Микрофлора лекарственного сырья и готовых лекарственных форм

    Обсемененность микробами растений, в том числе и лекарственных, может быть очень высокой и зависит от условий их произрастания, от характера растения, высоты стебля и других причин. Микрофлора растений, а, следовательно, растительного лекарственного сырья, чрезвычайно разнообразна. На поверхности растений обнаруживаются представители микрофлоры почвы, среди которых основное место занимают спорообразующие бактерии, актиномицеты и грибы.

    Особенно сильно заселяются микробами срезанные и сорванные растения, т.к. они являются лучшей питательной средой, чем живые растения. Среди микроорганизмов, встречающихся на растениях и в растительном лекарственном сырье, могут встречаться фитопатогенные виды, т.е. виды, вызывающие заболевания растений.

    Некоторые виды микроорганизмов, находящихся в лекарственном растительном сырье, обладающие сильной ферментативной активностью, могут при соответствующих условиях разрушать фармакологически активные вещества, тем самым, снижая ценность лекарства.

    Консервирование лекарственного сырья и условия его хранения оказывают существенное влияние на микробную обсемененность. При хранении в условиях повышенной влажности микроорганизмы не только более длительно сохраняют жизнеспособность, но могут размножаться и вызывать порчу лекарственного сырья. Порчу лекарственного сырья обнаруживают по изменению цвета высушенного растения, появлению очагов размножения плесени и др.

    Лекарственные препараты, изготовляемые в аптеках и на фармацевтических заводах, в той или иной степени обсеменены различными микроорганизмами. Количество микробов в лекарствах сильно варьирует в зависимости от ряда причин – от обсемененности лекарственного сырья, от формы препарата, от особенностей приготовления, от санитарного состояния аптечного учреждения. Известную роль в загрязнении изготовляемых лекарственных препаратов играет дистиллированная вода, посуда, пробирки, руки аптечных работников, а также воздух аптечных лабораторий.

    Стерильные инъекционные растворы могут обладать пирогенными свойствами (повышение температуры тела), что обусловлено наличием в них убитых бактерий и продуктов их распада.

    Среди готовых лекарственных форм наиболее обсемененными являются препараты растительного происхождения – настои и отвары. При хранении этих лекарств, особенно в теплом месте, количество микробов в них возрастает до высоких цифр и появляются признаки порчи: муть, пленка, изменение цвета, необычный запах.

    Бактерии обнаруживаются в настойках, растворах солей, а из порошкообразных препаратов особенно обсемененными являются тальк, крахмал, сахар.

    Для изучения микрофлоры, а также для определения степени обсемененности лекарств производят посев определенных объемов или навесок этих препаратов на МПА для определения микробного числа.

5.1. Определение микробного числа дистиллированной воды

    Для посева используют неразведенную воду и разведение в соотношении 1:10. В стерильные чашки Петри вносят по 1 мл дистиллированной воды, после чего заливают расплавленным и остуженным до 45°С МПА, быстро и тщательно перемешивая агар с водой. После  застывания агара чашки помещают в перевернутом виде в термостат при температуре 37°С на сутки, после чего производят учет результатов.

    Дистиллированная вода для приготовления инъекционных растворов не должна содержать бактерий.

5.2. Определение микробной обсемененности

растительного лекарственного сырья

    Для определения микробной обсемененности растительного лекарственного сырья берут 1 г сырья (или вырезают из листа или верхнего слоя корневища кусочек площадью 1 см²), помещают в пробирку с 10 мл физраствора (или дистиллированной воды) и взбалтывают в течение 5 минут. Из полученного смыва делают десятикратные разведения (1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000 и т.д.). В связи с большой обсемененностью растительного сырья, для посева используют только последние разведения. В стерильные чашки Петри вносят по 1 мл соответствующего разведения, заливают расплавленным и остуженным до 45°С МПА, быстро и тщательно перемешивая. После застывания агара чашки помещают в перевернутом виде в термостат при температуре 37°С на сутки, после чего производят учет результатов: подсчитывают количество выросших колоний и вычисляют обсемененность 1 г препарата или 1 см² поверхности листа или корневища.

5.3. Определение микробной обсемененности готовых лекарств

    а) Исследуемый отвар или настой (1 мл) разводят стерильным физраствором (или дистиллированной водой) в соотношении 1:10 и 1:100 и засевают на чашку с МПА для определения микробного числа.

    б) 1 г порошка или 1 таблетку или 1 пилюлю помещают в пробирку с 10 мл стерильного физраствора. После тщательного взбалтывания до растворения (или распадения) из исходного раствора или взвеси делают разведение в соотношении 1:10 и 1:100. Последнее разведение используют для посева на чашку с МПА для определения микробного числа.

    в) Готовые инъекционные растворы применяют неразведёнными. В чашку Петри с МПА делают посев 1 мл раствора.

    г) При бактериологическом исследовании глазных капель, их также засевают неразведёнными.

    Чашки с посевами помещают в термостат на сутки при 37°С, затем подсчитывают количество выросших колоний и вычисляют микробное число для жидких лекарственных форм и обсеменённость 1 г препарата.

Лекарственные неинъекционные средства должны также подвергаться бактериологическому исследованию на количество сапрофитных бактерий, дрожжевых и плесневых грибов, наличие бактерий кишечной группы, псевдомонад и стафилококков.

Образец для бактериологического исследования (10 г или 10 мл) должен быть взят не менее чем из 10 упаковок. Его разводят фосфатным буфером (рН 7,0) до объёма 50 мл (разведение 1:5). Затем 25 мл полученного раствора или суспензии разводят до 50 мл тем же буферным раствором (разведение 1:10); 1 мл этого разведения разводят ещё в 10 раз (разведение 1:100).

1. Для количественного определения сапрофитных бактерий на чашки Петри с МПА засевают по 0,5 мл разведений 1:10 и 1:100. Колонии подсчитывают через 48 часов после пребывания посевов в термостате при 37°С.

2. Для определения количества дрожжевых и плесневых грибов производят посев на чашки Петри со средой Сабуро по 0,5 мл разведения 1:5 и 1:10.

Раздельный подсчёт колоний дрожжеподобных и плесневых грибов производят через 5 суток пребывания посевов в термостате при 20-22°С.

3. Для обнаружения бактерий рода Proteus 0,5 мл разведения 1:10 вносят в конденсационную воду свежескошенного агара (посев по Щукевичу). При наличии ползучего роста через 24-48 часов выделяют чистую культуру и проводят её идентификацию.

4. Идентификацию энтеробактерий можно провести с помощью ПБДЭ.

5. Для выделения псевдомонад и стафилококков 1 мл разведения 1:10 вносят в накопительную среду и после инкубации в течение 24 часов при 37°С делают высев на соответствующие дифференциальные среды.

Питательные среды, используемые при бактериологическом исследовании лекарств.

Среда Сабуро: к 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 40 г глюкозы или мальтозы, 3,0% агара. Среду стерилизуют при 110°С в течение 30 минут.

Накопительная среда для выделения псевдомонад и стафилококков. В 1 л дистиллированной воды растворяют 5 г дрожжевого экстракта, 20 г казеинового гидролизата, 5 г хлорида натрия, 10 г пептона, 2 г глюкозы, 2,5 г двузамещённого фосфата натрия. Среду стерилизуют при 120°С в течение 15 минут.