Определение патогенных микроорганизмов

 

Обнаружение патогенной микрофлоры (сальмонелл, шигелл, листерий, иерсиний) проводят путем посева продукта в регламентированных нормативными документами количествах на соответствующие питательные среды.

 

Метод выявления бактерий рода Salmonella (ГОСТ 20358.4 - 91)

1 этап – неселективное предварительное обогащение. Навеску продукта (25 г) помещают в забуференную пептонную воду в соотношении 1:9. Посевы инкубируют при температуре 37°С 18-20 ч.

2 этап – селективное обогащение. Культуры, полученные после инкубирования, пересевают в 100 мл магниевой среды. Инкубируют 24-48ч.

3 этап – культуры пересевают на три дифференциально-диагностические среды: висмут-сульфитный агар, среду Плоскирева и среду Эндо. Инкубируют 24-48 ч при температуре 37°С.

После этого отмечают рост колоний, характерных для бактерий рода Salmonella. На висмут-сульфитном агаре колонии чёрные с характерным металлическим блеском; на среде Плоскирева колонии бесцветные и прозрачные; на среде Эндо колонии круглые бесцветные или слегка розоватые, прозрачные. При наличии хотя бы на одной из этих сред характерных колоний, проводят их дальнейшее изучение и дифференциацию на виды с помощью моноспецифических сывороток.

В продуктах массового потребления патогенные микроорганизмы, в том числе сальмонеллы, не допускаются.

Среды для обнаружения сальмонелл.

Магниевая среда. Готовят три раствора:

1. пептон – 4,2 г; хлорид натрия – 7,15 г; KH₂PO₄ – 1,43 г; дрожжевой диализат – 9 мл; дистиллированная вода – 890 мл

2. хлорид магния кристаллический – 35,7 г; дистиллированная вода – 90 мл

3. 0,1% водный раствор бриллиантового зелёного – 0,9 мл.

Все растворы смешивают, стерилизуют при 0,5 атм. 30 мин.

Висмут-сульфитный агар – выпускается в сухом виде. В состав среды входят: гидролизат рыбы или китовой муки, агар-агар, глюкоза, цитрат висмута, сульфит натрия, соль Мора, фосфат натрия, бриллиантовый зелёный, рН 7,6-7,8.

Среды Эндо и Плоскирева также выпускаются в сухом виде.

 

Среда Плоскирева

В состав среды входят: 53,6% сухого питательного агара с желчными солями; 14,4% цитрата натрия; 11% гипосульфита; 12% лактозы; 3,7% фосфата натрия; 0,03-0,06% нейтрального красного; 0,002% бриллиантового зелёного; 1,2% соды кальцинированной; 0,04% йода; 3,7% хлористого натрия.

 

 

Список литературы

 

1. Беляев Е.Н. Экспертиза пищевых продуктов (нормативные материалы). - Пермь, 1994. - 304с.

2. Волгарёв М.Н., Куваева И.Б. Медико-биологические требования и санитарные нормы качества продовольственного сырья и пищевых продуктов. - М.: Медицина, 1989. - 189с.

3. ГОСТ 10444.2-94 Метод выявления и определения количества St. aureus. - М., 1994. - 20с.

4. ГОСТ 10444.9-88 Метод выявления Cl. perfringens. - М., 1988. - 18с.

5. ГОСТ 10444.15-94 Метод определения МАФАнМ. - М., 1994. - 16с.

6. ГОСТ 20358.4-91 Метод выявления бактерий рода Salmonella. - М., 1991. - 27с.

7. ГОСТ 26669-85 Подготовка проб для микробиологических анализов. - М., 1985. - 16с.

8. ГОСТ 28560-90 Метод определения бактерий рода Proteus. - М., 1990. - 12с.

9. ГОСТ 30518-97 Методы выявления и количества определения бактерий группы кишечных палочек (колиформные бактерии). - М., 1997. - 11с.

10. Кашкарова Г.П. Микробиологический контроль питьевой воды // Жилищное и коммунальное хозяйство. - 1998. - №1. - С. 24-28.

11. Кочемасова З.Н., Ефремова С.А., Рыбакова А.М. Санитарная микробиология и вирусология. - М.: Медицина, 1987. - 352с.

12. Любашенко С.Я. Санитарная микробиология. - М.: Пищевая промышленность, 1980. - 352с.

13. Медицинская микробиология / Под ред. В.И. Покровского, О.К. Поздеева. - М.: ГЭОТАР-Медицина, 1999. - 1200с.

14. Медицинская микробиология, иммунология, вирусология / Под ред. Л.Б. Борисова, Л.Б. Смирновой. - М.: Медицина, 2001. - 528с.

15. Методы санитарно-микробиологического анализа питьевой воды. Методические указания. - М.: Информационно-издательский центр Минздрава России, 1997. - 36с.

16. Романенко Н.А., Новосильцев Г.И. Санитарно-паразитологические показатели качества питьевой воды // Стандарты и качество. 1995. № 11. С. 33-36.

17. Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология / Под ред. А.С.Лабинской, Е.Г.Волиной. - М.: БИНОМ, 2008. - Кн. 1. - 1077с.

18. СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества». - М., 2002. - 41с.

19. Сбойчаков В.Б. Санитарная микробиология. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 191 с.

20. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Биргера. - М.: Медицина, 1982. - 444с.

21. Синюшина М.Н., Самсонова М.Н. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. - М.: Медицина, 1974. - 165с.

 

Тесты

 

Для подготовки к зачету студентам можно рекомендовать следующие тесты:

 

1. Укажите основные признаки, которым должны отвечать СПМО:

1) постоянно выделяться в окружающую среду в достаточном

количестве из организма человека и теплокровных животных;

2) способны длительно выживать в окружающей среде;

3) способны к росту на простых средах;

4) способны к росту на сложных средах и к росту при температуре 20⁰С.

2. Какими ферментативными свойствами обладают ОКБ:

1) ферментируют глюкозу до кислоты и газа при температуре 37° - 44⁰С за 24 ч.;

2) ферментируют лактозу до кислоты и газа при температуре 37⁰С за 24 ч.;

3) ферментируют лактозу до кислоты и газа при температуре

37⁰ - 44⁰С за 24 ч.;

4) обладают оксидазной активностью.

3. Термотолерантными колиформными бактериями называют:

1) грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие оксидазной активностью, ферментирующие глюкозу до кислоты и газа за 24 ч. при температуре 37°С;

2) грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие оксидазной активностью, ферментирующие лактозу до кислоты и газа за 24 ч. при температуре 44°С;

3) мезофильные, грамположительные спорообразующие палочки

4. Какими ферментативными свойствами обладают термотолерантные колиформные бактерии?

1) ферментируют глюкозу до кислоты при температуре 37⁰С за 24 ч.;

2) ферментируют лактозу (глюкозу) до кислоты и газа при температуре 37⁰С за 72 ч.;

3) ферментируют лактозу до кислоты и газа при температуре 44⁰С за 24 ч.,

4) обладают оксидазной активностью.

5. К санитарно-показательным микроорганизмам относят:

1) общие колиформные бактерии;

2) термотолерантные колиформные бактерии;

3) колифаги;

4) гемолитические стрептококки.

6. При оценке качества питьевой воды централизованного водоснабжения определяют следующие микробиологические показатели:

1) ОМЧ;

2) ОКБ;

3) термотолерантные колиформные бактерии;

4) холерные вибрионы.

7. Укажите нормативы качества питьевой воды централизованного водоснабжения по ОМЧ в соответствии с ГОСТ:

1) не более 10 КОЕ;

2) не более 50 КОЕ;

3) не более 100 КОЕ.

8. Нормативы качества питьевой воды централизованного водоснабжения предусматривают отсутствие спор сульфитредуцирующих клостридий в:

1) 20 мл;

2) 100 мл;

3) 1000 мл.

9. При определении в питьевой воде колиформных бактерий преимущество отдают методу исследования:

1) микроскопическому;

2) титрационному;

3) прямому посеву на среду Эндо;

4) мембранной фильтрации.

10. Какие питательные среды используют при определении колиформных бактерий в питьевой воде?

1) среда Эндо;

2) лактозопептонная среда (ЛПС)

3) Кесслер;

4) Китт-Тароцци.

11. Бактериальная обсемененность воздуха закрытых помещений больше:

1) зимой;

2) весной;

3) летом;

4) осенью.

12. Общая бактериальная обсемененность воздуха – это суммарное количество мезофильных микроорганизмов, содержащихся в:

1) 1 м³;

2) 100 см³;

3) 1 см³.

13. Назовите объект окружающей среды, наиболее значимый в распространении вирусов и инфицировании ими людей:

1) атмосферный воздух;

2) воздух закрытых помещений;

3) питьевая вода и поверхностные водоемы;

4) почва.

14. Назовите санитарно-показательные микроорганизмы почвы:

1) золотистый стафилококк;

2) колиформные бактерии;

3) энтерококки

15. Укажите микроорганизмы, которые попадают в почву с выделениями человека и животных и дольше всех в ней сохраняются:

1) энтерококки;

2) БГКП;

3) патогенные энтеробактерии.

16. При санитарном анализе почвы определяют все показатели, кроме:

1) общего количества сапрофитов;

2) колиформных бактерий;

3) энтерококков;

4) патогенных энтеробактерий;

5) энтеровирусов

17. Каков характер загрязнения почвы при наличии в ней большого количества энтерококков и колиформных бактерий:

1) свежее фекальное;

2) давнее фекальное;

3) органическое.

18. Плановое бактериологическое исследование объектов внешней среды ЛПУ не предусматривает выявление:

1) общей микробной обсемененности;

2) золотистого стафилококка;

3) синегнойной палочки;

4) микроорганизмов семейства энтеробактерий.

19. При текущем санитарном надзоре за предприятиями общественного питания и торговли исследование смывов проводят на присутствие:

1) колиформных бактерий;

2) золотистого стафилококка;

3) протеев;

4) сальмонелл.

20. Укажите микроорганизмы, для которых предметы обихода могут служить фактором передачи:

1) микобактерии;

2) сальмонеллы;

3) шигеллы

21. Наиболее длительно на предметах окружающей среды сохраняются:

1) сальмонеллы;

2) шигеллы;

3) споры бацилл.

22. Объектами исследования при проведении бактериологического контроля в ЛПУ на стерильность служат:

1) хирургические инструменты;

2) шприцы, иглы, зонды;

3) прикроватные тумбочки;

4) пищевые продукты.

23. Могут ли в воздухе операционной присутствовать единичные стафилококки?

1) да (в небольшом количестве)

2) нет.

24. Микробиологический контроль качества пищевых продуктов включает

определение

1) МАМ и ФАнМ;

2) колиформных бактерий;

3) золотистых стафилококков;

4) сульфитредуцирующих клостридий.

25. Определение дрожжей и плесеней регламентировано в следующих пищевых продуктах:

1) мясо и мясные продукты;

2) рыба и рыбные продукты;

3) молоко и молочные продукты;

4) мучные кондитерские изделия;

5) конфеты, шоколад, какао.

26. Укажите микроорганизмы, способные размножаться в пищевых продуктах при хранении в условиях холодильника:

1) эшерихии;

2) иерсинии;

3) псевдомонады;

4) листерии.

27. Назовите возбудителей пищевых токсикоинфекций:

1) протеи;

2) стафилококки;

3) нейссерии;

4) микрококки.

28. Молоко и молочные продукты – один из основных факторов передачи человеку всех инфекций, кроме:

1) сальмонеллезов, шигеллезов;

2) бруцеллеза;

3) сыпного тифа;

4) ящура, лихорадки Ку.

29. Может ли передаваться с молоком возбудитель туберкулеза?

1) да;

2) нет.

30. Мясо сырое при бактериоскопии считают несвежим, если в мазках-отпечатках в поле зрения обнаруживают:

1) менее 10 микроорганизмов

2) 10-30 микроорганизмов

3) более 30 микроорганизмов