В микробиологической лаборатории

 

1. Заходить и работать в лаборатории можно только в

спецодежде.

2. В лабораторию нельзя вносить посторонние вещи,

продукты питания.

3. За каждым студентом закрепляется рабочее место

и микроскоп.

организмов в диапазоне от 28 до 43С.

290

ТЕМА 1

 

4. Без разрешения преподавателя нельзя включать

электроприборы.

5. Студент должен поставить в известность преподавате-

ля при загрязнении предметов окружающей среды инфи-

цированным материалом для немедленной дезинфекции.

6. После окончания работы весь исследуемый матери-

ал, использованные бактериальные культуры, инстру-

менты поместить в биксы для стерилизации и отдать

преподавателю.

7. При уходе из лаборатории необходимо снять спе-

цодежду, тщательно вымыть руки, при необходимости

руки обработать дезраствором.

8. Каждый студент должен расписаться в специаль-

ном журнале о знании правил техники безопасности.

 

Оборудование микробиологической лаборатории

 

Каждая бактериологическая лаборатория должна

быть оснащена следующим оборудованием.

Микроскопы — оптические, люминесцентные, осве-

тительные приборы.

Термостаты — в них автоматически поддерживает-

ся температура, оптимальная для выращивания микро-

 

Электрический сушильный шкаф и автоклав пред-

назначены для стерилизации лабораторной посуды, пи-

тательных сред и спецодежды.

Холодильники и морозильные камеры используют для

хранения питательных сред, музейных бактериальных

культур, биопрепаратов, а также исследуемого материала.

Центрифуги предназначены для осаждения микроор-

ганизмов, эритроцитов, для отделения прозрачного экс-

тракта из исследуемого продукта. Дистиллятор — для

получения дистиллированной воды, на которой готовят

физиологический раствор, питательные среды, рабочие

растворы красок; автоматические водяные бани, анали-

тические и торзионные весы, колба Бунзена с вмонтиро-

ванным фильтром Зейтца, керамические фильтры Шам-

берляна, Беркефельда и вакуумный насос.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ

291

 

Лабораторная посуда — колбы, бактериологиче-

ские, серологические и уленгутовские пробирки, чашки

Петри, автоматические пипетки, стеклянные градуи-

рованные и пастеровские пипетки, мерные цилиндры.

Мелкие металлические инструменты: бактериологиче-

ские петли, пинцеты, скальпели, ножницы.

 

 

1.1. СВЕТОВОЙ МИКРОСКОП, ЕГО
        УСТРОЙСТВО И ПРАВИЛА РАБОТЫ

 

Оптические микроскопы позволяют исследовать ми-

кроорганизмы в проходящем свете. Такие микроскопы

состоят из механической и оптической частей (рис. 2).

 

 

Рис. 2

Микроскоп МБР-1:

1 — основание микроскопа; 2 — предметный столик; 3 — винты для

перемещения предметного столика; 4 — клеммы, прижимающие

препарат; 5 — конденсор; 6 — кронштейн конденсора; 7 — винт,

укрепляющий конденсор в гильзе; 8 — рукоятка перемещения

конденсора; 9 — рукоятка ирисовой диафрагмы конденсора;

10 — зеркало; 11 — тубусодержатель; 12 — макрометрический винт;

13 — микрометрический винт; 14 — револьверное устройство для

объективов; 15 — объективы; 16 — наклонный тубус;

17 — винт для крепления тубуса; 18 — окуляр.

бактерий в препарате «висячая капля»;

поиска объекта;

личение, даваемое объективом:

диафрагма. На окуляре имеются цифровые обозначения

 

 

 

292

ТЕМА 1

 

Механическая часть включает штатив с предметным

столиком (2) и тубус (16). Предметный столик с помощью

винтов может перемещаться в горизонтальной плоско-

сти. Он имеет две клеммы, прижимающие предметное

стекло к столику. Тубусодержатель (11) может переме-

щаться с помощью макро- (12) и микровинта (13), пред-

назначенных соответственно для грубой и точной фоку-

сировки изучаемого объекта. Микровинт относится к

наиболее уязвимым деталям микроскопа, поэтому с ним

нужно обращаться особенно осторожно. Полный оборот

микровинта поднимает или опускает тубус на 0,1 мм.

В верхней части тубусодержателя находится револь-

верное устройство, вращающееся вокруг своей оси (14),

в отверстия которого ввинчены объективы (15). В верх-

ний конец тубуса вставляется окуляр (18).

Оптическая часть состоит из объективов, окуляров и

осветительного аппарата.

Окуляр вставляется в верхний конец тубуса. Он со-

стоит из двух линз в оправе, между которыми помещена

 

(7, 10, 15), показывающие степень увеличения изо-

бражения.

Объективы представляют собой системы оптических

линз. Только одна линза — фронтальная — выполняет

функцию увеличения, остальные корректирующие. На

объективах имеются обозначения, показывающие уве-

 

8 — объектив применяют для наведения света и

 

40 — объектив применяют для изучения микро-

скопических грибов, дрожжей и подвижности

 

90 — объектив применяют для изучения бакте-

рий под иммерсией.

Объективы, дающие увеличение в 8 и 40 раз, называ-

ются сухими, так как при работе с ними между объекти-

вом и препаратом находится слой воздуха, коэффициент

преломления которого равен 1,0, а коэффициент пре-

ломления стекла равен 1,52. Из-за этой разницы часть

В рассматриваемом микроскопе объектив с увеличе-

в объектив, но освещение при этом не ухудшается, так

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ

293

 

боковых лучей преломляется и отклоняется, не попадая

 

как диаметр линз 8 и 40 объективов достаточно велик.

Иммерсионным называется объектив, при работе с

которым между препаратом и объективом помещают ка-

плю иммерсионного масла. Иммерсионное масло имеет

оптический коэффициент преломления (1,51), близкий

к коэффициенту преломления стекла, благодаря этому

световые лучи, проходя через однородную среду, не от-

клоняются от своего направления, попадают на линзу

объектива и создают хорошее освещение.

 

нием в 90 раз является иммерсионным. Иммерсионный

объектив применяется при изучении бактерий.

Общее увеличение, которое дает микроскоп, равня-

ется произведению степени увеличения объектива на

показатель окуляра. В учебном процессе удобнее приме-

нять 10 кратный окуляр, дающий оптимальный обзор

поля зрения. Следовательно, при изучении под иммер-

сионным объективом микроорганизмы будут увеличены

в 900 раз.

Четкость получаемого изображения зависит от раз-

решающей способности микроскопа — способности раз-

дельно рассматривать две близко расположенные точки,

расстояние между которыми равно половине длины све-

товой волны. Рассматриваемый нами микроскоп имеет

разрешающую способность около 0,2–0,3 мкм. Из этого

следует, что микроорганизмы величиной менее 0,2 мкм

в данном микроскопе не видны.

Осветительный аппарат состоит из конденсора (5),

зеркала (10) и ирисовой диафрагмы. Осветительный ап-

парат предназначен для наилучшего освещения объекта.

С помощью зеркала лучи света, исходящие от источника

света, направляются в конденсор, концентрирующий

лучи в своем фокусе. Поверхность зеркала с одной сто-

роны плоская, с другой — вогнутая. При естественном

освещении лучше применять вогнутую поверхность зер-

кала, при искусственном освещении (осветитель) — пло-

скую.

5. Визуально контролируя, осторожно опустить объ-

парата.

предметного столика;

кроскопа, для этого необходимо:

294

ТЕМА 1

 

Конденсор с ирисовой диафрагмой представляет со-

бой систему оптических линз и служит для концентра-

ции отраженных зеркалом лучей света. При опускании
конденсора при помощи винта (7) поле зрения несколько

затемняется, при поднятии — освещается. Ирисовая ди-

афрагма помещается под конденсором, служит для регу-

лирования потока света, которое осуществляется с помо-

щью рычажка — расширением или сужением диаметра

отверстия, пропускающего свет к конденсору.

Выпускаются также дополнительные приспособле-

ния, которые позволяют максимально использовать все

возможности микроскопа и значительно расширяют ди-

апазон применения: фазово-контрастные приспособле-

ния, осветители, окуляр-микрометр и объектив-микро-

метр для измерения размеров микроорганизмов.