Санитарно-микробиологическое исследование оборудования, рук и спецодежды персонала

Бактериальное загрязнение определяют путем изучения микрофлоры смывов, сделанных с рук и поверхностей исследуемых объектов.

В зависимости от целей исследования в смывах определяют:

1) общую бактериальную обсемененность с пересчетом на 1 см² исследуемой площади;

2) наличие БГКП;

3) наличие золотистого стафилококка, синегнойной палочки и других патогенных микробов.

Требования к микробиологической чистоте: присутствие БГКП, синегнойной палочки, протеев, стафилококка в смывах не допускается.

Отбор проб. С рабочих столов, оборудования, рук и спецодежды персонала пробы отбирают методом смыва стерильным ватным тампоном.

Взятие смывов производят стерильным ватным тампоном или марлевыми салфетками, размером 5х5 см, простерилизованными в бумажных пакетах или в чашках Петри. Для увлажнения тампонов и салфеток в стерильные пробирки наливают по 2 мл стерильного физиологического раствора. Салфетку захватывают стерильным пинцетом, увлажняют физиологическим раствором из пробирки, после протирания исследуемого объекта помещают в ту же пробирку.

При контроле мелких предметов смывы забирают с поверхности всего предмета. При контроле предметов с большой поверхностью смывы проводят в нескольких местах исследуемого предмета площадью примерно в 100-200 см².

Смывы с кожи операционного поля и рук хирургов производят стерильными марлевыми салфетками размером 5х5 см², смоченными в растворе нейтрализатора или в физиологическом растворе. Руки обследуемого протирают, начиная с тыльной части ладони,  далее ладонь, межпальцевые поверхности, ногтевые ложа и подногтевые поверхности.

Для определения общего микробногочисла в исследуемом смыве к 2 мл изотонического раствора хлорида натрия, используемого для увлажнения тампона (или салфетки), прибавляют еще 8 мл и тампон тщательно отмывают встряхиванием со стеклянными бусами в течение 10 мин. Отмывную жидкость (1:10) засевают глубинным способом по 0,5 мл на 2 чашки Петри с МПА. Посевы инкубируют при температуре 37ºС в течение 48 часов. Затем подсчитывают количество выросших колоний, делая перерасчет на 1 см² исследуемой поверхности.

Для определения БГКП производят посев в среду обогащения, для чего тампон (марлевую салфетку) погружают в среду Кесслера или 10—20% желчный бульон. Через сутки инкубирования при 37°С делают пересев на среду Эндо. После инкубации в термостате при 37°С в течение 18—24 ч, подозрительные колонии микроскопируют, пересевают в среду Гисса с глюкозой и выдерживают при 43°С 24 ч. Затем производят учет результатов.

Для обнаружения стафилококков делают посев непосредственно с тампона на желточно-солевой агар. Кроме того, в качестве среды накопления используют бульон с 6,5% хлорида натрия и бульон с 1% глюкозы, разлитые по 0,5 мл в пробирки, куда засевают по 0,2—0,3 мл смывной жидкости. Посевы инкубируют при 37°С в течение 24 ч, а затем делают пересев на чашки с ЖСА. Дальнейшее исследование проводится по общепринятой методике обнаружения стафилококков.

Для выявления синегнойной палочки специальные посевы можно не производить. Обычно колонии синегнойной палочки удается выявить на кровяном агаре или на среде Эндо. Колонии, подозрительные на синегнойную палочку, пересевают на скошенный агар, содержащий 2-5% глицерина или маннита. Колонии синегнойной палочки дают на поверхности скошенного агара обильный рост с зеленоватым оттенком, маслянистой консистенции с характерным медовым запахом. Выделенную культуру окрашивают по Граму, микроскопируют, определяют гемолитические свойства путем высева на чашку с кровяным агаром.

Санитарно-бактериологическое исследование перевязочного, шовного и другого хирургического материала

Исследование перевязочного, шовного и другого хирургического материала проводят на стерильность. Контроль стерильности изделий проводят путем погружения в питательные среды. В исключительных случаях, когда необходимо проверить стерильность инструмента больших размеров, пробы забирают методом смыва, стерильной марлевой салфеткой размером 5х5 см², предварительно увлаженной стерильным физиологическим раствором или стерильной водопроводной водой.

Посевы исследуемого материала делают в боксе с соблюдением правил асептики. Кетгут предварительно выдерживают сутки в 10% растворе гипосульфита для нейтрализации спиртового раствора йода, в котором его обычно хранят, а затем еще сутки в стерильной дистиллированной воде. Шелк перед посевом сутки выдерживают в стерильной дистиллированной воде.

Исследуемый материал вносят в две пробирки с сахарным бульоном Хоттингера, в тиогликолевую среду и бульон Сабуро. Посевы в сахарном бульоне и тиогликолевой среде инкубируют при 37°С, а в среде Сабуро — при 20—22°С. Посевы выдерживают в термостате в течение 14 сут, просматривая их каждый день. При появлении роста микробов делают мазок, окрашивают по Граму, микроскопируют. Дальнейший ход исследования зависит от вида микроорганизма.

Материал считается стерильным при отсутствии роста во всех пробирках.