Этапы внедрения GMP в России

Как правило, основным препятствием считают необходимость крупных денежных вложений. Серьезных капитальных затрат требует технологическое оборудование, для стерильного производства – «чистые помещения».

Материальные затраты на внедрение GMP:

- организации производства;

- технологическое оборудование, в т.ч. подготовка воды;

- чистые помещения - после технологического оборудования занимают второе место по затратам, обязательны для стерильного производства.

Для нестерильного производства целесообразно соблюдение требований в чистоте без обязательной классификации чистоты помещений.

Внедрение GMP за 2-3 года в масштабах всей страны невозможно. В ближайшие годы необходимо было решить следующие задачи:

- введение организационно-технологических требований GMP, системы управления качеством, обеспечение культуры производства и гигиены персонала, создание системы обучения по GMP на каждом предприятии;

- внедрение правил GMP на отдельных ключевых участках, чтобы приобрести необходимый опыт и в последующие периоды распространить его на все производство;

- создание инспекций по GMP;

- создание материально-технической базы.

Лекция 2.

Общие требования к качеству вакцин.

1. Требования к вакцинам.

1.1. Посевной материал.

1.2. Клеточные культуры.

1. Показатели качества вакцин.

Требования к вакцинам.

При разработке своих национальных требований к вакцинам все страны руководствуются рекомендациями ВОЗ. Экспертный комитет по биологической стандартизации ВОЗ рассматривает, одобряет и публикует рекомендации практически по всем видам вакцин. В рекомендациях отражены все этапы производства и контроля вакцин, начиная с сертификации вакцинного штамма и клеточных культур, на основе которых готовятся вакцины, и заканчивая контролем конечного продукта.

В документах ВОЗ даются преимущественно качественные показатели вакцин, хотя по наиболее важным из них (безопасность, иммуногенность) приводятся цифровые данные. По большинству показателей лимиты устанавливаются национальным органом контроля (НОК) отдельных стран, эти показатели в требованиях разных стран могут отличаться друг от друга.

ВОЗ считает целесообразным разрабатывать международные требования, только если вакцина лицензирована хотя бы в 1 стране и на нее есть национальные требования. Но по некоторым новым вакцинам, например, синтетическим, пептидным, ДНК-вакцинам, которых еще нет в практике, ВОЗ разрабатывает наставления, носящие общий рекомендательный характер.

Общие требования касаются прежде всего безопасности и специфической активности вакцин. Для обеспечения безопасности вакцин должны быть изучены и охарактеризованы свойства вакцинного штамма, клеточного субстрата, свойства полуфабриката и конечного продукта. Требования к специфической безопасности вакцин: полнота инактивации токсинов, бактерий, вирусов, отсутствие остаточной вирулентности (или реверсии вирулентности) и контаминации, наличие генетической стабильности и генетической гомогенности вакцинного штамма. Специфическая активность вакцин включает количество АГ на единицу объема, количество живых или убитых микробных клеток, уровень специфических АТ в сыворотке крови животных, иммунизированных данной вакциной, степень защищенности таких животных на введение разрешающей дозы инфекционного агента.

Посевной материал.

ПМ готовится из производственного штамма и используется для изготовления вакцин. 1 и та же серия ПМ может использоваться в течение 10-в лет. Для приготовления вирусного ПМ применяют вирус, который прошел минимальное число пассажей от первичного посевного вируса, из которого была приготовлена вакцина при ее лицензировании. Критерием, ограничивающим число пассажей, является генетическая стабильность вакцинного штамма. Следует контролировать посевной вирус на контаминацию. Хранение посевного вируса и процесс производства вакцины не должны менять свойства вируса. Эти требования к посевному вирусу, используемому для приготовления живых и инактивированных вакцин, должны быть одинаковыми.

Штамм вируса, используемый для приготовления ПМ, должен быть аттестован и содержать сведения об истории его выделения, методе аттенуации, контаминации, иммуногенности, безопасности, нейровирулентности, если штамм применяется для производства живых вакцин. Посевной вирус должен содержаться в условиях, обеспечивающих стабильность его генотипа и постоянство свойств при его хранении и репродукции.

Клеточные культуры.

Ни 1 вид клеток, используемых для приготовления вирусных вакцин, не является абсолютно безопасным в отношении возможной контаминации посторонними вирусами. Каждый вид клеток, предполагаемый для производства вакцин, должен быть охарактеризован по следующим показателям:

- история линии клеток

- среда культивирования клеток

- характеристика динамики размножения клетки in vitro

- замораживание и хранение посевного пула диплоидного штамма клеток

- контроль на наличие контаминантов

- контроль на неопластические свойства штамма

- аттестация клеточных культур

- протоколы ведения диплоидных клеток

Первичные клеточные культуры используются для приготовления вакцин в течение нескольких 10летий, применяются куриные эмбрионы (для вакцин против гриппа, бешенства, клещевого энцефалита, желтой лихорадки), эмбрионы японских перепелов (корь и паротит), клетки почек обезьян (полиомиелит), клетки собак, кроликов, хомяков и т.д.

К недостаткам метода первичных культур относятся высокая чувствительность вируса, возможная предшествующая контаминация, необходимость контроля на микробную контаминацию отдельных животных и птиц, а также питомников, где они разводятся. Очистка вакцины должна гарантировать максимальное избавление вакцин от клеточных элементов, НК и нежелательных АГ.

Для доказательства эффективности вакцин отдельные этапы этого процесса целесообразно подвергнуть валидации – процесс получения доказательств в соответствии с GMP, что любая процедура (методика), оборудование, материал, деятельность или система действительно представляет ожидаемый результат.

Диплоидные клетки человека не обладают тумурогенностью (способность вызвать образование опухолей) и из них можно создать клеточный банк, что удобно для производства вакцин. Для культивирования диплоидных клеток необходимы ростовые факторы (фетальная сыворотка телят). Наиболее перспективными и удобными для производства иммунобиологических препаратов являются перевиваемые клетки (клеточная линия, обладающая способностью к неограниченному количеству пассажей) – пассированные раковые клетки человека и животных. Перевиваемые клетки неприхотливы к ПС, и из них можно создать банк клеток и получить биомассу в большом объеме. Недостатком работы с перевиваемыми клетками является необходимость очистки вакцин от клеточных ДНК, которая может обладать тумурогенной активностью, вызвать активацию протоонкогенов или инактивацию супрессорных генов после встраивания чужеродной ДНК в клеточный геном. Недавно ВОЗ увеличило лимит клеточной ДНК со 100 пг до 10 нг на 1 дозу вакцины, хотя современные методы очистки позволяют уменьшить концентрацию клеточной ДНК до минимальных концентраций, для энтеральных вакцин лимит чужеродной ДНК не установлен.

Для приготовления вакцин следует применять только те клеточные линии, которые не обладают онкогенными свойствами. Для обеспечения безопасности вакцин необходимо провести аттестацию перевиваемых линий клеток в национальном органе контроля, на предприятии должен быть создан банк таких клеток.

Контаминация первичных культур клеток соответствует микрофлоре тканей животных, от которых берутся клетки. Контаминация, определенная в первичных культурах клеток, соответствует микрофлоре тканей животных, от которых берутся клетки, поэтому животных-доноров целесообразно содержать в специальных вивариях, которые необходимо периодически контролировать на отсутствие контаминационной микрофлоры.

Трипсин, бычья сыворотка и сывороточный альбумин, необходимые для приготовления взвеси клеток и их культивирования, можно использовать только с тех территорий, которые свободны от прионных заболеваний. Для производства иммунобиологических препаратов нельзя применять клетки нервной ткани.