактика особо опасных микозов

Специфическая профилактика особо опасных микозов до сих пор не разработана.

Экстренная профилактика особо опасных микозов путем введения медикаментозных средств не применяется. Гуморальные антитела при микозах хотя и формируются, но защитной роли не играют.

Наиболее эффективными в эндемичных очагах глубоких микозов являются меры личной и общественной профилактики. Они связаны с возможностью предотвращения аэрогенного попадания грибов в организм. Для этого используются обычные респираторы.

Общественные меры профилактики (особенно при кокцидиоидомикозе) связаны с увлажнением почвы, асфальтированием площадок, примыкающих к жилищу и т.д. В эндемичных очагах гистоплазмоза рекомендуется ликвидация мест скопления птиц (особенно, скворцов).

Учитывая высокую опасность внутрилабораторных заражений возбудителями особо опасных микозов, при работе с ними предусмотрены меры безопасности, регламентированные санитарно-эпидемиологическими правилами СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».

Приложение 1

Питательные среды, применяемые для выделения и идентификации возбудителей особо опасных микозов

Агар Сабуро

- Пептон, сухой, ферментативный, для бактериологических целей, ГОСТ 13805-76 – 1,0 г

- D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 4,0 г

- Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%

- Дистиллированная вода, ГОСТ 6709-72 – до 100 мл

- Левомицетин (хлорамфеникол) – 0,005%

 

Агар Чапека

- D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 20,0 г

- Калий фосфорнокислый двузамещенный, 3-водный, чда,

ГОСТ 2493-75 – 1,0 г

- Натрий азотнокислый, хч, ГОСТ 4168-70 – 3,0 г

- Калий хлористый, хч, ГОСТ 4234-77 – 0,5 г

- Магний сернокислый, 7-водный, хч, ГОСТ 4523-77 – 0,5 г

- Железо (II) сернокислое, 7-водное, хч, ГОСТ 4148-78 – 0,015 г

- Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%

- Водопроводная вода – 1 л

Среда Фрэнсиса

- Мясной бульон – 1000 мл

- Дефибринированная кровь (кроличья или лошадиная) – 8%

- Пептон, сухой, ферментативный, для бактериологических целей, ГОСТ 13805-76 – 1%

- D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 1%

- Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77 – 0,5%

- L-Цистеин, ч, ТУ 6-09-3251-73 – 0,1%

- Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%

Среда применяется для выращивания дрожжевой фазы возбудителя гистоплазмоза из мицелиальной, реже для хранения музейных культур дрожжевой фазы возбудителя.

 

Сердечно-мозговой агар

- Вытяжка из говяжьего мозга – 20%

- Вытяжка из говяжьего сердца – 25%

- Пептон, сухой, ферментативный, для бактериологических целей, ГОСТ 13805-76 – 1%

- Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77 – 0,5%

- Натрий фосфорнокислый двузамещенный, чда,  ГОСТ 11773-76 – 0,25%

- D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 0,2%

- Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%

Среда применяется для культивирования дрожжевой фазы возбудителя гистоплазмоза.

 

Сахарный мясо-пептонный агар

- Агар пищевой, ГОСТ 16280-88 – 1,5%

- Мясной бульон – 100 мл

- Пептон, сухой, ферментативный, для бактериологических целей, ГОСТ 13805-76 – 1%

- Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77 – 0,5%

- D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 1%

Среда применяется для выращивания дрожжевой фазы возбудителей бластомикоза и паракокцидиоидомикоза.

Среда Курунга

- Крахмал (нерастворимый) – 1,0 г

- Желтки куриных яиц – 150 мл

- Белки куриных яиц – 50 мл

- Дистиллированная вода, ГОСТ 6709-72 – 100 мл

 Среда применяется для хранения дрожжевой фазы возбудителя гистоплазмоза.

Среда Конверса

- Дистиллированная вода, ГОСТ 6709-72 – 1 л

- Калий фосфорнокислый однозамещенный, хч, ГОСТ 4198-75 – 0,3 г

- Калий фосфорнокислый двузамещенный, 3-водный, чда,

ГОСТ 2493-75 – 0,4 г

- Магний сернокислый, 7-водный, хч, ГОСТ 4523-77 – 0,4 г

- Цинк сернокислый, 7-водный, чда, ГОСТ 4174-77 – 0,2 мл (1% р-р)

- Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77 – 1,4 мл (1% р-р)

- Кальций хлорид, 2-водный, ч, ТУ 6-09-5077-83 – 0,003 г

- Натрий углекислый кислый, хч, ГОСТ 4201-79 – 1 мл (1% р-р)

- Аммоний уксуснокислый, хч, ГОСТ 3117-78 – 1,23 г

- D(+)-Глюкоза, чда, ГОСТ 6038-74 – 10 г

Среда применяется для получения сферул возбудителя кокцидиоидомикоза.

Приложение 2

Приготовление рабочих растворов и реагентов

Для проведения ПЦР

2.1 Лизирующий буфер с 6 М гуанидинтиоцианатом (ЛБ) – на 50 мл: гуанидинтиоцианат Na – 35,4 г, растворяют в дистиллированной воде, добавляют 1 мл 0,5 раствора ЭДТА и доводят до 50 мл дистиллированной водой. К раствору гуанидинтиоцианата Na добавляют в сухом виде дитиотрейтол (ДТТ) до конечной концентрации 20мМ. На 50 мл раствора гуанидинтиоцианата Na необходимо взвесить 154 мг. Буфер хранят в полипропиленовой посуде при 4-10 ^оС до 6 месяцев.

2.2 Раствор 4 М гуанидинтиоцианата натрия – навеску гуанидинтиоцианата Na, равную 23,6 г растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раствора до 50 мл. Рекомендуется добавить ДТТ до конечной концентрации 20мМ.

  2.3 Раствор для первой отмывки 1 – к 1 мл раствора 1 М Трис-HCl, рН 8,5, добавить 1 мл 5 М раствора натрия хлорида, довести объем до 30 мл дистиллированной водой и добавить спирт этиловый 70 мл. Буфер хранят в полипропиленовой посуде при 4-10 ^оС – до 6 месяцев.

2.4 Суспензия сорбента(СС) – готовят 50 % (вес/объем) суспензию силикагеля (SiO₂) с размером частиц 0,5-10 мкм в деионизованной воде.

2.5 TE буфер рН 7,4: на 100 мл – 1М раствор Трис-HCl, рН 8,0 – 1 мл, 0,5 М раствор ЭДТА – 0,2 мл, деионизованная вода – до 100 мл. Буфер хранят в полипропиленовой посуде при 4-10 ^оС – до 6 месяцев.

2.6 0,5 М раствор ЭДТА, рН 8,0. 18,61 г соли помещают в химический стакан на 100 мл, добавляют 80 мл дистиллированной воды, интенсивно размешивают на магнитной мешалке и доводят рН до 8,0±0,1 с помощью натрия гидроокиси. Раствор хранят в темной полипропиленовой посуде при температуре (4±2) ^оС до 3 мес.

2.7 1 М раствор трис- HCl, рН 8,0±0,1. Навеску трис-(оксиметил)-аминометана – 6,5 г помещают в химический стакан на 50 мл, добавляют 25 мл дистиллированной воды. После полного растворения соли доводят дистиллированной водой до 50 мл и выставляют рН 8,0±0,1 с помощью концентрированной соляной кислоты. Раствор хранят при температуре (4±2) ^оС до 3 мес.

2.8 0,1 М раствор трис- HCl, рН 6,4±0,1. Навеску трис-(оксиметил)-аминометана – 1,21 г помещают в химический стакан на 100 мл, добавляют 50 мл дистиллированной воды. После полного растворения соли доводят дистиллированной водой до 100 мл. Доводят рН до 6,4±0,1 с помощью концентрированной соляной кислоты. Раствор хранят при температуре (4±2) ^оС до 3 мес.

2.9 5 М раствор натрия хлорида. Навеску натрия хлорида – 2,922 г помещают в химический стакан и добавляют 8 мл дистиллированной воды. Раствор хранят в стеклянной посуде при температуре (4±2) ^оС до 3 мес.

2.10 3 M раствор ацетата натрия. Навеску ацетата натрия 40,8 г помещают в химический стакан на 100 мл растворяют в 100 мл дистиллированной воды.

2.11 Фенол, забуференный Tris- HCl , pH 8,0. Перед употреблением перегнанный фенол достать из холодильника, выдержать при комнатной температуре и расплавить при 68 °С. К расплавленному фенолу добавить равный объем H₂O, тщательно перемешать и выдержать раствор до разделения фаз. После этого удалить верхнюю водную фазу. К фенолу добавить равный объем 1 М раствора трис-HCl, рН 8,0±0,1, тщательно перемешать и выдержать раствор до разделения фаз. Удалить верхнюю водную фазу. Затем фенол насыщают равным объемом 0,1 М раствора трис-HCl, рН 8,0±0,1, тщательно перемешивают и выдерживают раствор до разделения фаз до тех пор, пока рН водной фазы не станет > 7,6. Раствор фенола можно хранить при 4 ^оС до появления розового окрашивания.

Предостережение. При работе с фенолом следует надевать перчатки и очки, так как он является едкой жидкостью и вызывает тяжелые ожоги.