ПРОСТОЙ МЕТОД ОКРАШИВАНИЯ

 

При простом методе окрашивания применяется одна

краска. Этот метод позволяет установить наличие или

отсутствие бактерий в исследуемом материале, а также

изучить их морфологию (форму, взаиморасположение).

Поэтому любой мазок вначале окрашивают простым ме-

тодом.

В качестве исследуемого материала на лабораторном

занятии можно использовать взвесь чистой культуры

кишечной палочки, стафилококка, находящейся в про-

бирке, или свой зубной налет, взятый спичкой и распре-

деленный на предметном стекле. Приготовление препа-

рата из зубного налета и изучение его под микроскопом

очень интересно и полезно. Студенты, впервые знако-

мясь с нормальной микрофлорой зубного налета, увидев

такую массу микробов, испытывают шок, стыд и жела-

ние уничтожить их. Только изучив полный курс микро-

биологии, они поймут, что нормальная микрофлора име-

ет защитное значение, а если ее уничтожить, поселятся

микроорганизмы, несвойственные для этой полости (на-

пример, дрожжи, вызывающие кандидамикоз-молоч-

ницу). В микрофлоре зубного налета здорового человека

должны быть представлены все морфологические груп-

пы бактерий, т. е. микрофлора зубного налета должна

быть обязательно полиморфной: микрококки, стрепто-

кокки, стафилококки, извитые и нитевидные формы,

молочнокислые палочки, дрожжи и т. д. Приготовление

препарата из зубного налета и изучение его — это еще

и дань памяти «первому охотнику за микробами» Анто-

нио Ван Левенгуку, который первым заглянул в этот не-

видимый мир, описал его и воскликнул: «Боже мой, да

их больше, чем людей во всем Английском королевстве»

(1695).

Методика простого окрашивания заключается в том,

что на фиксированный мазок наносят одну краску, 3–5

капель:

а) щелочную метиленовую синь — на 5 мин;

б) разведенный фуксин — на 3 мин.

3. Наносят несколько раз строго в центр мазка эти-

1. На фиксированный мазок накладывают сухой ку-

302

ТЕМА 2

 

Затем краску смывают водой, препарат высушивают

фильтровальной бумагой и наносят на него одну каплю им-

мерсионного масла, после чего изучают под микроскопом.

Морфология бактерий — первый признак, который

изучают для определения вида микроорганизмов.

 

СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАШИВАНИЯ

 

Сложные методы окрашивания позволяют устано-

вить наличие спор, капсул и внутриклеточных включе-

ний. Различные виды бактерии имеют разный химиче-

ский состав и отличаются по строению клеточной стенки,

поэтому неодинаково воспринимают окрашивание ани-

линовыми красками. Отношение микроорганизмов к

различным красителям называют тинкториальными

свойствами. По отношению к различным красителям

все бактерии разделены на две группы: грамположи-

тельные и грамотрицательные.

Методика окрашивания по Граму состоит в следующем.

 

сочек фильтровальной бумаги (11 см), заранее пропи-

танный раствором генцианвиолета (в модификации по

А. В. Синеву) и наносят 2–3 капли воды на 2 мин. Все

бактерии независимо от вида окрашиваются в фиолето-

вый цвет. Затем фильтровальную бумагу с генцианвио-

летом удаляют.

2. Наносят несколько капель раствора Люголя (в этом

растворе имеют значение ионы йода) на 2 мин, затем

раствор стряхивают. С ионами йода только грамположи-

тельные бактерии образуют прочный комплекс.

 

ловый спирт 96 — в результате обесцвечивания про-

исходит дифференциация, только грамотрицательные

бактерии обесцвечиваются. Этот этап очень важный, по-

этому предметное стекло лучше держать в руках, а не на

мостике, чтобы спирт не стекал в уголок стекла. Через

40–50 с спирт смыть водой.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ КРАСКИ

303

 

4. Обесцвеченные бактерии дополнительно окраши-

вают разведенным фуксином — 3 мин, затем краску

смывают водой. Препарат высушивают фильтровальной

бумагой и микроскопируют под иммерсионным объек-

тивом.

Микрокартина: грамположительные бактерии окра-

шены в фиолетовый, а грамотрицательные — в розовый

цвет.

Суть окрашивания по Граму заключается в том, что

компоненты грамположительных бактерий образуют

прочный комплекс с генцианвиолетом в присутствии

ионов йода, который при воздействии спиртом не вымы-

вается через узкие поры в толстом слое пептидогликана,

поэтому бактерии остаются фиолетовыми. Грамотрица-

тельные бактерии имеют другой химический состав и

строение клеточной стенки, поэтому при действии спир-

том генцианвиолет вымывается через широкие поры в

клеточной стенке, бактерии обесцвечиваются, принима-

ют цвет дополнительного красителя и становятся крас-

ными.

Примечание: шаровидные бактерии почти всегда

грамположительные, бациллы и клостридии в молодой

культуре всегда грамположительные, бактерии кишеч-

но-тифозного семейства и извитые формы — грамотри-

цательные.

Отношение бактерий к окраске по Граму является

вторым признаком для определения вида бактерий.

 

ЗАДАНИЯ