БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ КРАСКИ

 

Цель занятия. Ознакомиться с основными бактериологи-

ческими красками. Овладеть методикой приготовления маз-

ка-препарата и окрашивания его простым методом. Овладеть

сложными методами окрашивания — окраска по Граму.

Материалы и оборудование. Набор сухих бактериологиче-

ских красок в заводской упаковке. Набор рабочих растворов

красок во флаконах — для простого метода окрашивания: ме-

тиленовая синь, разведенный фуксин; набор красок для окра-

ски по Граму, спиртовки, предметные стекла; сенная палочка

в сенном настое или непатогенная кишечная палочка в МПБ;

бактериологические петли, банки с дезраствором, спички;

пробирки со смесью взвеси кишечной палочки и стафилококка

в физрастворе для окраски по Граму; комплект микроскопов,

иммерсионное масло.

Таблицы. Основные формы бактерий. Микрофлора зубного

налета. Окраска по Граму.

 

 

Исследуемый материал в бактериологии

 

1. В санитарной бактериологии — продукты живот-

ного происхождения и продукты питания: молоко, мясо,

консервы, яйца, рыба и т. д.

2. В ветеринарной и медицинской микробиологии:

для прижизненной диагностики — кровь, гной, выделе-

ния; для посмертной диагностики — кусочки паренхи-

матозных органов.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ КРАСКИ

299

 

Все работы ведутся в условиях бокса над пламенем

спиртовки, чтобы исключить загрязнение исследуемого

материала и окружающей среды. Исследуемый матери-

ал берут в объеме бактериологической петли и наносят

на предметное стекло, которое должно быть чистым

и обезжиренным. Капля воды, нанесенная на хорошо

обезжиренное стекло, растекается равномерно, на плохо

обезжиренном — собирается в капельки.

 

2.1. ВИДЫ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ
        КРАСОК

 

Оптическая плотность неокрашенных бактерий не-

значительно отличается от оптической плотности сте-

кла, поэтому при изучении морфологии бактерий под

микроскопом для повышения контрастности их окра-

шивают анилиновыми красками.

Анилиновые краски плохо растворяются в воде, поэто-

му вначале готовят насыщенные спиртовые растворы кра-

сок (1:10), из которых затем готовят рабочие водные рас-

творы. В некоторые растворы красок добавляют щелочь,

карболовую кислоту (фенол) для повышения проницаемо-

сти красок в клеточную стенку бактерий. В бактериологи-

ческой практике чаще применяют следующие краски.

Щелочная метиленовая синь — применяют для про-

стого метода окрашивания, она всегда должна находить-

ся на столе у бактериолога.

Карболовый основной фуксин Циля — концентриро-

ванная краска применяется при окрашивании трудно

прокрашивающихся бактерий, таких как возбудитель

туберкулеза, споры бактерий (краска красного цвета).

Разведенный фуксин — это фуксин Циля, разведен-

ный дистиллированной водой 1:10, применяется для

простого метода окрашивания или как один из компо-

нентов окраски по Граму. Краску готовят перед приме-

нением, используют в течение одного рабочего дня.

300

ТЕМА 2

 

Карболовый генцианвиолет — применяют как основ-

ной краситель при окраске по Граму.

Методика приготовления препарата для микроско-

пии состоит из нескольких этапов.

1. Приготовление мазка. Для этого на предметном стек-

ле с обратной стороны карандашом по стеклу обводят

круг диаметром 2–3 см. Жидкий исследуемый материал

берут петлей и распределяют на предметном стекле в об-

ласти круга, а микробную культуру с поверхности плот-

ной питательной среды снимают бактериальной петлей

и растирают на предметном стекле в капле заранее нане-

сенной воды. Из кусочков паренхиматозных органов дела-

ют мазки-отпечатки (местом свежего среза прикасаются к

предметному стеклу, делая несколько отпечатков). Обяза-

тельное условие — мазок должен быть тонким.

2. Высушивание мазка — на воздухе при комнатной

температуре, для ускорения можно сушить в потоке те-

плого воздуха высоко над спиртовкой.

3. Фиксация мазка — преследует две цели: прикрепить

бактерии к предметному стеклу и убить их, так как уби-

тые микробы лучше окрашиваются (а заодно и обезопасить

бактериолога, так как среди исследуемых бактерий могут

быть и патогенные). Фиксацию мазков проводят одним из

двух способов: физическим или химическим.

Физический метод фиксации заключается в мед-

ленном трехкратном проведении предметного стекла с

мазком через наиболее горячую часть пламени в общей

сложности 2–3 с, в зависимости от толщины стекла (дер-

жать мазком вверх!). Если стекло при прикосновении к

руке горячее, значит, цель достигнута — микробы уби-

ты. Не следует перегревать мазок, иначе произойдет де-

формация формы клеток.

При химическом методе фиксации препарат-отпеча-

ток погружают в метиловый спирт на 5 мин или в смесь

равных объемов спирта и эфира на 10–15 мин. Этот метод

фиксации мягкий и щадящий, рекомендуют применять

для препаратов, приготовленных из крови или паренхи-

матозных органов, а также из сметаны и сливочного ма-

сла, так как эфир обезжиривает препарат.

4. Окраска мазка — простым или сложным методом.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ КРАСКИ

301