Приготовление ряда питательных сред

Мясопептонный бульон (МПБ) – среда искусственная, жидкая, общего назначения. Для её приготовления используют мясо – говядину, телятину, конину и др. Из мяса получают фарш, заливают его холодной водопроводной водой (на 1 кг фарша 2 л воды), настаивают при температуре 5-7 ºС 18-24 ч для выделения экстрактивных веществ. Затем мясной настой кипятят 15-30 мин, охлаждают и фильтруют через полотно. К 1 л полученного бульона добавляют 5 г NaCl и 10 г пептона. Сухой пептон представляет собой жёлтый липкий порошок – продукт неполного распада белков. Соль и пептон растворяют при нагревании, доводят щелочью рН до 7,2-7,4 (слабощелочная реакция среды благоприятна для большинства микроорганизмов). Среду разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве. Используют для приготовления МПА и МПЖ, для накопительной культуры аммонифицирующих бактерий.

Мясопептонный агар (МПА) – среда искусственная, твёрдая, общего назначения. Представляет собой плотную студнеобразную массу. Эта питательная среда широко применяется в лабораторной практике для выращивания микроорганизмов. Для её приготовления используют сухой агар-агар (по малайски агар-агар – желе) – полисахарид с низким содержанием азотистых веществ и не представляющий питательной ценности для микроорганизмов. Агар-агар имеет вид серых листовидных пластинок. Добывается он из морских водорослей багрянок. Это отличное гелеобразующее вещество – обладает способностью набухать и растворяться при нагревании, а после застывания образовывать плотную студенистую массу. Для приготовления этой среды к 1 л МПБ добавляют 15-20 г агар-агара. Замачивают несколько часов для набухания агара, кипятят на слабом огне до полного его растворения, после этого доводят объём жидкости до первоначального дистиллированной водой, фильтруют через марлевый фильтр, смоченный предварительно горячей водой. Среду в горячем виде разливают в стеклянные колбы и стерилизуют в автоклаве. Готовый МПА имеет точку плавления 96-100 ºС и температуру застывания около 40 ºС, т. е. при комнатной температуре он всегда представляет собой твердую питательную среду. Используют для количественного анализа микрофлоры воздуха и почвы.

Мясопептонный желатин (МПЖ) - среда искусственная, твёрдая, общего назначения. Это плотная питательная среда, для приготовления которой используют сухой желатин. Желатин - вещество белковой природы, кислый азотсодержащий продукт, добываемый путём вываривания костей, хрящей. Для приготовления МПЖ к 1 л МПБ добавляют 100-150 г желатина, настаивают несколько часов для набухания желатина и затем нагревают до его полного растворения. Используют щелочь для доведения реакции среды до слабощелочной. Фильтруют горячую среду через складчатый бумажный фильтр, разливают в колбы и стерилизуют дробно текучим паром в аппарате Коха. Применение МПЖ ограничено в связи с тем, что он разжижается под действием протеолитических ферментов, выделяемых многими микроорганизмами. Кроме того, образуемый желатином гель плавится уже при 23-25 ºС и застывает при 20 ºС и ниже, а большинство микробов развивается при 30-37 ºС. Используют для выявления культуральных и биохимических признаков идентифицируемых микроорганизмов.

Крахмало-аммиачный агар (КАА) – среда синтетическая, твёр-дая, элективная. Имеет следующий состав, г: крахмал – 10, (NH₄)₂SO₄ – 2, K₂HPO₄ – 1, MgSO₄ – 1, CaCO₃ – 3, агар-агар – 20, вода дистил-лированная – 1000 мл. Агар растворяют в 300 мл воды. Отдельно растворяют крахмал в 100 мл воды. В остальных 600 мл воды растворяют соли, нагревают до кипения и в кипящий раствор при непрерывном помешивании вливают крахмал, затем добавляют воду с агаром и стерилизуют в автоклаве. Используют для выращивания актиномицетов.

Среда Чапека - среда синтетическая, твёрдая, элективная. Имеет следующий состав, г: глюкоза – 14,0; CaCO₃ – 0,7; KNO₃ – 0,7; MgSO₄ – 0,35; NaCl – 0,35; K₂HPO₄ – 0,35; FeSO₄ – следы; агар-агар – 20,0; вода дистиллированная – 1000 мл. Агар отдельно растворяют в 300 мл воды. Затем всю смесь кипятят, разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве. Используют для выращивания актиномицетов.

Среда Эндо - среда синтетическая, твердая, элективная. Имеет следующий состав, г: пептон – 10, лактоза – 10, K₂HPO₄ – 3,5, NaHSO₃ – 2,5, агар-агар – 15,0, вода дистиллированная – 1000 мл. К среде добавляют 4 мл 10 %-ного спиртового раствора основного фуксина, поэтому она окрашивается в розово-кремовый цвет. Среду стерилизуют в автоклаве и сохраняют в темноте. Используют для выращивания кишечной палочки. Бактерии из рода Escherichia на этой среде образуют малиновые колонии с металлическим блеском.

Пептонная вода - среда искусственная, жидкая, элективная. Для ее приготовления к 1 л воды добавляют 40 г пептона и 5 г NaCl, растворяют при нагревании, фильтруют, разливают в колбы и автоклавируют. Используют для выращивания аммонифицирующих (гнилостных) бактерий.

Полужидкий агар – среда синтетическая, полужидкая, общего назначения. Для её приготовления 0,1 г агар-агара растворяют в 100 мл воды при кипячении, фильтруют и автоклавируют. Используют для прямого подсчета числа микроорганизмов в почве по Виноградскому.

Многие питательные среды (среда Эндо, сухой питательный агар, питательный бульон и др.) изготавливаются промышленным способом в виде сухих порошков. В лаборатории их доводят до готовности по рецепту, указанному на этикетке.

Приготовление ряда элективных питательных сред описано в работах № 11, 12, 13, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23.

Материалы и оборудование: колбы с мясопептонным бульоном, мясопептонным агаром, средой Чапека или КАА для актиномицетов, средой Эшби для азотобактера, средой Омелянского для целлюлозоразлагающих бацилл и др.; сухой пептон, агар-агар и желатин в баночках.