Работа №26 Влияние температуры на активность ферментов

Принцип. Ферменты термолабильны и проявляют оптимальную активность при температуре 35-45°С. При повышении температуры (свыше 50° С) их активность снижается, а затем происходит разрушение структуры молекулы фермента.

Реактивы:

1) Крахмал, 1% раствор;

2) Слюна, раствор;

3) Йод, 1% раствор;

4) Сульфат меди, 5% раствор;

5) Гидроокись натрия, 10% раствор.

Ход работы.В две пробирки вносят по 10 капель раствора крахмала. В одну из них добавляют 5 капель раствора слюны, в другую — такое же количество предварительно прокипяченной слюны. Пробирки встряхивают. помешают в термостат на 15 мин при температуре 37° С. Охлаждают и проделывают реакции с раствором йода и реакцию Троммера.

Результаты записывают в виде таблицы и делают выводы.

Влияние температуры на активность ферментов

Работа №27 Влияние рН среды на активность ферментов.

Принцип. Для амилазы слюны оптимальное значение рН среды - 6,8. В кислой и щелочной среде активность ее снижается и расщепление крахмала происходит не полностью, до стадии декстринов, которые с раствором йода дают красно-фиолетовую или красно-бурую окраску.

Реактивы:

1) Крахмал, 1% раствор;

2) Дистиллированная вода;

3) Хлористоводородная кислота, 0,2% раствор;

4) Слюна-раствор, разведенный в 10 раз;

5) Йод, 1 % раствор.

Ход работы.В 8 пронумерованных пробирок наливают по 1 мл дистиллированной воды. В 1-ю пробирку вносят 1 мл раствора хлористоводородной кислоты, перемешивают, отбирают из этой пробирки 1 мл смеси и переносят его во 2-ю пробирку. Содержимое 2-й пробирки перемешивают, отбирают 1 мл смеси и переносят в 3-ю пробирку и т.д. Из 8-й пробирки 1 мл смеси выливают. Таким образом в пробирках получают разведения хлористоводородной кислоты, в убывающей концентрации, соответствующей различным значениям рН: среды. После этого в каждую пробирку добавляют по 2 мл раствора крахмала и по 1 мл раствора слюны. Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 15 минут при температуре 37° С. Затем охлаждают под проточной водой и добавляют по 1 капле раствора йода. Отмечают, при какой концентрации хлористоводородной кислоты (рН среды) произошел полный гидролиз крахмала.

Работа №28 Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов.

Принцип.Активаторы и ингибиторы вдаяют на активный центр фермента, способствуют его активации или блокированию. Для фермента слюны амилазы активатором является хлорид натрия, а ингибитором - сульфат меди.

Реактивы:

1) Слюна - раствор, разведенный в 5 раз;

2) Дистиллированная вода;

3) Крахмал, 1 % раствор;

4) Сульфат меди, 1% раствор;

5) Хлорид натрия, 1 % раствор.

Ход работы.В 3 пробирки отмеривают по 120 капель раствора слюны. Затем добавляют по одной капле: в 1-ю - хлорида натрия, во 2-ю -сульфата меди, в 3-ю - воды (контроль). Перемешивают, вносят в каждую пробирку по 5 капель раствора крахмала и оставляют на 3 минуты при комнатной температуре. Затем добавляют по 1 капле раствора йода, перемешивают, наблюдают за окраской растворов и определяют, в какой пробирке действовал активатор или ингибитор.

Результаты работы оформляют в тетради для протоколов в виде таблицы. Действия активатора и ингибитора на активность амилазы

Задания для контроля

1. Что называют ферментами? Перечислите основные свойства ферментов. Что такое «катал»?

2. Правильны ли утверждения: а) все ферменты по своей химической природе являются белками; б) ферменты являются биолгическими катализаторами; в) все фермены способны катализировать как прямую, так и обратную реакцию.

3. Как можно обнаружить наличие фермента в биологической жидкости?

4. Какой фермент содержится в слюне? Какой субстрат следует добавить в раствор слюны, чтобы проявилось действие этого фермента? Почему?

5. Выберите правильный ответ. Все ферменты обладают: а) обсалютной специфичностью; б) относительной специфичностью; в) высокой специфичностью, в основе которой лежит строгое соответствие структуры субстрата и активного центра фермена.

6. Почему в опытах с амилазой слюны при добавлении крахмала (1) и сахарозы (2) реакция Троммера в первом случае была положительной, а во втором отрицательной?

7. Почему в пробирках с прокипяченой слюной не произошло расщепления крахмала?

8. Правильны ли утверждения: а) каждый фермент проявляет свою активность при определенном значении рН среды; б) оптимум рН среды для амилазы слюны 6,8 – 7,4; в) оптимум рН среды для пепсина 1,0-1,5.

9. Правильны ли утверждения: а) на активность амилазы слюны влияют ионы водорода, хлора, меди; б) ионы хлора являются активаторами амилазы; в) ионы водорода и меди являются ингибиторами амилазы.

10. Правильны ли утверждения: а) о количестве фермента судят по производимому им действию; б) за единицу фермента принимают то его количество, которое обеспечивает превращение 1мкмоль субстрата или образование 1мкмоль продукта реакции в 1 мин при заданных условиях.

Раздел VII