Работа №13. Осаждение белков при нагревании

Материал для исследования.Яичный белок, 1 % рас­твор.

Реактивы.Уксусная кислота, 1 % и 10 % растворы; NaOH, 10 % раствор; NaCl, насыщенный раствор.

Оборудование.Штативы с пробирками; газовые го­релки.

Ход работы.В 5 пробирок наливают по 0,5 мл раство­ра яичного белка. Содержимое 1-й пробирки нагревают и наблюдают появление опалесценции (помутнение рас­твора).

К раствору яичного белка во 2-й пробирке осторожно добавляют 1 каплю 1 % раствора уксусной кислоты, на­гревают и наблюдают вначале появление опалесценции, а при дальнейшем нагревании — выпадение белого хлопье­видного осадка белка. Это объясняется тем, что белок те­ряет заряд и находится в изоэлектрическом состоянии.

К раствору яичного белка в 3-й пробирке добавляют 1— 2 капли 10 % раствора уксусной кислоты и нагревают. Осадка при нагревании не образуется, так как частицы белка перезаряжаются, приобретают положительный заряд.

К раствору яичного белка в 4-й пробирке добавляют 1—2 капли 10 % раствора уксусной кислоты, 1 каплю на­сыщенного раствора хлорида натрия и нагревают. Выпа­дает осадок белка, так как происходит нейтрализация за­ряда на частицах белка.

К раствору яичного белка в 5-й пробирке добавляют 1 каплю 10 % раствора гидроксида натрия и нагревают. Осадка не образуется, так как положительный заряд на частицах белка усиливается.

Оформление работы.Результаты опыта и выводы запи­сывают в таблицу.

Форма записи

Задания для контроля

1. Чем обусловлены цветные реакции на белки?

2. Если с раствором одного белка реакции Миллона и ксантопротеиновая положительные, а с раствором друго­го отрицательные, то что можно сказать о различиях ами­нокислотного состава этих белков?

3. Как с помощью цветных реакций обнаружить в бел­ке аргинин?

4. Как обнаружить в белке цистеин?

5. Даны пептиды:

1) Асп-Фен-Мет-Гис-Цис-Ала;

2) Тир-Цис-Про-Арг-Глу.

Какие цветные реакции будут положительными с эти­ми пептидами. Обоснуйте Ваш выбор.

6. Какие цветные реакции можно использовать для определения аминокислотного состава дипептидов:

1) Арг-Фен;

2) Арг-Арг;

3) Цис-Цис;

4) Арг-Цис?

7. При помощи каких цветных реакций можно устано­вить различие аминокислотного состава альбумина и же­латина?

8. Даны 2 пробирки с растворами: одна с раствором белка, другая содержит смесь аминокислот. При помощи цветных реакций определите:

1) в какой пробирке содержится белок;

2) какие аминокислоты содержатся в другой про­бирке.

9. На каких реакциях основано количественное опре­деление белка биуретовым методом? методом Лоури?

10.Какой метод более чувствителен: биуретовый или метод Лоури?

11.Дан раствор с неизвестной концентрацией белка. Определите концентрацию белка в исследуемом растворе биуретовым методом, а затем методом Лоури. Помните при этом разницу в чувствительности этих методов.

12.Какими методами можно освободить раствор белка от низкомолекулярных веществ?

13.Как доказать, что при диализе белок остается в целлофановом мешочке, а ионы соли находятся в диализирующей жидкости?

14.Почему при обессоливании белкового раствора ме­тодом гель-фильтрации белок по времени появляется в элюирующей жидкости раньше, чем ионы соли? Как это обнаружить?

15. Даны 3 пробирки с растворами разных белков:

1) раствор альбумина;

2) смесь альбумина и глобулина;

3) раствор глобулина.

Используя метод высаливания сульфатом аммония, определите, какие белки содержатся в каждой пробирке.

16.Имеется два раствора альбумина: один с примесью сульфата аммония, другой — с примесью бихромата ка­лия. Какими методами можно обессолить данные белко­вые растворы?

17. При каком значении рН будет достигнуто наиболее
эффективное разделение методом электрофореза следую­щих белковых смесей:

1) миоглобин и химотрипсиноген;

2) яичный альбумин и пепсин;

3) сывороточный альбумин и гемоглобин (pi белков приведены в таблице)?

18. Представлены изображения полученных в лаборатории электрофореграмм белков сыворотки крови здоровых (а) и больных (б): I, IV — глобулинов; II — липопротеи-
нов; III — белков свертывания крови; V — альбуминов.

А. Установите различия белковых фракций на элек-трофореграммах здоровых и больных.

Б. Объясните причины отклонений от нормы.

19. Что такое денатурация белка?

20. Какие физические и химические факторы вызыва­ют денатурацию белка?

21. Почему белки при нагревании в изоэлектрической точке быстро выпадают в осадок и не выпадают при на­гревании в резко кислой или резко щелочной среде?

Раздел II