Мегаобучалка Главная | О нас | Обратная связь

ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ (ФЛЮОРЕСЦЕНТНАЯ) МИКРОСКОПИЯ





Люминесцентная (флюоресцентная) микроскопия основана на способности некоторых веществ люминесцировать, т.е. светиться при освещении невидимым ультрафиолетовым или синим светом. Примером такого свечения являются известные всем лампы дневного света, в кото­рых в результате облучения ультрафиолетовыми лучами светится специальный состав—люминофор, покрыва­ющий изнутри колбу лампы.

Цвет люминесценции обычно смещен в более длинно­волновую часть спектра по сравнению с возбуждающим ее светом. Так, если люминесценция возбуждается синим светом, то цвет ее может быть от зеленого до красного, если люминесценция возбуждается невидимым ультрафи­олетовым излучением, то цвет ее может быть в любой части видимого спектра. Эта особенность люминесценции позволяет, используя специальные светофильтры, погло­щающие возбуждающий свет, наблюдать сравнительно слабое люминесцентное свечение.

Устройство люминесцентного микроскопа и правила работы с ним отличаются от обычного светового микро­скопа в основном следующим:

1. Наличие мощного источника света в осветителе, излучающего преимущественно в коротковолновой (уль­трафиолетовой, синей) части спектра (ртутно-кварцевая лампа сверхвысокого давления). В специальных люминес­центных осветителях, которые устанавливают на обычный микроскоп, применяют кварцевые галогенные лампы (КГМ).

2. Наличие системы светофильтров:

а) возбуждающие светофильтры пропускают только ту часть спектра, кото­рая возбуждает люминесценцию;

б) теплозащитный светофильтр защищает от перег­рева другие светофильтры, препарат и оптику люминес­центного микроскопа в отечественных люминесцентных микроскопах теплозащитную функцию кроме того выпол­няет кювета с плоскопараллельными стеклами, заполнен­ная дистиллированной водой. Эта кювета установлена непосредственно после коллектора.

При работе с люминесцентным микроскопом надо обращать особое внимание на то, чтобы эта кювета была полностью заполнена водой и чтобы вода была абсо­лютно чистой и прозрачной, поскольку при длитель­ной работе микроскопа в воде могут размножаться микро­организмы и она мутнеет;



в) «запирающие» светофильтры расположены между препаратом и окуляром. Эти светофильтры поглощают возбуждающее излучение и пропускают свет люминесцен­ции от препарата к глазу наблюдателя.

Рис.5

Схематическое изображение флуоресцентного микроскопа: 1. Дуговая лампа; 2. Кварцевый коллектор; 3. Кювета, заполненная раствором сернокислой меди; 4. Передняя часть коллектора; 5. Ультрафиолетовый фильтр; 6. Призма; 7. Пластинка из уранового стекла; 8. Окулярный фильтр, поглощающий ультрафиолетовые лучи

 

В нашей стране разработан очень эффективный способ освещения препаратов для возбуждения люминесценции, который используется во всех отечественных люминес­центных микроскопах. Этот способ заключается в том, что препарат освещают светом, падающим на него через объектив. Благодаря этому освещенность увеличивается при использовании объектов, имеющих большую число­вую апертуру, т. е. тех, которые используются для изучения микроорганизмов. Очень важную роль при этом способе освещения играет специальная интерференцион­ная светоделительная пластинка, направляющая свет в объектив и представляющая собой полупрозрачное зерка­ло, которое избирательно отражает и направляет в объек­тив только ту часть спектра, которая возбуждает люми­несценцию, а пропускает в окуляр только свет люминес­ценции.

Оптика объективов люминесцентного микроскопа изго­тавливается из нелюминесцирующих сортов оптического стекла и склеивается специальным нелюминесцирующим клеем. На оправе таких объективов выгравирована буква «Л». При работе с объективами масляной иммерсии при люминесцентной микроскопии пользуются специальным нелюминесцирующим иммерсионным маслом.

Правила настройки люминесцентного микроскопа под­робно изложены в инструкции к микроскопу.

Для изучения микроорганизмов в люминесцентном микроскопе их предварительно окрашивают (флюорохромируют) сильно разведенными растворами специальных люминесцирующих красителей (флюорохромов), которые избирательно связываются с определенными структурами клетки. Флюорохромы отличаются от обычных красите­лей тем, что применяются в очень малых концентрациях (до нескольких мкг/мл); кроме того, ими могут быть окрашены не только фиксироваванные, но и живые клетки. Люминесцентная микроскопия также используется для регистрации результатов реакции иммунофлюоресцеции (РИФ).

 





Читайте также:


Рекомендуемые страницы:


Читайте также:
Личность ребенка как объект и субъект в образовательной технологии: В настоящее время в России идет становление новой системы образования, ориентированного на вхождение...
Как распознать напряжение: Говоря о мышечном напряжении, мы в первую очередь имеем в виду мускулы, прикрепленные к костям ...

©2015-2020 megaobuchalka.ru Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. (1461)

Почему 1285321 студент выбрали МегаОбучалку...

Система поиска информации

Мобильная версия сайта

Удобная навигация

Нет шокирующей рекламы



(0.003 сек.)