Оптическую плотность элюатов определяют также, как описано выше

Расчёт количества антрахинонов (агликонов) в процентах (Х) на абсолютно сухой вес проводят по формуле:

m ^. V₃ ^. (100 – W) ^. 1000

где С- содержание антрахинона в 1 мл испытуемого раствора, найденное по соответствующему калибровочному графику, построенному по индивидуальному веществу, в мг;

V₁ – объем экстракта, в миллилитрах;

V₂ – объем элюата, в миллилитрах;

V₃ – объем экстракта, нанесенный на хроматограмму, в миллилитрах;

m – масса навески сырья, в граммах;

W - потеря в массе при высушивании сырья, в процентах.

Содержание свободных антрахинонов вычисляют суммиро-ванием количества индивидуальных компонентов при хромато-графировании экстракта, не подвергнутого гидролизу, общее содержание свободных и связанных антрахинонов - после гидролиза. Количество связанных форм антрахинонов вычисляют по разности этих двух показателей.

Методика количественного определения антрахинонов имеет ряд достоинств:

§ дает информацию о содержании не только суммы веществ, но и индивидуальных компонентов в свободной и связанной форме, что немаловажно в исследованиях метаболизма этих веществ, а также при использовании антрахинонсодержащих растений в лекарственной терапии;

§ позволяет работать с малыми навесками (до 0.03-0.05 г) сырья;

§ даёт возможность использовать элюаты индивиду-альных веществ, накопив их в значительном количестве при серийных анализах [34,36].

В препарате «Кофранал» и в коре крушины ломкой содержание антрахинонов определяют по методике 6 [44]. 0.2-0.3 г препарата (точная навеска) помещают в колбу вместимостью 200-250 мл, добавляют 100 мл хлороформа, 25 мл 25% кислоты серной, нагревают с обратным холодильником 2.5 часа. Хлороформный слой фильтруют во взвешенную сухую колбу с 2 г безводного натрия сульфата. К остывшей кислой жидкости добавляют 100 мл хлороформа и экстрагируют повторно. Охлаждают и фильтруют в ту же колбу через слой осушителя.

Хлороформные извлечения упаривают досуха, остаток сушат при 80⁰С до постоянного веса, добавляют 20 мл ДМФА, количественно переносят в сосуд для потенциометрического титрования, добавляют 10 мл криоскопического бензола и титруют 0.1н раствором натрия гидроксида в смеси бензол/метанол 4:1.

Электродная система: катодно-поляризованный платиновый / насыщенный водный каломельный электроды.

Расчет содержания антрахинонов проводят по разнице между количеством мл 0.1н раствора натрия гидроксида, соответствующих второму и первому скачку потенциалов.

1 мл 0.1н раствора натрия гидроксида = 0.0270 г эмодина.

Содержание антрахинонов можно определять методом потенциометрического титрования в растворе диметилформ-амида в присутствии тимолового синего [44,45], если 1 мл экстракта сырья нанести полосой на пластину силикагеля и хроматографировать в любой подходящей системе раствори-телей. Затем каждое пятно отдельно переносят в колбы, добавляют 25 мл ДМФА, нейтрализованного по тимоловому синему и проводят потенциометрическое титрование, как описано выше.

* Если состав экстрактов анализируют методом БХ, то содержание каждого компонента можно оценить по плотности окраски (с проявителем и без) методом денситометрии (если проявитель 10% NaOH, светофильтр 510 нм, если щелочно-аммиачный раствор – 525-540 нм).

Содержание антрахинонов в сборах или в измельченном брикетированном сборе предложено определять по методу 7. Получают водно-спиртовые экстракты антраценсодержащих растений, затем экстракты, например, александрийского листа, крушины и др. и около 2-3 г порошка таблеток (брикетов) помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 20 мл смеси спирт метиловый - вода очищенная (7:3) и нагревают на водяной бане в течение 10 мин. Надосадочную жидкость отделя­ют без охлаждения; остаток промывают дважды по 10 мл тем же растворителем. Водно-метанольные экстракты объединяют, помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, дово­дят объем раствора вышеуказанным растворителем до метки и фильтруют. 10 мл фильтра­та помещают в делительную воронку вместимостью 50 мл и экстрагируют четыреххлористым углеродом дважды по 20 мл. Органические экстракты объединяют, промывают 10 мл воды очищенной, органическую фазу отбрасывают, а промывной раствор присоединяют к водно-метанольной фазе. Водно-метанольную фазу упаривают досуха на водяной бане, ос­таток растворяют в смеси 0.5 мл спирта метилового и 10 мл воды очищенной, к раствору прибавляют 0.5 мл 5% раствора натрия гидроксида, 20 мл 20% раствора железа хлорида, на­гревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин, прибавляют 12 мл кислоты хлороводородной и нагревают еще в течение 4 часов. Раствор охлаждают, экстрагируют четыреххлористым углеро-дом дважды по 20 мл, органические фазы объединяют, промывают 10 мл во­ды очищенной и органическую фазу отбрасывают. Водную фазу с помощью 10 мл 1М раствора натрия гидроксида количественно переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора тем же растворителем до метки, центрифугируют для удаления остат­ков четыреххлористого углерода и надосадочную жидкость отделяют. [1.0 мл надосадочной жидкости помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора 1M рас­твором натрия гидроксида до метки и перемешивают]. (*)

Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 500 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, ис­пользуя в качестве раствора сравнения 1М раствор натрия гидроксида.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартных образцов (СО) экстрактов листа александрийского, крушины или других.

Суммарное содержание смеси антраценовых (Х) в одной таблетке, в миллиграммах, вычисляют по формуле:

D₀ ^. m₁

где D₁ - оптическая плотность испытуемого раствора;

D₀ - оптическая плотность раствора СО смеси сухих экстрактов крушины и листа александрийского;

m₀ – масса навески смеси сухих экстрактов крушины и листа александрийского, в миллиграммах;

m - масса навески препарата, в миллиграммах;

b – средняя масса таблетки, в миллиграммах.

Примечания. Приготовление раствора СО смеси сухих экс­трактов крушины и листа александрий-ского. Около 630 мг (точная навеска) смеси сухих экстрактов, состоящей из 43% экстракта листа алек-сандрийского и 57% экстракта крушины или равных количеств экстрактов помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл и обрабатывают по методике приготовления испытуемого раствора.