Анализ микрофлоры воздуха

Воздух – неблагоприятная среда для микроорганизмов. Он не является средой постоянного обитания, а только временного нахождения или переноса микроорганизмов. В воздухе нет питательных веществ, постоянной оптимальной температуры, часто отсутствует влага, губительно действуют на микробы солнечные лучи. Микроорганизмы попадают в воздух главным образом с пылью или каплями жидкости с поверхности почвы, растений, животных, транспорта, водной поверхности. Микробы в воздухе распространены неравномерно. Количественный и качественный состав микрофлоры воздуха находится в прямой зависимости от микрофлоры почвы, над которой берут пробу воздуха. Количество микроорганизмов зависит от погоды (в дождливую их меньше, чем в сухую), от времени года (летом их больше, чем зимой) и места взятия пробы (над крупными населенными пунктами микробов больше, чем над сельской местностью). Микроорганизмов мало в воздухе над лесами, садами, лугами, озёрами, океаном, высоко в горах и на севере.

Микрофлора воздуха характеризуется наличием большого количества шаровидных бактерий (микрококков, диплококков, сарцин, стафилококков), устойчивых к недостатку влаги и ультрафиолетовым лучам и образующих разноцветные пигментированные колонии на питательной среде, встречаются также палочковидные формы и плесневые грибы.

За сутки через легкие человека проходит 12-14 тыс. литров воздуха. Воздушным путем распространяются возбудители гриппа, туберкулёза, оспы, пневмонии, коклюша, ангины, катара верхних дыхательных путей и др.

Посев микроорганизмов из воздуха. Наиболее простым способом определения общего количества микроорганизмов в воздухе является метод оседания микробов на агаровую пластинку, предложенный Р. Кохом. Метод заключается в том, что чашку Петри с мясопептонным агаром открывают в исследуемом помещении на 5 мин, после чего закрывают крышкой, оборачивают бумагой, переворачивают вверх дном во избежание размыва колоний конденсационной водой, подписывают и помещают в термостат при 28-30 ºС для выращивания микробов, которые оседают на питательную среду вместе с пылью. По количеству выросших колоний можно судить о степени загрязненности воздуха микроорганизмами.

Количественный учёт микроорганизмов в воздухе. Р.Кох экспериментально установил, что за 5 мин на поверхность 100 см² оседает столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 л, или 0,01 м³ воздуха.

Рассчитывают, сколько микробов содержится в 1 м³ воздуха над открытой при посеве чашкой Петри с МПА.

Для этого:

1. Через 5-7 дней после посева подсчитывают число выросших в чашке колоний (n). Колония – это потомство одной микробной клетки на питательной среде.

2. Узнают площадь чашки Петри, для чего измеряют диаметр внутренней чашки со средой (5 см²) и рассчитывают по формуле:

S чашки Петри = π r² = 3,14´ 5² = 78,5 см².

3. Определяют число микроорганизмов в 1 м³ воздуха. Зная, сколько микробов выросло на площади 78,5 см², можно пересчитать, сколько их было бы на 100 см², а это, по методике Коха, соответствует их содержанию в 0,01 м³, значит в 1 м³ их должно быть в 100 раз больше. Рассчитывают число микроорганизмов в 1 м³  воздуха (x) по формуле:      

.

Воздух считается загрязнённым, если в 1 м³ более 4,5 тыс. микроорганизмов.

Делают вывод о количестве микробов в помещении, где проводился анализ микрофлоры воздуха.

Определение качественного состава микрофлоры воздуха. Под качественным анализом микрофлоры понимается описание культуральных и морфологических признаков микроорганизмов, что служит основой для определения их видовой принадлежности.

Культуральные признаки – это внешний вид колоний при выращивании на различных питательных средах. К культуральным признакам колонии относятся:

1) размер – крупные (диаметр 4-6 мм и более), средние (2-4 мм), мелкие (1-2 мм) и точечные (не более 1 мм) колонии;

2) форма – круглая, овальная, неправильная, амёбовидная, ветвистая, ризоидная и др.;

3) цвет – белый, розовый, жёлтый, оранжевый, красный и др.;

4) профиль или рельеф – плоский, выпуклый, кратеровидный, конусовидный, изогнутый и др.;

5) поверхность – блестящая, матовая, морщинистая, гладкая и др.;

6) консистенция – жидкая, вязкая, пастообразная, сухая, плотная и др. (устанавливается прикосновением к поверхности колонии бактериологической петлей);

7) край – ровный, волнистый, лопастной, бахромчатый и др. (рассматривают, пользуясь лупой или под микроскопом).

 К морфологическим признакам микробов относятся форма, характер деления и размер клеток, особенности спорообразования и жгутикования, наличие капсулы, включений, окраска по Граму и др.

Для описания морфологических признаков из доминирующих колоний готовят препараты-мазки – петлей берут немного микробного материала и тщательно размазывают по стеклу, фиксируют в пламени, окрашивают кристаллвиолетом 30-60 с и рассматривают, пользуясь иммерсионной системой микроскопа. Отмечают форму клеток, наличие или отсутствие спор, капсул и зарисовывают в тетради. Делают выводы о преобладающих формах микроорганизмов в воздухе.